中医药院校中药生物技术分章教学实践

针对中医药院校中药生物技术学时短、讲授内容难度大、学生底子薄的特点,结合多年教学体会,总结该门课程分章教学的重点章节、逻辑顺序和讲授内容以及课外网络教学活动与考核方式。     

液氮快速冷冻对地龙中水溶性蛋白组成和活性的影响

目的探讨低温炮制工艺对地龙水溶性蛋白质组成以及溶栓与抗肿瘤活性的影响。方法地龙的炮制采用传统与低温两种工艺,低温炮制采用液氮快速冷冻与冷冻干燥技术;采用SDS-PAGE与ImageTool软件,对两种炮制工艺的地龙蛋白质组成的差异进行定性与定量分析;应用纤维蛋白平板法与体外溶栓试验,定性与定量分析两种炮制工艺的纤溶活性的差异;应用显微观察与MTT法,对两种炮制工艺体外抑制人肝癌细胞增殖活性进行定性与定量比较分析。结果低温炮制工艺地龙的水溶性蛋白组成比传统炮制工艺丰富,SDS-PAGE的蛋白条带数与浓度明显高于传统工艺;两种炮制工艺的地龙蛋白液均具有显著的抗人肝癌细胞与纤溶活性,但低温炮制工艺的两种活性显著高于传统工艺。结论不同炮制工艺对地龙水溶性蛋白组成及其抗肿瘤与溶栓活性有显著影响;在保全地龙的蛋白质类药效成分的生物活性方面,低温炮制工艺优于传统炮制工艺。     

基于全电性离子色谱的6味中药药性的蛋白质分子标记研究

目的：提出分子标记法检测中药药性物质基础研究的新思路，探讨全电性离子色谱技术用于筛选中药药性蛋白质分子标记的可行性。方法：联合应用阴、阳离子交换色谱技术，将特定pH条件下中药的全部水溶性蛋白的色谱峰呈现出来，形成全电性离子色谱图，平行比较不同药性中药的全电性离子色谱图，筛选出相同药性中药间共有的药性标识峰，对药性标识峰组分作SDS—PAGE，比较分析药性相关的共有蛋白条带，作为中药药性的蛋白质分子标记。结果：干姜、肉桂、仙茅3味热性中药在阴离子交换色谱的收集部分编号为30附近，存在多个共有特征峰；黄连、知母、金银花3味寒性中药在阴离子交换色谱的收集编号为35附近会存在多个共有特征峰；3味热性中药的共有特征峰组分在分子质量为50ku（1u=1．66054×10^-27）附近存在一条共有条带，在分子质量约为31ku处，存在2条共有条带；3味寒性中药共有特征峰组分在分子质量为31ku附近，存在2条共有条带。结论：收集编号为35和30附近的共有色谱峰在3次重复中稳定呈现，可以作为6味测试中药的寒、热药性标识峰。标识峰的共有条带分别是3味寒性中药与3味热性中药所特有的，在3次重复中稳定呈现，可以作为6味测试中药药性的蛋白质分子标记。全电性离子色谱法是一种可行的中药药性分子标记研究的新方法。     

液氮快速冷冻对地龙中水溶性蛋白组成和活性的影响

目的探讨低温炮制工艺对地龙水溶性蛋白质组成以及溶栓与抗肿瘤活性的影响。方法地龙的炮制采用传统与低温两种工艺,低温炮制采用液氮快速冷冻与冷冻干燥技术;采用SDS-PAGE与ImageTool软件,对两种炮制工艺的地龙蛋白质组成的差异进行定性与定量分析;应用纤维蛋白平板法与体外溶栓试验,定性与定量分析两种炮制工艺的纤溶活性的差异;应用显微观察与MTT法,对两种炮制工艺体外抑制人肝癌细胞增殖活性进行定性与定量比较分析。结果低温炮制工艺地龙的水溶性蛋白组成比传统炮制工艺丰富,SDS-PAGE的蛋白条带数与浓度明显高于传统工艺;两种炮制工艺的地龙蛋白液均具有显著的抗人肝癌细胞与纤溶活性,但低温炮制工艺的两种活性显著高于传统工艺。结论不同炮制工艺对地龙水溶性蛋白组成及其抗肿瘤与溶栓活性有显著影响;在保全地龙的蛋白质类药效成分的生物活性方面,低温炮制工艺优于传统炮制工艺。     

藏药灰兜巴基原辨析

目的:藏药灰兜巴具有良好的降糖效果,民间广泛用于治疗糖尿病及其并发症,但此药材基原描述混乱,有菌类植物、洞穴红蜘蛛、山蜘蛛、卡氏地蛛、螲蟷之说,本研究对该药材基原作出辨析与鉴定,旨在正本清源。方法:从我国主流中药材批发市场购买的灰兜巴中,采集到多枚困于其中的蜘蛛尸体,通过对蜘蛛尸体进行显微观察与管网长度测量,做出种属鉴定与分析。结果:从管巢长度测量与蜘蛛尸体的解剖结果鉴定,灰兜巴药材的基原动物为节肢动物门蛛形纲蜘蛛目地蛛科地蛛属蜘蛛,以异囊地蛛为主。结论:灰兜巴是以异囊地蛛为主的地蛛属蜘蛛吐丝筑成的条形、袋状的管巢。     

抗人呼吸道合胞病毒中药抑制剂研究进展

人呼吸道合胞病毒(h RSV)是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的重要病原病毒之一,至今缺乏有效的h RSV感染治疗药物和疫苗。从中药有效成分、单味中药、中药复方抑制剂研发3个方面,对抗h RSV感染中药的最新研究进展进行综述,为抗h RSV新药研发与探索新的h RSV感染的治疗策略奠定理论基础。     

中药抗耐药性菌作用及机制研究进展

抗生素作为临床中最为重要的抗菌手段之一,目前随着耐药性菌的出现和扩散,其在医疗应用上受到了一定的限制。中药种类丰富且安全性高,为解决细菌耐药性问题提供了新途径和新思路,该文针对细菌耐药性的产生机制,将现阶段中药逆转细菌耐药性的研究进展进行总结。     

二甲双胍丝素微球的制备工艺研究

目的以丝素蛋白为载体,二甲双胍为模型药物,制备二甲双胍丝素微球,优选最佳制备工艺。方法以液状石蜡为油相,再生丝素溶液为水相,Span 80为乳化剂,采用乳化固化法制得二甲双胍丝素微球,应用激光粒径分布仪测定微球的粒径及其分布,单因素考察影响微球载药量和包封率的因素,并进一步采用正交实验优选微球的最佳制备工艺。结果所制得的微球圆整,微球的粒径分布在4～40μm之间。对微球载药量和包封率影响较大的因素为投药比、水油比和转速,最佳工艺条件是:投药比为7%、转速为300 rpm、水油比为11∶100,载药量可达5.8%。结论该二甲双胍丝素微球制备方法简单,无有毒有害物质加入,可在常温常压下制备,易于扩大生产。     

僵蚕溶茧酶抑制剂的纯化与抗肿瘤活性研究

目的 分离纯化僵蚕溶茧酶抑制剂（Jiangcan cocoonase inhibitor,JCCI）,研究其体内外对人肝癌SMCC-7721细胞增殖的抑制活性。方法 依次应用以家蚕溶茧酶为配体的亲和色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱、Superdex 75快速蛋白液相色谱（fast protein liquid chromatography,FPLC）,从僵蚕粗蛋白提取物的85%硫酸铵沉淀物中分离纯化JCCI。以Edman降解法测其N端氨基酸序列。应用MTT法与荷瘤裸鼠模型,检测其体内外抑制SMCC-7721细胞增殖与生长活性。结果 JCCI相对分子质量为13 973.63,其N端前10个氨基酸序列为VRNKRQSNDD。抑制剂动力学分析结果表明,JCCI是溶茧酶的非竞争性抑制剂,米氏常数（Km）平均值为76.50,二者物质的量之比为1∶1。JCCI可显著抑制SMCC-7721肝癌细胞体外增殖与体内荷瘤裸鼠的肿瘤生长,体外给药36 h的半数抑制浓度（median inhibition concentration,IC50）为260.52μg/mL,JCCI抑制率与剂量线性相关...     

耐胆汁型牛黄转化菌的分离、鉴定及其牛黄转化活力研究

目的 分离和鉴定能够耐受牛胆汁的牛黄转化细菌,并应用到体外培育牛黄的制备。方法 从形成牛黄的牛胆囊胆汁中分离到可在牛胆汁中长期存活且具有较强牛黄转化能力的菌株（NDZNM-01）,观测其外部形态、理化性状、分类学地位、牛胆汁耐受力,以及牛黄转化活力。结果 根据对NDZNM-01菌株外部形态与生理生化特征的检测结果,判断为柠檬酸杆菌属细菌。进一步根据其16S rDNA序列的聚类分析结果,显示该菌株与其他3种柠檬酸杆菌属的细菌聚在一个分支上,但形成单系,属于新发现的菌株。应用菌株NDZNM-01发酵新鲜牛胆汁,其中的胆红素含量增加了2.35倍,胆酸含量增加了2.13倍。结论 综合对NDZNM-01菌株的形态观察、生理生化鉴定,以及分子鉴定结果,NDZNM-01属于一种能够耐受牛胆汁的柠檬酸杆菌属的肠道细菌,具有高效转化牛胆汁为牛黄的活力。该牛黄转化细菌最终命名为Citrobacter bovis NDZNM-01 Wang Houwei,菌种收藏编号为CGMCC24893。