EGFP和CM-Dil示踪骨髓间充质干细胞构建组织工程骨的体内研究

目的:应用增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)和CM-Dil标记技术,观察组织工程骨在体内形成过程中种子细胞的变化和转归.方法:分别用EGFP慢病毒表达和CM-Dil染料的方法标记比格犬骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs),MTT法检测标记细胞的体外增殖能力.BMSCs接种珊瑚支架体外成骨诱导7天后,将未标记组、EGFP组和CM-Dil组分别植入裸鼠背部皮下,空白支架作为阴性对照.术后4、8、12周取材,HE染色观察成骨情况,EGFP组采用GFP免疫组化、CM-Dil组冰冻切片荧光显微镜下示踪BMSCs在体内的变化.结果:两种标记技术能高效标记BMSCs,标记前后细胞的体外增殖无显著性差异(P>0.05).细胞-支架复合物植入体内12周后有新生骨形成,标记细胞数量随时间延长而逐渐减少,12周后仍显示有部分标记细胞存活.结论:EGFP和CM-Dil可用于示踪组织工程种子细胞,通过示踪说明BMSCs在体内组织工程骨成骨过程中发挥了重要作用.     

氯化铵裂解法与非裂解法提取人脂肪干细胞生物学特性的差异

文题释义： 氯化铵红细胞裂解液：含有氯化铵成分的红细胞裂解液,此种裂解液被广泛应用于骨髓干细胞及脂肪干细胞的提取,其目的是去除组织内的红细胞,使目的细胞群进一步纯化。其作用机制为：红细胞内有大量碳酸酐酶,可自发将NH₃转化为NH₄⁺,CO₂转化为HCO₃^-,促使胞外NH₃和CO₂连续内流造成细胞裂解。 基质血管成分：脂肪组织中除了含有成熟脂肪细胞外,还包含一组混杂的细胞群,即基质血管成分。基质血管成分包括血管内皮细胞、脂肪祖细胞、成纤维细胞、周细胞、脂肪干细胞,造血干细胞、红细胞等,其具有多向分化潜能及促进组织血管再生等功能,在组织及器官的再生、修复中具有极大的应用前景。 背景：脂肪干细胞的提取及纯化流程尚未建立统一标准。最常用的纯化脂肪干细胞的方法是利用红细胞裂解液处理基质血管成分。但这一步骤是否对脂肪干细胞存在不良影响仍缺乏证据,是否有利于未来临床应用仍有待探讨。 目的：比较氯化铵红细胞裂解液法和非裂解法提取脂肪干细胞的效率,并进一步比较两种方法提取脂肪干细胞的生物学特性。 方法：收集吸脂手术患者脂肪组织,经Ⅰ型胶原酶消化后,利用或不用氯化铵红细胞裂解液对基质血管成分进行纯化,Muse^TM细胞状态分析仪对活细胞计数及活细胞比例评估;将基质血管成分接种后培养人脂肪干细胞至第2代,光学显微镜观察脂肪干细胞形态,流式细胞学分析脂肪干细胞表型,CCK-8法绘制细胞增殖曲线,成脂及成骨培养基诱导后油红O及茜素红染色法分别评估成脂、成骨分化能力。该实验经中国医学科学院整形外科医院伦理委员会批准,并与患者签署相关知情同意书。 结果与结论：①与裂解组相比,非裂解组提取即刻的基质血管成分中非红活细胞数更多,活细胞百分比更大;②两组脂肪干细胞均呈梭形、鱼群状排列;③两组细胞均高表达CD90、CD73、CD105等细胞表面抗原,低表达或不表达CD11b、CD34、CD19、CD45、HLA-DR等细胞表面抗原;④非裂解组细胞增殖速度更快,成脂及成骨能力两组间无明显区别;⑤结果表明,利用氯化铵红细胞裂解液法提取基质血管成分降低了脂肪干细胞提取效率,抑制了脂肪干细胞增殖能力。非裂解过程不影响脂肪干细胞表型及成脂、成骨分化能力。因此不建议在人脂肪干细胞提取过程中进行氯化铵法红细胞裂解。 ORCID: 0000-0002-8958-4975(李梓菲) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

应用横行旋转红唇粘膜肌肉瓣矫正唇裂继发红唇畸形

目的：寻求一种简便有效的方法矫正唇裂继发畸形中上唇瘢痕处局部组织缺少,而裂侧上唇红唇组织过多的畸形。方法：采用裂侧横行旋转红唇粘膜肌肉瓣矫正唇裂继发红唇凹陷畸形,利用裂侧过多的粘膜肌肉组织来修复凹陷部的组织缺损。结果：此法简便易行,术中供瓣区组织量充足,术后组织瓣成活率高,瘢痕隐蔽,效果显著。结论：这使一个比较复杂的畸形用较简便的方法一次得以矫正,创伤小,并发症少,值得推广应用。     

人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达

目的：系统研究人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）体外成骨诱导分化过程中成骨相关基因的表达变化。方法：应用密度梯度离心法分离hBMSCs,取第2代细胞通过流式检测及多向诱导分化方法进行干细胞鉴定;应用RT-PCR法对hBMSCs在体外成骨诱导不同时间点的成骨相关基因表达进行检测。结果：第2代hBMSCs表达间充质干细胞表面标志CD44、CD90,具有成脂和成骨分化潜能。成骨相关基因在诱导早期部分表达,中期均有表达,基因表达大部分在14天达高峰,与矿化相关的基因表达在21天达高峰。结论：hBMSCs体外成骨诱导过程中成骨相关基因呈动态表达,其表达时序与成骨细胞生理发育基本相似。     

胃癌卵巢转移的危险因素分析(附15例报告)

胃癌卵巢转移直接影响患者的生命,其恶性程度高,预后差,目前尚无5年存活病例报道,本研究通过回顾性分析胃癌卵巢转移患者的临床病理特点和高危因素,以探讨胃癌患者保留卵巢的可能性。     

反射性癫癎5例临床治疗

我院1999-2002年共收治由于玩麻将、打扑克、长时间玩电脑游戏所致的反射性癫癎5例.现报告如下.     

松解及眼轮匝肌下脂肪垫转移充填矫正重睑术后睑粘连畸形

目的矫正重睑成形术后的上睑粘连、重睑较宽、眼睑上抬受限等畸形。方法另设计重睑线,彻底松解眼睑内的组织粘连,释放眶隔内脂肪及转移眼轮匝肌下脂肪垫充填。结果两年来为32例重睑成形术后畸形者用此法治疗得到满意效果。结论此方法简单易行,效果好。     

21例胃癌患者125Ⅰ粒子永久性植入治疗的早期观察

为探讨胃癌患者125Ⅰ粒子组织间永久性植入治疗的安全性,我院从2004年3月至2005年1月对21例胃癌患者,术中加用125Ⅰ粒子组织间永久性植入治疗,观察加用125Ⅰ粒子组织间永久性植入治疗后,患者的生命征、白细胞总数、免疫功能和吻合口愈合等早期临床表现的变化,现报告如下:     

反射性癫5例临床治疗

我院 1999— 2 0 0 2年共收治由于玩麻将、打扑克、长时间玩电脑游戏所致的反射性癫 5例。现报告如下。1　临床资料1.1.　一般资料　本组 5例 ,玩麻将诱发 4例 ,玩电脑游戏 1例 ,均为男性 ,年龄最大 5 5岁 ,最小 19岁 ,平均 4 8.5岁。玩麻将时间最长 36h ,最短 19h ,平均 2 5h。玩电脑游戏者为首次发病 ,19岁男性 ,在网吧玩游戏时间为 13h。玩麻将 2例为第二次发病 ,另 2例为首次发病。1.2.　临床表现　 4例发病时表现为全身强直 -阵挛发作。发病时突然意识不清 ,双眼凝视前方 ,牙关紧咬 ,口吐白沫 ,继之倒地 ,两拳紧握 ,双下肢屈曲 ,痉挛…