补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达的变化及补中益气汤对其的影响,并探讨相关机制。方法:SD大鼠称重随机分组,分为设空白对照组、脾虚损伤组、补中益气汤组、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天,第11天补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天,第18天,除空白对照组外的另外三组均灌服消炎痛造成胃粘膜损伤。采用免疫组化法检测EGFR蛋白表达的变化。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达明显下调;与脾虚损伤组比较,补中益气汤组大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达明显升高。结论:补中益气汤可提高脾虚大鼠消炎痛攻击后EGFR蛋白表达,促进受损胃粘膜的修复,该方对脾虚大鼠胃粘膜易损性复健作用的机制可能与此有关。     

溃结灵含药血清对大鼠结肠上皮细胞损伤模型MUC-2及TGF-α含量的影响

目的:观察溃结灵含药血清对结肠上皮细胞损伤模型MUC-2及TGF-α蛋白含量的影响,进一步探讨溃结灵促进肠黏膜损伤修复的机理。方法:TNF-α(50ng/mL)干预大鼠结肠上皮细胞6h造成细胞损伤模型,采用Elisa方法检测不同浓度溃结灵含药血清对细胞损伤模型MUC-2及TGF-α蛋白含量的影响。结果:①结肠上皮细胞损伤模型组MUC-2蛋白含量较空白对照组升高(P0.05);②溃结灵含药血清高剂量组MUC-2蛋白含量较模型对照组升高(P0.05);溃结灵含药血清高剂量组TGF-α蛋白含量较模型对照组升高(P0.01)。结论:溃结灵含药血清可促进TNF-α致结肠上皮细胞损伤模型中MUC-2、TGF-α含量升高,进而促进受损肠黏膜上皮的修复。     

黄芪总苷对应激大鼠胃黏膜氧自由基及褪黑素受体的影响

目的:探讨黄芪总苷对应激大鼠胃黏膜褪黑素受体基因表达及氧自由基变化的影响.方法:SD大鼠48只分为4组,即正常对照组,模型组,黄芪总苷组和雷尼替丁组,每组12只.采用水浸-束缚应激模型,观察胃黏膜损伤指数,比色法检测胃黏膜SOD活性、MDA含量,RT-PCR法测定褪黑素受体1、2亚型mRNA表达变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜损伤指数明显增高,MDA含量增高,SOD活性下降,褪黑素受体1、2基因表达降低,黄芪总苷预防给药后可明显降低应激大鼠胃黏膜损伤指数(6.75±4.10 vs 16.83±4.96,P＜0.01)和MDA含量(0.45±0.07 vs 0.79±0.36,P＜0.05),升高SOD活性(110.62±26.42 vs 71.74±22.20,P＜0.05)和褪黑素受体1、2基因表达(0.86±0.12 vs 0.54±0.05,0.79±0.14 vs 0.50±0.10,均P＜0.01).结论:黄芪总苷对水浸.束缚应激大鼠胃黏膜损伤有保护作用,其保护机制可能与调节胃黏膜褪黑素受体,并参与抗氧自由基损伤有关.     

大鼠结肠上皮细胞分离及培养方法的建立

目的:建立大鼠结肠上皮细胞的原代培养方法,为结肠上皮形态及功能研究提供理想的细胞模型.方法:采用6-15日龄乳鼠,取结肠剪碎、反复清洗后,弃上清,加10 mL、0.1%Ⅰ型胶原酶和透明质酸酶联合配制的消化液,37℃消化25 min,分离上皮细胞团;吹打消化液,取上清,加入培养基重悬反复离心3次后,细胞沉淀接种于含100 mL/L胎牛血清的完全培养基中,37℃、50 mL/L CO2细胞培养箱中培养.采用差速贴壁法及相差消化法去除成纤维细胞,细胞贴壁长满瓶80%-90%后用2.5 g/L的胰酶消化液消化并传代.结果:成功分离结肠上皮细胞团且活力较高.24 h后可见部分细胞团贴壁,贴壁细胞为多角形,4-8 d逐渐融合成片,呈现明显的"铺路石"样.细胞经传代处理后成纤维细胞明显减少.免疫荧光染色及透射电镜观察鉴定为上皮细胞.冻存处理复苏后细胞状态较佳.结论:通过该法可建立较稳定的大鼠结肠上皮细胞原代培养体系,为结肠上皮生理、病理及药物作用机制提供了体外研究平台.     

慢性内脏痛觉超敏大鼠及热板法疼痛小鼠模型对痛泻要方的镇痛反应

目的:观察痛泻要方对慢性内脏痛觉超敏大鼠模型及热板法疼痛小鼠模型疼痛阈值的影响。方法:实验于2005-10/12在广东药学院中药药理教研室实验室完成。选用SD大鼠60只及雌性NIH小鼠40只,由广东省实验动物中心提供。①慢性内脏痛觉超敏实验:取50只SD大鼠制作三硝基苯磺酸模型,其余10只作为正常对照组。灌注三硝基苯磺酸后第7天测腹壁收缩反射阈值,模型组与正常对照组比较腹壁收缩反射阈值显著降低,则证明造模成功。50只大鼠均造模成功,按随机数字表法分为5组,分别为蒸馏水组、罗痛定组(2.3mg/kg)、痛泻要方9.18g/kg组、痛泻要方4.59g/kg组及痛泻要方2.30g/kg组,每组各10只。给予各组大鼠灌胃相应剂量药物(10mL/kg),1次/d,给药7d。于第7天给药后用直结肠气囊扩张法检测腹壁收缩反射阈值。②热板法疼痛实验:取NIH小鼠40只,置于(55±0.5)℃的水浴烧杯上,以舔后足时间为正常痛阈。按随机数字表法分为5组,蒸馏水组、罗痛定组(4.5mg/kg)、痛泻要方18.75g/kg组、痛泻要方9.35g/kg组及痛泻要方4.67g/kg组,每组8只。分别灌胃给药,给药体积为10mL/kg,1次/d,连续3d,于第3天给药后分别测定其60min,90min,120min的痛阈值。结果:①各组大鼠经三硝基苯磺酸诱导的腹壁收缩反射阈值比较:痛泻要方9.18g/kg,4.59g/kg组及罗痛定组大鼠腹壁收缩反射阈值显著高于蒸馏水组(52.5±3.2)mmHg,(48.3±2.5)mmHg,(57.6±2.9)mmHg,(37.5±2.3)mmHg(P<0.05)。②各组小鼠热板法致痛的痛阈值比较:痛泻要方18.75g/kg,9.35g/kg,4.67g/kg组及罗痛定组小鼠的痛阈值在给药后60min,90min,120min时相点均显著高于蒸馏水组(P<0.05)。结论:中药痛泻要方能提高慢性内脏痛觉超敏大鼠模型及热板法疼痛小鼠模型的疼痛阈值,对慢性内脏痛有明显的治疗作用,可为临床治疗肠易激综合征腹痛提供实验依据。     

胃炎消治疗大鼠实验性慢性胃炎的的实验研究

目的：观察胃炎肖对实验性慢性胃炎大鼠的治疗作用。方法：用酒精和去氧胆酸钠联合造模90d复制慢性胃炎（CG）大鼠模型；胃炎消按临床用量的5倍、10倍（12．3g/kg、24．6g/kg）灌胃，连续治疗42d，观察胃粘膜病理组织学变化。用热板法、醋酸扭体、足跖肿胀和棉球肉芽肿法观察胃炎消的抗炎镇痛作用。结果：胃炎消可使大鼠胃窦部、窦体交界、胃体、前胃与脾胃交界处胃粘膜的炎症减轻，以胃窦部、窦体交界、前胃与脾胃交界处的改善明显（P＜0．05或P＜0．01）；同时胃窦、胃体部粘膜肌层的厚度变薄，胃液酸度升至正常。胃炎消还有明显镇痛抗炎作用。结论:胃炎消对实验性CG大鼠胃粘膜病理组织学变化有明显改善作用和抗炎镇痛作用。     

香砂六君丸对胃肠运动的影响及毒性

香砂六君丸抑制正常动物胃排空和小肠的蠕动,并能对抗新斯的明或乙酰胆硷所致胃肠运动的亢进,抑制组织胺和氯化钡所致的肠管痉挛。按成人临床用药量的423倍灌小鼠,未呈毒性反应。     

四君子汤的不同提取物及其对家兔离体小肠运动的影响

四君子汤是补气健脾的基础方,由它化裁出许多常用的健脾益气方。四君子汤的组成按《和剂局方》所载,即党参、茯苓、白术、甘草。药理实验表明,四君子汤的水煎剂对动物离体小肠运动呈抑制性影响,且具有明显的对抗乙酰胆碱的作用,有一定程度的对抗氯化钡和对抗肾上腺素的作用。为了探索四君子汤对动物离体小肠运动作用的有效部位,选择合理的剂型及质量标准,我们对四君子汤的不同提取物进行了薄层分析,对其不同极性溶剂提取物总固体     

脾虚大鼠壁细胞钙调素活性及黄芪作用的研究

目的：观察大黄、利血平两种脾虚模型大鼠胃壁细胞内钙调素活性变化以及黄芪注射液对其的作用。方法：胃壁细胞分离采用Lewin胃袋法Percoll密度梯度离心，细胞内钙调素活性测定用PDE酶法，结果：大黄和利血平脾虚模型大鼠胃壁细胞钙调素活性（ng/mg)明显下降，黄芪注射液治疗后钙调素活性明显上升，结论：脾虚大鼠壁细胞钙调素活性明显下降，黄芪注射液对壁细胞内钙调素活性这一病理变化有明显调整作用。     

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜IκB-α基因和蛋白表达的作用

目的 观察溃结灵对溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型结肠黏膜核因子抑制蛋白-κB(IκB-α)基因表达及磷酸化核因子抑制蛋白-κB(pIκB-α)蛋白表达的作用,对其抗UC作用机制进行探讨.方法 采用三硝基苯磺酸(TNBS)法复制UC大鼠模型并进行不同剂量药物干预.采用实时定量荧光PCR方法检测结肠黏膜IκB-α基因表达和Western blot方法检测结肠黏膜pIκB-α蛋白相对表达量.结果 模型组IκB-α基因相对表达量明显低于正常组(P＜0.01);溃结灵高剂量组ⅠκB-α基因相对表达量明显高于模型组(P＜0.05).模型组pIκB-α蛋白相对表达量明显高于正常组(P＜0.01);溃结灵低、高剂量组pIκB-α蛋白相对表达量均明显低于模型组(P＜0.05).结论 溃结灵对TNBS法UC大鼠模型结肠黏膜IκB-α基因表达有上调作用及对pIκB-α蛋白表达有抑制作用,其抗UC作用的机理可能为抑制IκB-α的磷酸化,进而抑制IκB-α蛋白的降解,最终抑制核转录因子-κB的活化,减轻炎症反应.