基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的建立

目的建立一种基于规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas13a)的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)检测方法。方法提取2017年6月至2020年10月于首都医科大学附属北京佑安医院就诊的4例乙型肝炎患者肝脏总DNA后,使用HindⅢ内切酶和质粒安全性ATP依赖DNA酶(PSAD)分别进行酶切;根据松弛环状DNA(rcDNA)和cccDNA的结构差异,设计特异性扩增HBV cccDNA的引物,对酶切后的产物进行滚环扩增(RCA)和PCR扩增;并筛选crRNA,建立基于CRISPR/Cas13a技术的HBV cccDNA检测新方法。结果利用α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)和HBV表面抗原(HBsAg)引物对双重酶切后的产物进行扩增,验证产物中HBV基因组的存在;利用HBV cccDNA和HBV rcDNA引物对PSDA酶切后的产物扩增,验证了产物中只存在HBV cccDNA;利用RCA后的阳性样本作为模板梯度稀释,然后进行PCR扩增转录后使用CRISPR/Cas13a检测,计算出检测下限为10拷贝/μl。结论本研究建立了RCA-PCR-CRISPR-Cas13a的新型检测方法,可对HBV cccDNA进行高灵敏度和高特异性检测,为乙型肝炎患者抗病毒治疗评估、治疗终点的确定以及调整治疗方案提供了有效的监测手段。     

多指标综合评分法优选补正续骨颗粒最佳提取工艺

目的：优选补正续骨颗粒的提取工艺。方法采用 L9（34）正交试验法,以出膏率为考察指标,优选最佳水提取工艺,以川续断皂苷Ⅵ与柚皮苷总含量及出膏率综合评分为评价指标,优选最佳乙醇提取工艺。结果最佳水提取工艺为加6倍量水,提取2次,每次提取1 h。最佳乙醇提取工艺为加6倍量60％乙醇,提取3次,每次2 h。结论优选的提工艺稳定可行,适用于补正续骨颗粒的工业化生产。     

新上岗男护士存在的问题及对策

探讨男护士在新上岗期间的工作问题及对策。根据ICU新护士工作考评表对新上岗男女护士进行工作考评,比较男女护士在新上岗期间工作考核情况。男护士新上岗期间在职责完成、基础重病护理、沟通能力3项内容的考核得分低于同上岗女护士。加强对新上岗男护士的岗前培训,培养沟通能力,提高工作自信心。     

翻转课堂在留学生生理学实验教学中的应用

随着我国综合国力增强和高等教育国际化程度的提升,留学生规模不断扩大,已经成为高等教育的重要群体。如何确保留学生的本科教学质量,是目前各医学院校亟须解决的课题。综合留学生的个体特征,并总结锦州医科大学生理学教研室多年开展留学生生理学实验教学的实践和体会,在实际教学工作中采用翻转课堂的教学手段,旨在提高实验课的教学质量和留学生的学习兴趣,初步探索适合留学生生理学实验的教学方法,为我国医学教育国际化改革提供新思路。     

玉树抗震救灾部队一起水痘疫情的处置

2010年5月玉树抗震救灾期间,我部通过部队疾病监测网络监测到参加抗震救灾某部发生6例水痘病例,随即进行了流行病学调查及疫情处置.现将疫情及处置情况报告如下.1 疫情情况 2010年4月18日,某连外出参加援建灾区小学任务归营后一名战士出现发热,次日出现皮疹,经抗震救灾医疗队诊断为水痘.5月2、4、12和13日,该部队...     

自动化流水线上质量指标智能监控系统的开发与应用

目的开发临床实验室质量指标智能统计系统,一键生成各项质量指标统计图,实现质量指标统计的实时性和智能化,实时监控检验全过程的关键环节,以提高检验报告的及时率和保证结果的准确性。方法参照我国2015年发布的临床检验质量指标WS/T 496-2017和ISO 15189:2012质量和能力认可准则要求,以SiemensAptio生化免疫自动化流水线中间体Centralink、Datalink为核心,结合Aptio自动化流水线各功能模块和实验室信息系统(LIS),利用数字化和互联网技术,自主开发实验室质量指标智能统计系统。结果本系统可实现统计的质量指标包括检验前阶段指标:抗凝标本凝集率、检验前周转时间(TAT)中位数等;检验中阶段指标:室内质控项目开展率、实验室内TAT中位数等;检验后阶段指标3项,分别为检验报告不正确率、危急值通报率、危急值通报及时率。另增加统计的质量指标分别为:检验项目仪器分配统计,标本来源及数量统计,流水线模块故障率,标本流程TAT和仪器TAT的统计。实现了检验全程质量指标的时段性数据自动统计、一键生成,并以柱状图、箱线图和饼状图形式呈现,达到质量指标智能统计、简便直观呈现的目的。传统的上述质量指标统计需专人2个工作日方能完成,现仅需1 s即可完成。结论借助自主开发的质量指标智能统计软件,可对检验分析全过程的各项质量指标统计实现实时性和智能化,有利于检验分析过程的精细化管理和质量控制的实时监控,有效提高工作效率,缩短TAT,达到持续改进目的。     

基于微滴式数字PCR技术对乙型肝炎低病毒血症患者血浆HBV DNA精准检测

目的 建立基于微滴式数字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）技术检测HBV DNA的方法，并实现对乙型肝炎低病毒血症患者HBV DNA的精准检测。方法 构建pUC57-HBV质粒作为阳性对照质粒，设计合成HBV DNA ddPCR引物及探针，以梯度稀释的阳性对照质粒为模板进行ddPCR检测，完成标准曲线构建和检出限分析，并进行检测的重复性和特异性分析。收集首都医科大学附属北京佑安医院19例乙型肝炎低病毒血症患者的血浆样本（HBV DNA<10 IU/mL）,提取HBV DNA后进行ddPCR检测。结果 建立的基于ddPCR技术检测HBV DNA的方法检测下限低至1 copy/μL（阳性质粒稀释法）;对3种不同拷贝的阳性对照质粒（1×10²、1×10¹、1×10⁰ copies/μL）重复检测的变异系数分别为18.8%、9.9%、9.7%,且具有100%特异性；应用该方法在低于临床检测下限的乙型肝炎低病毒血症患者中，以1 copy/μL为临界值，HBV DNA的阳性检出率为68.42%。结论 ...     

细叶小檗果实的化学成分研究

目的:对细叶小檗果实的化学成分进行初步研究。方法:采用理化鉴别法、薄层色谱法对其进行定性分析研究。结果:细叶小檗果实含有小檗碱、挥发油等成分。结论:所建立的方法准确、可靠、专属性强,可用于该药的分析研究。     

缺氧复合氰化钠中毒对大鼠脑组织单胺类神经递质含量的影响

目的观察缺氧复合氰化钠(NaCN)中毒对大鼠脑组织单胺类神经递质含量的影响。方法128只雄性SD大鼠随机分为平原组和高原组,每组64只。平原组大鼠在常规实验室内处理,高原组于模拟海拔4 000m的高原低压舱内连续缺氧暴露3d,每天23.5h。高原组和平原组大鼠分别在模拟高原条件和平原条件下经腹腔注射NaCN 3.6mg/kg,于中毒0、0.5、2、6h麻醉取脑,冰上分离海马和纹状体组织,离心提取组织内蛋白质。HPLC法测定大鼠脑纹状体和海马组织多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)含量。结果平原组大鼠NaCN中毒0.5、2、6h脑纹状体和海马组织的DA、NE和5-HT含量与中毒0h比较变化不明显。高原组大鼠脑纹状体DA、NE、5-HT含量和海马组织NE、5-HT含量在NaCN中毒2h或6h与0h比较均显著下降。与平原组比较,高原组纹状体DA、NE、5-HT和海马组织NE、5-HT含量均明显降低(P<0.05或0.01)。结论高原缺氧后脑组织单胺类神经递质含量明显降低,而氰化物中毒可进一步加剧这一改变。     

基于肠道菌群探讨张震“一体两翼、疏调气机”治疗肠易激综合征的作用机制

探讨张震“一体两翼、疏调气机”治疗肠易激综合征(IBS)的作用机制。IBS是一种慢性、功能性疾病，以腹痛和排便异常为主要表现。目前机制尚不明确，认为胃肠动力改变、脑-肠轴调节异常、低度黏膜炎症、内脏高敏感、精神心理因素等均可诱发该病。“一体两翼”即肝脾肾与IBS的发病有着紧密的联系，临床以“疏调气机”为治法治疗该病疗效明显。文章从肠道菌群与IBS的相关性及对IBS发病机制的影响出发，推测以“一体两翼、疏调气机”为指导治疗IBS可能通过调节肠道菌群恢复平衡实现。将名老中医学术结晶与西医学研究成果相结合，以期为临床运用及科研实践提供科学依据，促进中医药现代化研究的开展。