血必净治疗高原多器官功能障碍综合征猪模型的疗效及治疗前后肺组织中 NF －κB mRNA 的表达变化

目的：观察血必净治疗巴马小香猪高原多器官功能障碍综合征（ H－MODS）模型的疗效及治疗前后肺组织中NF－κB mRNA的表达,进一步揭示血必净对H－MODS的防治作用。方法24只巴马小香猪麻醉后随机抽取8只作为空白对照组（ A组）,其余16只采用内毒素（ LPS）制作H－MODS模型后,随机分为模型组（ B组）、血必净治疗组（ C组）,每组8只。血必净治疗组给予血必净注射液3 mL／kg,2次／d;对照组及模型组给予等体积生理盐水,2次／d;共治疗3 d。于不同时间段观察巴马小香猪血白细胞的变化趋势。采用RT－PCR法测定肺组织NF－κB mRNA表达量变化。结果①模型组、血必净治疗组动物死亡率分别为33．3％、16．6％。②与对照组比较,24 h模型组肺泡腔内可见弥散性瘀血,巨噬细胞增多,且有大量红细胞渗出及少量中性粒细胞浸润,肺泡间隔增宽,毛细血管扩张充血,24 h血必净治疗组肺泡腔内出血较少,肺泡壁模糊,有少量红细胞渗出,肺泡间隔仍有增厚。③模型组及血必净治疗组血白细胞（ WBC）呈“勺型”变化。模型组48 h WBC变化幅度较治疗组更明显（ P＜0．05）。④与对照组比较,模型组、治疗组24 h NF－κB mRNA表达量均显著上升（P＜0．01）;与模型组比较,治疗组24 h NF－κB mRNA表达量升高幅度较低（ P＜0．05）;模型组、治疗组72 h NF－κB mRNA表达量仍高于对照组,以模型组升高最明显（ P＜0．05）。结论血必净可明显减轻内毒素所诱导的H－MODS模型动物死亡率,减轻内毒素所致的炎症反应,下调肺组织NF－κB mRNA的表达量,提高H－MODS的救治成功率。     

VetTest 8008半自动生化仪和Hitachi 7600-110全自动生化仪检测猪血清结果比对分析

目的 :探讨实验动物用爱德士Vet Test 8008半自动生化仪与人用Hitachi 7600-110全自动生化仪对健康蕨麻小型猪血清检测结果的差异。方法:利用2种生化仪对6个血清样品的12项指标进行双份平行测定。结果:12项指标中,ALT(丙氨酸转移酶)、Ca(钙)、CREA(肌酐)、GLOB(球蛋白)、PHOS(磷)、TBIL(总胆红素)6项指标之间具有显著差异(P<0.05或P<0.01),并且其回归方程线性关系也具有较大偏倚,其他指标的回归方程线性关系良好。结论:动物血清的生化指标检测应采用动物用爱德士Vet Test 8008半自动生化仪,以便获得与实际更为相符的准确结果。     

CD4+CD25+调节性T细胞在多脏器功能障碍综合征中的变化及药物干预

目的 探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在多器官功能障碍综合征(MODS)大鼠外周血中的变化及乌司他丁和血必净的干预效果.方法 以内毒素(LPS)建立MODS模型,并以乌司他丁和血必净注射液干预.应用流式细胞仪检测Treg水平变化.结果 模型组、乌司他丁组和血必净组CD4+CD25+Treg的百分比明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01);乌司他丁组和血必净组的水平又明显高于模型组(P ＜0.05或P＜0.01),但二组相比无统计学差异(P＞0.05).结论 CD4+CD25+Treg在大鼠MODS中的百分比升高,并参与了MODS的病情调节;乌司他丁和血必净能调升CD4+CD25+Treg的相对含量.     

以重组蛋白为抗原的ELISA法检测旋毛虫抗体

目的 寻求特异性强、敏感性高的旋毛虫病诊断抗原。 方法 以旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在E.coli高效表达的重组蛋白为抗原，分别以兔、猪和健康者血清及旋毛虫病阳性血清为一抗，以辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG、山羊抗猪IgG和山羊抗人IgG为二抗，建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法，并以旋毛虫肌幼虫排泄?鄄分泌（ES）抗原作为检测对照。 结果 以T668重组蛋白为抗原，对兔、猪和人旋毛虫病血清进行检测，阳性检出率为100 ％，且敏感性高（0.016 μg / 孔），与ES抗原检测结果完全一致。 结论 T668重组抗原有望替代ES抗原检测旋毛虫抗体。     

内毒素致多脏器功能障碍综合征绵羊模型的建立

目的建立简单有效的内毒素(lipopolysaccharide,LPS)致多脏器功能障碍综合征(multiple orgendysfunction syndrome,MODS)绵羊模型,观察其血气、血常规和血清生化等的变化特点。方法绵羊全麻后,3μg/kg和6μg/kg LPS分别于30 min和60 min内静脉泵入实验I组和实验II组。以不同时点测定血气、血常规和血清生化的变化。结果 LPS静注后,实验I组和II组绵羊的死亡率分别为33.3%和50%;两实验组3 h内氧合指数明显降低(P<0.05或P<0.01);不同时点天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)和肌酐(CRE)明显升高(P<0.05或P<0.01);白细胞(WBC)数目在2 h明显降低,之后明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论两种剂量的LPS均能成功地建立绵羊MODS模型;血气、血常规和血清生化等均有明显的变化。     

缺血缺氧脑损伤大鼠IL-6和TNF-α的变化及其临床意义

目的：探讨缺血缺氧脑损伤大鼠白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的动态变化及其临床意义。方法：90只Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,再将实验组按造模后4h、8h、12h、24h和48h不同时点分为5个亚组。利用夹闭双侧颈总动脉,并进行缺氧的方法制备模型。以放射免疫分析（RIA）测定血清和脑组织中IL-6和TNF-α的变化。结果：造模后48h内,血清和脑组织中IL-6和TNF-α的水平呈动态变化。实验组中各亚组的两者含量均明显高于对照组（P〈0.01或P〈0.05）。血清和脑组织中两者分别在24h和12h时达到峰值。结论：缺血缺氧后不同时点IL-6和TNF-α的含量呈动态变化;两者可作为缺血缺氧后脑组织损伤程度及修复的临床指标。     

旋毛虫新生幼虫期特异性T668 cDNA在大肠埃希菌中的表达及鉴定

目的对旋毛虫新生幼虫期特异性T668cDNA进行表达及鉴定,以获得基因工程抗原。方法应用PCR技术,从pBK CMV T668重组质粒中扩增到不含信号肽序列的T668cDNA片段,将目的基因克隆于原核表达载体pET28a(+),构建pETT668重组质粒,再将其转化到E.coli表达菌株DE3感受态细胞中,经IPTG诱导表达,以SDS PAGE鉴定表达产物。结果pETT668表达蛋白的分子质量单位为49ku,且随诱导时间的延长蛋白表达量逐渐增加,诱导5h时表达量达到高峰;薄层扫描结果显示,目的蛋白占菌体总蛋白的34.6%。Western blotting检测显示,表达蛋白可被感染旋毛虫家猪血清所识别。结论旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在大肠埃希菌中获得高效表达,且表达蛋白具有良好的抗原性。     

高原地区多脏器功能障碍综合症绵羊模型的建立

目的 建立简单有效的高原实地多脏器功能障碍综合征(MODS)绵羊模型.方法 绵羊随机分为对照组、实验Ⅰ组和实验Ⅱ组,全麻后,3mg/kg和6 mg/kg内毒素(LPS)分别于30 min和60 min内静脉泵入实验Ⅰ组和实验Ⅱ组绵羊,对照组以相同方法泵入生理盐水.以不同时点测定血气、白细胞数目和血清生化的变化.结果 实验Ⅰ组和Ⅱ组绵羊的死亡率分别为50％和70％;3h内氧合指数明显降低(P＜0.05或P＜0.01);不同时点肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)和肌酐(CRE)明显升高(P＜0.05或P＜0.01),而CK和CK-MB在48 h～72 h时则明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01);白细胞(WBC)数目在3h明显降低,之后又明显升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 两种剂量的LPS均能成功地建立高原实地绵羊MODS模型.     

以减毒沙门氏菌为载体的肝细胞生长因子基因对大鼠应激性胃黏膜溃疡模型的影响

背景：近年来对肝细胞生长因子的研究已证实肝细胞生长因子具有促进血管生长，减轻胃黏膜损伤的作用。 目的：观察以减毒沙门氏菌为载体携带肝细胞生长因子基因对束缚-水浸应激诱发大鼠应激性胃溃疡模型的影响。 设计、时间及地点：随机区组设计，实验于2007-03/09 在解放军兰州军区兰州总医院和甘肃省中医学院进行。 材料：40只雄性Wistar大鼠随机分为4组：正常组、模型组、预防组、对照组，每组10只。 方法：应激前用1×1012 cfu/L 携带肝细胞生长因子基因的减毒沙门氏菌给预防组大鼠灌胃，隔天一次，共灌胃6次，每只大鼠0.3 mL/次，同时用同剂量单纯减毒沙门氏菌同方法给对照组大鼠灌胃，正常组与模型组用等体积的碳酸氢钠（10%NaHCO3）同法灌胃。将模型组、预防组和对照组大鼠用束缚-水浸应激法复制应激性胃溃疡模型，18 h后，麻醉后将4组大鼠处死。 主要观察指标：采用比色法和放射免疫分析法检测大鼠血清一氧化氮和血清皮质醇含量，大体及光镜下观察大鼠胃黏膜病理改变，测定胃溃疡指数。 结果：40只大鼠均进入结果分析。①模型组大鼠胃黏膜出现明显的出血及糜烂，预防组的黏膜损伤明显轻于模型组和对照组，应激后预防组的溃疡指数明显低于模型组和对照组（P < 0.01）。②模型组血清一氧化氮含量明显高于正常组(P < 0.01)，预防组血清一氧化氮的含量则明显低于模型组(P < 0.01)。③模型组血清皮质醇含量明显高于正常组(P < 0.01)，预防组血清皮质醇的含量虽高于正常组但明显低于模型组(P < 0.01)。 结论：携带肝细胞生长因子基因的减毒沙门氏菌可通过减少血清中的一氧化氮和皮质醇的含量，预防应激性胃溃疡的发生。     

缺血缺氧脑损伤大鼠NSE和S-100β蛋白的变化及其临床意义

目的探讨缺血缺氧脑损伤大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）和S-100β蛋白（S-100β）的变化及其临床意义。方法75只Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,再将实验组按造模后4 h、8 h、12 h和24 h不同时点分为4个亚组。利用夹闭双侧颈总动脉,并进行缺氧的方法制备模型。以放射免疫法（RIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别测定血清和脑组织中NSE和S-100β蛋白的变化。结果造模后24 h内,血清和脑组织中NSE和S-100β的含量是一个动态变化过程,呈同步变化的趋势,在12 h时均达到峰值。而且,实验组中各亚组的二者含量明显高于对照组（P〈0.01或P〈0.05）。结论缺血缺氧后不同时点NSE和S-100β的含量呈动态变化;二者可作为缺血缺氧后脑组织损伤程度及修复的一个临床参考指标。