无血清培养肾癌干细胞及其鉴定

背景：肿瘤干细胞理论的产生,对肿瘤的发生、发展及其发病机制有了更新的认识,为肿瘤研究提供了新的方向,通过无血清培养技术已从许多肿瘤中分离并鉴定出特定的肿瘤干细胞。目前,无血清培养已成为培养肿瘤干细胞的经典培养方法。 目的：运用无血清培养的方法从肾癌细胞中获取肾癌干细胞,并进行鉴定。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-02/2009-02在江苏大学完成。 材料：肾癌细胞株OS-RC-2由上海中科院细胞库提供。 方法：取处于对数生长期的肾癌细胞OS-RC-2,悬浮于预先配好的DMEM/F12无血清培养基中(含表皮生长因子20 μg/L,碱性成纤维细胞生长因子20 μg/L),观察生长情况,培养7 d后运用流式细胞仪测定CD133及CD34的表达。以不含细胞因子的高糖DMEM/F12培养液培养细胞作为阴性对照。另外收集无血清培养7 d的肾癌细胞球,重悬于含体积分数为10%胎牛血清的高糖DMEM/F12培养基中,进行干细胞分化实验观察。 主要观察指标：①倒置显微镜下观察肾癌干细胞生长情况。②流式细胞仪检测肾癌干细胞及肾癌细胞中CD133及CD34的表达。③收集无血清培养7 d后的肾癌干细胞重新常规培养并观察其分化情况。 结果：①肾癌细胞接种于含细胞因子的无血清培养基2 d后可见有细胞球生成,7 d后细胞球明显增多,体积增大。对照组肾癌细胞则贴壁生长,未见细胞球生成。②流式细胞仪检测显示,肾癌细胞球中CD133+CD34-表达率(8.33±1.26)%,对照组肾癌细胞表达率(1.24±0.36)%(t =-19.71,P < 0.05)。③肾癌细胞球重新悬浮于含体积分数为10%胎牛血清的培养液2 d后可见细胞球分散为单个细胞,恢复原来贴壁生长特点,CD133及CD34表达与阴性对照相同。 结论：利用含细胞因子表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子无血清培养的方法可以从肾癌细胞中获取肾癌干细胞。     

肺栓塞30例临床诊治体会

目的 总结肺栓塞(PE)患者的临床表现、诊治体会,减少误诊率,提高治疗效果.方法 对30例PE患者的临床资料行回顾性分析.结果 肺栓塞患者临床表现多种多样,及时溶栓和抗凝治疗取得了良好的效果.结论 肺栓塞的临床症状、体征不典型,误诊率高,应提高对肺栓塞的警惕性,早诊断、早治疗是当务之急.     

家用无创呼吸机优化管理对改善慢性阻塞性肺疾病患者肺功能的效果

目的探讨家用无创呼吸机优化管理对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺功能的改善效果,为COPD治疗提供依据。方法选取杭州市老年病医院2019年1—6月收治的病情稳定的67例出院COPD患者作为研究对象,随机分为研究组34例和对照组33例。对照组进行常规的家用呼吸机管理模式,研究组进行家用呼吸机优化管理模式,比较两组患者的依从性、呼吸机使用时机、肺通气功能、6 min步行试验及生活质量水平。采用SPSS 23.0统计软件对数据进行分析,组间比较用t检验、χ²检验和秩和检验。结果研究组患者家用呼吸机使用时机以夜晚为主,每日使用呼吸机持续时间、使用方法更规范和依从性明显升高,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组实施家用呼吸机优化管理后,用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV₁)、FEV₁/FVC、6 min步行试验(6MWD)、氧分压(PaO₂)均明显高于对照组,二氧化碳分压(PaCO₂)、慢性阻塞性肺疾病评估测试(CAT)评分均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论家用呼吸机优化管理模式可提高COPD患者无创通气依从性,改善其肺功能、运动水平及生活质量,在COPD患者无创通气治疗中具有积极意义,可在临床上进行推广应用。     

无血清悬浮培养肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达

背景:有研究表明端粒酶活性抑制剂不仅能抑制或杀死肾癌细胞,而且对决定肾癌发生发展的干细胞也有作用.目的:观察无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达情况,并与含血清培养的肾癌细胞作比较.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-0612009-02在江苏大学完成.材料:手术切除肾癌周围新鲜的正常肾组织标本由江苏大学附属医院提供,肾癌干细胞株OS-RC-2由上海中科院细胞库提供.方法:取处于对数生长期的肾癌干细胞OS-RC-2,胰酶消化后离心弃上清,悬浮于含EGF、bFGF的DMEM,F12无血清培养基中,调整细胞浓度为2×105L-1进行接种,在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中悬浮培养.以含血清培养的肾癌细胞及正常肾组织细胞作为对照.主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞仪检测肾癌干细胞CD133及CD34的表达,采用TRAP实时定量检测肾癌干细胞端粒酶活性.结果:肾癌干细胞接种于无血清培养基后,细胞呈圆形悬浮于培养液中:2 d后有细胞球生成,每个细胞球含3～8个细胞,折光性较强;7 d后细胞球明显增多,体积增大,为规则的圆形或卵圆形.无血清悬浮培养的肾癌干细胞球CD133+CD34-率明显高于含血清培养的肾癌细胞CD133+CD34-率,正常肾组织细胞未测出有CD133及CD34的表达,3者间比较差异有显著性意义(F=328.25,P<0.05).肾癌干细胞球和肾癌细胞端粒酶活性均高于正常肾组织细胞(F=278.74,P<0.05),而前2者间端粒酶活性无明显差异.结论:与含血清培养的肾癌细胞相比,无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133呈明显高表达,二者端粒酶活性均高于正常肾组织.     

马应龙痔疮膏、云南白药、复方亚甲蓝溶液联合治疗慢性肛裂的疗效观察

目的：探讨马应龙痔疮膏、云南白药、复方亚甲蓝溶液联合治疗慢性肛裂的临床应用效果。方法选择2014年6月至2015年12月确诊为慢性肛裂的患者82例,充分征求患者治疗意见后,分为2组。观察组42例马应龙痔疮膏、云南白药、复方亚甲蓝溶液联合治疗,对照组40例采用纵切横缝术治疗,2组患者均随访3个月。观察2组患者在便血消失时间、疼痛缓解时间、肛裂愈合时间、治愈率、肛门失禁发生率、复发率的差异。结果观察组患者便血消失时间（2±0è．5）d、疼痛缓解时间（1．5±0．5）d、肛裂愈合时间为（6±1．5）d、肛门失禁发生率0％,对照组患者便血消失时间（8±0．5）d、疼痛缓解时间（6．5±0．5）d、肛裂愈合时间为（10±1．5）d、肛门失禁发生率15％,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。观察组患者治愈率95．2％、复发率9．5％,对照组患者治愈率100％、复发率5％,差异无统计学意义（ P ＞0．05）。结论马应龙痔疮膏、云南白药、复方亚甲蓝溶液联合治疗慢性肛裂疗效显著,其肛裂愈合时间短,无肛门失禁发生,治愈率较手术治疗稍低、复发率稍高,复发后同样治疗仍有效,故不失为治疗慢性肛裂的较好方法,对治疗无效者再行手术治疗。     

肾癌干细胞的培养鉴定及其凋亡的实验研究

目的探讨肾癌干细胞在肾癌的发生发展中的作用。方法收集肾癌细胞检测其CD133表达情况,并研究其凋亡特性;然后将其悬浮于含有表皮生长因子(EGF)和成纤维生长因子(bFGF)的无血清培养基中培养7d,收集干细胞球,同时收集利用含10%胎牛血清培养基培养的肾癌细胞作阴性对照,分别检测其CD133表达情况,并研究其凋亡特性。结果悬浮培养2d后出现肾癌干细胞球,培养7d后干细胞球明显增多,收集干细胞球,用流式细胞仪检测发现表达CD133+细胞约占(8.25±1.43)%,阴性对照中CD133+细胞只占(1.22±0.34)%,并且较前者具有较高的凋亡率。结论利用无血清体外培养并收集悬浮生长的肾癌细胞的方法可以从肾癌细胞中获取肾癌干细胞;肾癌干细胞较一般瘤组织有较低的凋亡率,维持着肿瘤的无限增殖。     

经额部钻孔穿刺治疗基底节区脑出血的入路和技巧

目的探讨基底节区脑出血钻孔穿刺手术治疗的入路和技巧，以改善手术治疗的效果。方法回顾分析2004年以来62例基底节区脑出血患者，根据CT表现及临床意识状态，经额部入路，以带导针引流管沿血肿纵轴穿刺吸除出血，术后留置引流管，残留出血经尿激酶液化引流。总结手术效果及技巧。结果62例出血患者中，术后5d拔除引流管后血肿清除率，显效24例，有效37例，无效放弃治疗出院后死亡1例。结论选择经额部穿刺治疗脑出血操作简便，置管定位准确，血肿清除安全有效，术后护理方便，对不需要去大骨瓣减压的脑出血患者是一种较理想的手术方法。     

脑挫裂伤进展期手术干预的时机探讨

收集我院2000-2009年158例脑挫裂伤患者临床资料,以探讨脑挫裂伤病情进展后的治疗模式. 1 资料与方法 1.1 临床资料:158例脑挫裂伤患者,男性124例,女性34例,年龄17～68岁,平均36.7岁.     

耳内镜下行鼓膜置管后合鼓室充气治疗梅尼埃病的临床疗效

目的:探讨耳内镜下行鼓膜置管后联合鼓室充气治疗梅尼埃病的临床疗效。方法:选取我院2014年1月~2016年12月收治的40例梅尼埃病患者为研究对象,随机分为观察组20例与对照组20例,所有患者均在耳内镜下行鼓膜置管,对照组患者经通气管注入甲泼尼龙治疗,观察组患者联合鼓室充气治疗,比较两组患者的临床疗效及听阈、耳鸣情况。结果:观察组治疗总有效率为90.0%,明显高于对照组的60.0%,听阈均值与耳鸣评分皆明显低于对照组,差异具有统计学意义,P0.05。结论:在耳内镜下行鼓膜置管后联合鼓室充气治疗可有效控制梅尼埃病的眩晕症状,降低听阈均值,改善耳鸣程度,具有较高临床应用价值。     

无血清悬浮培养肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达

背景：有研究表明端粒酶活性抑制剂不仅能抑制或杀死肾癌细胞,而且对决定肾癌发生发展的干细胞也有作用。 目的：观察无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达情况,并与含血清培养的肾癌细胞作比较。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-06/2009-02在江苏大学完成。 材料：手术切除肾癌周围新鲜的正常肾组织标本由江苏大学附属医院提供,肾癌干细胞株OS-RC-2由上海中科院细胞库提供。 方法：取处于对数生长期的肾癌干细胞OS-RC-2,胰酶消化后离心弃上清,悬浮于含EGF、bFGF的DMEM/F12无血清培养基中,调整细胞浓度为2×108 L-1进行接种,在37 ℃、体积分数为5%的CO2培养箱中悬浮培养。以含血清培养的肾癌细胞及正常肾组织细胞作为对照。 主要观察指标：倒置显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞仪检测肾癌干细胞CD133及CD34的表达,采用TRAP实时定量检测肾癌干细胞端粒酶活性。 结果：肾癌干细胞接种于无血清培养基后,细胞呈圆形悬浮于培养液中;2 d后有细胞球生成,每个细胞球含3~8个细胞,折光性较强;7 d后细胞球明显增多,体积增大,为规则的圆形或卵圆形。无血清悬浮培养的肾癌干细胞球CD133+CD34-率明显高于含血清培养的肾癌细胞CD133+CD34-率,正常肾组织细胞未测出有CD133及CD34的表达,3者间比较差异有显著性意义(F=328.25,P < 0.05)。肾癌干细胞球和肾癌细胞端粒酶活性均高于正常肾组织细胞(F=278.74,P < 0.05),而前2者间端粒酶活性无明显差异。 结论：与含血清培养的肾癌细胞相比,无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133呈明显高表达,二者端粒酶活性均高于正常肾组织。