全覆膜金属支架治疗内镜乳头括约肌切开术后出血的疗效

EST是ERCP检查中常用的诊断与治疗操作,EST术后乳头切缘出血发生率为2％～9％[1-2].内镜下止血是其首选治疗方案.如内镜下治疗不能控制出血,则需行动脉栓塞和外科开腹手术治疗,增加了患者创伤和经济负担.目前临床上常用的内镜下控制EST术后出血的方法是金属夹夹闭出血灶和黏膜下注射肾上腺素[3-4].但这两种治疗方法均难以控制EST术后活动性出血,因此,临床上需要更简便有效的内镜下止血措施.近年来,笔者应用全覆膜自膨式金属支架（full covered self-expandable metal stents,FCSEMS）控制EST术后出血,取得了一定的效果.本研究回顾性分析2012年1月至2013年2月成都军区总医院应用FCSEMS治疗4例EST术后出血患者的临床资料,探讨EST术后出血治疗的新方法.     

整合素β_3与汉坦病毒囊膜糖蛋白在RRS系统中的相互作用

目的:采用RRS酵母双杂交系统,研究人整合素β3与汉坦病毒囊膜糖蛋白的相互作用,进一步揭示汉坦病毒入胞机制.方法:大量制备前期构建的β3-pYesM△PolyA、 G1-Met和G2-Met质粒,共转染至酵母温度敏感株cdc25-2,进行双杂交鉴定.结果:双杂交结果表明,β3可与汉坦病毒囊膜糖蛋白G2在酵母菌中相互作用,而不与G1相互作用.结论:在汉坦病毒与整合素β3受体相互作用的过程中,汉坦病毒囊膜糖蛋白G2可能起到主要作用.     

汉滩病毒核蛋白部分片段与囊膜糖蛋白G1在昆虫细胞中的融合表达

目的　应用Bac -to -Bac杆状病毒表达系统融合表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白部分片段。方法　构建含有汉滩病毒G1S0 7嵌合基因的杆状病毒表达载体 pFBD -G1S0 7,转化DH10Bac致敏菌 ,利用其含有的细菌Tn7转座系统将嵌合基因重组至穿梭质粒Bacmid上 ,快速筛选出含有G1S0 7嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达该融合蛋白 ,利用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹对表达产物进行检测。结果　构建的含G1S0 7嵌合基因之重组杆状病毒可在昆虫细胞中表达出融合蛋白 ,该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1特异性单抗所识别 ,表达产物主要集中在细胞内。结论　在昆虫细胞中表达出具有生物学活性的G1S0 7融合蛋白 ,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础     

汉滩病毒S、M基因部分片段嵌合基因原核载体的构建及表达产物的鉴定

目的：将汉滩病毒核蛋白(NP）主要抗原位点活性片段与囊膜糖蛋白G2进行融合原核表达及鉴定，为该融合蛋白的真核表达及汉滩病毒基因工程疫苗研究打基础。方法：构建了汉滩病毒76－118株M基因G2片段与S基因5'端700bp片段的嵌合片段原核表达载体pGEX-4T1-G2S0.7，诱导表达相应的融合蛋白，用Western blotting和ELISA 方法进行鉴定。结果：酶切结果显示成功构建了原核表达载体pGEX-4Tl-G2S0.7。IPTG诱导表达4h后，Western blotting显示诱导出分子量约100kD的含GST的融合蛋白（GST－G2N0.7)。ELISA结果表明该融合蛋白与抗汉坦病毒NP特异性McAb有较高的结合活性（P／N值为0．71／0．07），与抗汉滩病毒蛋白特异性McAb也有较弱的结合活性（P／N值为0．21／0．08）。结论：S、M基因拼接方式是成功的，能够表达出有活性的汉滩病毒G2糖蛋白与NP片段的融合蛋白。     

针状刀乳头括约肌切开术后延迟性出血的内镜治疗

延迟性出血是内镜乳头括约肌切开术（EST）后常见且严重的并发症,保守治疗效果不佳,应早期内镜下止血。近5年我科在3649例EST中用针状刀切开法712例,发生延迟性出血25例,其中24例通过内镜下止血成功。     

人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因在Sp2／0细胞中的初步表达

目的 在前期工作的基础上,进一步将人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因转染到鼠骨髓瘤细胞Sp2/0并进行初步表达。方法 将含人源性NHFRS本轻链基因的真核表达载体VkEpSV-neo,用脂质体法转染鼠骨髓瘤细胞Sp2/0,用RT－PCR法和免疫组化法染色法检测转染及表达结果。结果 RT－PCR和免疫组化染色结果表明人源性抗HFRS病毒抗轻链基因不仅已成功地转染进Sp2/0细胞,并得到了良好的表达。结论 在鼠骨髓瘤细胞Sp2/0中成功表达人源性抗HFRS病毒抗体轻链基因,对抗HFRS病毒抗体人源化的研究具有重要意义。     

扩增鼠源性mAb和人源性抗体k轻链基因中引物的作用

目的 比较扩增鼠源性mAb和人源性抗体Vk基因中引物的作用。方法 从5株抗HFRS病毒鼠源性mAb杂交瘤细胞系和人PBL中提取细胞总RNA。逆转录后,用不同的引物进行PCR扩增,克隆后测定核苷酸序列并比较不同引物的作。结果 5株mAb杂交瘤细胞的Vk基因及人源性抗体的Vk基因,需采用不同的引物组合才可得到。结论 5‘端引物在PCR扩增抗体Vk基因中起重要作用。     

汉滩病毒G1S0.7嵌合基因重组腺病毒的构建及鉴定

目的在本室前期工作的基础上构建汉滩病毒M基因G1片段与S基因0.7kb片段嵌合基因的重组腺病毒。方法构建含有汉滩病毒G1S0.7嵌合基因的转移载体pShuttle-G1S0.7，然后通过特异性的酶切将嵌合基因与腺病毒DNA相连，电转化E.coli JM109，获得重组腺病毒Adeno-G1S0.7 DNA，转染HFX293细胞得到重组腺病毒。进一步对重组腺病毒的滴度和表达产物进行鉴定。结果构建的含G1S0.7嵌合基因的重组腺病毒，滴度可达10^13～10^15 PFU／L；该重组腺病毒感染Vero-E6细胞后，表达出可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1的特异性单抗（mAb）所识别的融合蛋白。结论利用腺病毒表达系统，成功地表达同时具有核蛋白及糖蛋白G1生物学活性的融合蛋白，为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。     

汉坦病毒嵌合基因G2S0.7与CTL多表位重组腺病毒的构建及免疫学分析

目的:构建含有汉坦病毒M基因(编码糖蛋白G2)和部分S基因(编码核蛋白主要抗原区段)以及S基因的多个CTL表位的多种重组腺病毒表达载体,并对这些重组腺病毒的免疫学特性进行研究。方法:构建含目的基因的重组腺病毒载体,并在VeroE6细胞中进行表达,利用纯化后的重组腺病毒免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、微量细胞中和试验、T淋巴细胞增殖实验及CTL杀伤实验等方法检测免疫反应。结果:成功表达出可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G2的特异性单克隆抗体(mAb)所识别的融合蛋白;重组的腺病毒可以有效诱导针对汉坦病毒NP及GP的体液免疫应答和细胞免疫应答;同时我们发现含有CTL表位的重组腺病毒比不含CTL表位的重组腺病毒可以诱导小鼠产生更为有效的细胞免疫反应。结论:构建的含CTL多表位的重组腺病毒可以有效的提高嵌合基因刺激细胞免疫应答的能力。     

汉坦病毒疫苗研究进展

汉坦病毒可引起HFRS和HPS两类急性传染性疾病,临床尚缺乏特异有效的治疗方案。我国是世界上受HFRS影响最严重的国家,因此针对汉坦病毒的疫苗研究工作任务紧迫。本文将对目前国内外汉坦病毒疫苗研究进展,特别是我国工作者的研究工作予以概括。