云南登革4型病毒的鉴定及NS1和NS2a基因序列分析

目的 对1989年8月分离自云南省盈江县蚊虫的2株登革病毒进行生物学及分子特征的鉴定，明确这两株病毒的血清型及基因型。方法 蚊虫用BHK21细胞和乳鼠法分离病毒，用间接免疫荧光试验、RT-PCR等方法进行鉴定，并对这两株病毒的分子生物学特征进行分析。结果 从自纹伊蚊和达勒姆阿蚊中各分离到一株病毒；分别命名为M110和M113，这两株病毒对BHK21细胞能产生明显的细胞病变。脑内接种乳鼠4d左右导致乳鼠死亡。该病毒经血凝、血凝抑制和间接免疫荧光试验提示为黄病毒。分别用黄病毒属特异引物、登革4型病毒NS1和NS2a基因片段特异引物进行RT—PCR扩增、序列测定，证实为登革4型病毒。NS1和NS2a基因序列片段分析表明，M110和M113的NS1核苷酸序列与登革4型病毒基因I型的H241株（Y19176）同源性最高。分别为99％、98％；NS2a基因片段与H241的核苷酸序列的同源性分别为96．5％、97．1％。结论 从盈江县蚊虫分离到的M110和M113病毒为登革4型病毒基因I型，表明云南省西部边境地区在20世纪80年代发生过登革4型病毒的流行。     

一起实验动物型肾综合征出血热流行的调查研究

目的对实验动物型肾综合征出血热疫情进行流行病学调查和病毒学研究,掌握流行特点、疫源范围并控制疫情。方法收集相关流行病学资料,采集大白鼠血清、肺脏组织和接触人群血清标本,用反向被动血凝抑制(RPH I)和间接免疫荧光试验(IFA)检测汉坦病毒抗体或抗原,用RT-PCR法对阳性鼠肺进行汉坦病毒分型。结果2003年5~6月,云南省3个单位的实验动物大白鼠群中发生汉坦病毒流行并导致1人发病,接触人群的平均隐性感染率为20%(15/75);用RPH I和IFA法检测大白鼠血清,汉坦病毒总抗体和IgG抗体阳性率分别为45.99%(63/137)和37.27%(41/110),抗体滴度在1∶20~1∶1 280之间,两种方法检测结果无显著性差异(χ2=1.33,P>0.05);两个疫点单位的大白鼠肺脏组织中汉坦病毒抗原阳性率分别为56.25%(9/16)和35.00%(7/20);用RT-PCR对病毒抗原阳性的大白鼠肺组织进行汉坦病毒分型,证实为汉城型病毒感染。对调查确定的疫点鼠群及饲养场所进行了疫源处理,彻底消灭了传染源,扑灭了疫情。结论本次实验动物型肾综合征出血热流行属汉城型汉坦病毒引起,主要发生在W istar大白鼠鼠群。大白鼠对汉坦病毒高度易感,具有较高的感染率并能产生高滴度的抗体。     

中国动物虫媒病毒主要传播媒介库蠓种类及其分布

库蠓（双翅目：蠓科）是一种重要的医学和兽医学媒介昆虫,能通过叮咬动物和人传播蓝舌病病毒（bluetongue virus, BTV）、施马伦贝格病毒（Schmallenberg virus, SBV）、奥罗波克病毒（Oropouche virus, OROV）等多种病毒,危害动物和人类健康,造成重大经济损失。全国34个省级行政区中,除了北京和澳门,其余都有库蠓分布的报道。我国现记载的库蠓属有12个亚属368种,分布在云南的库蠓种类最多,其中原野库蠓（C.homotomus）的分布最广。能传播或潜在具有传播病毒能力的库蠓至少有42种,其中我国有20种,在北京、天津、香港、澳门以外的各省（市、自治区）均有分布。为进一步了解传播虫媒病毒的库蠓种类及其分布情况,促进我国蠓传动物疾病的预防和控制,本文对我国动物病毒媒介库蠓的种类和分布情况进行综述,为动物虫媒病毒的研究提供依据。     

云南省华宁县荒川库蠓形态和遗传多态性研究

目的了解云南省荒川库蠓形态多样性及遗传多态性。方法 2015年7月在云南省华宁县采集库蠓样本,制备压片进行形态学鉴定,同时提取基因组DNA,用细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因和间隔区-1(ITS-1)基因特异引物进行PCR扩增和序列测定,采用Clustal X、DNAStar和Mega 6.1等软件进行核苷酸同源性和遗传进化分析。结果共采集到库蠓955只,其中12只库蠓在R1和R2室下端多出1个淡斑,翅面共有15个淡斑;另外943只库蠓翅面有14个淡斑。对12只翅面有15个淡斑的库蠓(A组)和14只翅面有14个淡斑的库蠓(B组)进行形态学和分子生物学鉴定,26只库蠓均具有两复眼分离、小眼面间无柔毛、触角第15节无嗅觉器、1个大梨形受精囊、翅面有小圆形淡斑的形态学特征。两组库蠓的HR和TR2值差异有统计学意义(P0.05),而AR、PR、CR和TR1、TR3值的差异均无统计学意义(P0.05)。COⅠ基因和ITS-1基因遗传进化分析显示26只库蠓与荒川库蠓亲缘关系最近;但是在COⅠ基因进化树上26只库蠓分为明显的两个进化簇,其中14只库蠓(B组)形成1个单独的进化簇,与另一进化簇核苷酸同源性在94%以下。结论云南省华宁县除了荒川库蠓外,还存在1种翅面有形态差异的变种库蠓以及COⅠ基因序列差异较大的荒川库蠓,提示该地区荒川库蠓的形态学和遗传学具有多态性。     

四川省虫媒病毒调查研究

目的通过对四川省虫媒病毒调查,了解乙脑主要流行区蚊虫及其虫媒病毒的分布状况,为防制提供依据。方法 2006-2008年在调查点蚊虫孳生高峰期采集蚊虫标本,进行分类鉴定,并用BHK细胞分离病毒,连续3代观察细胞病变情况;收获细胞病变阳性分离物进行血清学和分子生物学鉴定;采用MEGA3.1生物学软件完成氨基酸序列和病毒进化树分析。结果三带喙库蚊和骚扰阿蚊为乙脑流行区优势种群,分离11株虫媒病毒,其中8株经IFA和RT-PCR鉴定为乙脑病毒(JEV),均属于基因Ⅰ型JEV。E基因区段核苷酸和氨基酸比较发现,8株病毒之间核苷酸和氨基酸同源性分别为98.1%～100.0%和99.7%～100.0%;与2004年四川分离株的核苷酸同源性在97.8%～99.6%,氨基酸同源性在99.3%～100.0%。另外3株病毒在BHK细胞上出现病变时间较JEV快,用20种不同种属的虫媒病毒免疫腹水IFA鉴定和相关的引物进行PCR扩增,结果均为阴性。结论在四川省乙脑流行区有5种蚊虫,其中三带喙库蚊和骚扰阿蚊为优势种群,乙脑病毒由三带喙库蚊携带,其E区核苷酸和氨基酸相对保守,有利于采取针对性防控措施。同时,分离出3株不能鉴定的虫媒病毒,提示为我国不常见种型或尚未发现的新毒种,其生物学特性和对人类的致病性有待进一步研究。     

云南省脑炎患者脑脊液中检测到基因Ⅰ和Ⅲ型流行性乙型脑炎病毒

目的调查云南省流行性乙型脑炎(乙脑)患者感染乙脑病毒(JEV)基因型状况。方法在云南省西双版纳州医院和大理州医院采集脑炎患者急性期血清标本20份和脑脊液标本11份,用RT-PCR法检测JEV核酸,阳性者进行JEV-PreM/C区基因序列测定,用核苷酸同源性和系统进化分析进行基因型鉴定。结果用RT-PCR法从11例脑炎患者脑脊液标本中检测到JEV核酸阳性3份(JB114、JB135和DLN24),而20例脑炎患者血清标本均为阴性。3株病毒的PreM/C区核苷酸序列同源性分析显示,JB114、JB135与JEV基因Ⅰ型代表株同源性高达98.3%和99.2%,而与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型仅为82.5%~84.6%;DLN24与基因Ⅲ型代表株同源性为94.6%,而与基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型分别为85.0%、82.5%和80.4%。进化树分析显示,JB114和JB135位于基因Ⅰ型分支中,DLN24位于基因Ⅲ型分支上。结果表明,来自西双版纳的JB114和JB135病毒株属于基因Ⅰ型,来自大理的DLN24病毒株为基因Ⅲ型。结论云南省乙脑患者中分别存在基因Ⅰ型和Ⅲ型JEV感染的病例,表明云南省存在这两个基因型病毒的共同流行。     

从滇西北地区首次分离到版纳病毒

目的 对滇西北地区分离的版纳病毒进行系统鉴定,明确与云南其他地区分离株的差异.方法 对2005、2006年从滇西北地区分离的3株版纳病毒进行形态学、基因组带型和分子生物学鉴定,测定第12片段核苷酸序列,进行序列的同源性和系统进化分析.结果 从2005、2006年滇西北蚊虫标本中分离到的3株版纳病毒为直径约70 nm、无包膜、有双层衣壳的球形颗粒,基因组带型为6-6分布.3株版纳病毒问第12片段核苷酸序列同源性为99%,与云南其他地区和印度尼西亚版纳病毒毒株的最大同源性分别为98%和90%;系统进化分析显示滇西北分离株和云南其他地区分离株共同形成一个分枝;第12片段编码的氨基酸序列比较发现我国版纳分离株和印度尼西亚毒株间存在共同的氨基酸残基差异.结论 首次从滇西北地区蚊虫中分离到3株版纳病毒,基因序列分析显示滇两北分离株和云南其他地区分离株同源性较高.     

从滇西北地区首次分离到版纳病毒

目的 对滇西北地区分离的版纳病毒进行系统鉴定,明确与云南其他地区分离株的差异.方法 对2005、2006年从滇西北地区分离的3株版纳病毒进行形态学、基因组带型和分子生物学鉴定,测定第12片段核苷酸序列,进行序列的同源性和系统进化分析.结果 从2005、2006年滇西北蚊虫标本中分离到的3株版纳病毒为直径约70 nm、无包膜、有双层衣壳的球形颗粒,基因组带型为6-6分布.3株版纳病毒问第12片段核苷酸序列同源性为99%,与云南其他地区和印度尼西亚版纳病毒毒株的最大同源性分别为98%和90%;系统进化分析显示滇西北分离株和云南其他地区分离株共同形成一个分枝;第12片段编码的氨基酸序列比较发现我国版纳分离株和印度尼西亚毒株间存在共同的氨基酸残基差异.结论 首次从滇西北地区蚊虫中分离到3株版纳病毒,基因序列分析显示滇两北分离株和云南其他地区分离株同源性较高.     

云南省5县健康人群乙型脑炎血清学调查

<正> 流行性乙型脑炎(简称乙脑)在我省广泛分布,近年来发病数虽有下降,但局部地区的流行时有发生。为了解人群隐性感染状况,我们在泸西、寻甸、永胜、宁蒗和昌宁采集健康人血清,测定乙脑病毒抗体、结果如下。1 材料与方法1.1标本采集 在云南省泸西、寻甸、永胜、宁蒗和