人参皂甙Rg3在小鼠肝癌淋巴结转移模型中诱导细胞凋亡的作用

目的:观察人参皂甙Rg3对小鼠肝癌淋巴结转移模型中肿瘤细胞凋亡的诱导作用,探讨人参皂甙Rg3抗肿瘤淋巴结转移的机制.方法:建立小鼠肝癌淋巴结转移模型;光镜和透射电镜下观察各组(Rg3预防组、Rg3治疗组、Rg3与顺铂联合治疗组、顺铂治疗组及对照组)中原发瘤及转移瘤组织的形态学结构改变,并通过流式细胞仪分析肿瘤细胞的凋亡.结果:Rg3预防组及治疗组电镜下(5份样品)可见较多细胞凋亡小体的形成(5/5,4/5);顺铂治疗组的形态改变以细胞破坏为主,凋亡的细胞较少;联合治疗组细胞的凋亡和坏死程度相当.流式细胞学检测分析结果为:Rg3预防组、治疗组及联合治疗组均见细胞凋亡的特征峰(5/5),而顺铂治疗组为1/5,对照组未见凋亡峰(0/5).结论:人参皂甙Rg3抗肿瘤细胞淋巴结转移的作用与诱导细胞凋亡有关.     

间接ELISA法测定转基因小鼠血清中核糖核酸酶抑制因子的表达

[目的]建立间接ELISA法测定血清中核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)含量的方法,并测定在转RI基因小鼠血清中RI的表达情况。[方法]用血清样品包被酶标板,兔抗人RI抗体为一抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗,建立血清RI定量检测的间接ELISA法;取转染了RI基因的小鼠的血清,用上述建立的间接ELISA法测定不同时相小鼠血清中RI的表达水平。[结果]定量检测血清RI的间接ELISA法最适反应条件为一抗最佳稀释度为1∶4000,二抗的最佳稀释浓度为1∶2000。转基因小鼠第2、3周血清中RI含量较低(0.556±0.080),1个月左右达到最高值(0.836±0.113),3个月时明显下降(0.640±0.100)。[结论]间接ELISA法可以用于测定血清中的RI抗原含量。     

着床前后兔子宫内膜糖蛋白变化的电泳分析

本文以二种凝集素ＷＧＡ、ＬＣＡ为探针，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、印迹转移及ＡＢＣ免疫酶标染色方法，连续观察了着床期间（Ｄ５－Ｄ９，交配日为Ｄ０）兔子宫内膜糖蛋白表达的动态变化。发现ＷＧＡ结合４１Ｋｄ、８５Ｋｄ，ＬＣＡ结合４５Ｋｄ、８３Ｋｄ糖蛋白在胚泡进入子宫腔，但尚游离时（Ｄ５，Ｄ６）开始升高，在着床始发的Ｄ７天达高峰，胚泡植入后（Ｄ７．５，Ｄ８）下降，着床完成时（Ｄ９）多已消失。其中４１ＫｄＷＧＡ结合和４５ＫｄＬＣＡ结合特异性糖蛋白变化尤为突出，其含量在未孕时极微，Ｄ７显著增高，着床开始后（Ｄ７．５）即迅速下降，且这两条带主要存在于胚泡着床侧。结果表明：着床期间子宫内膜表面糖蛋白有阶段特异性变化，并该变化可能受到胚泡的局部调节作用。     

转化生长因子-α在胚胎发育和着床中的作用

转化生长因子-α(TGF-α)是表皮生长因子(EGF)家族的重要成员。哺乳动物的胚胎、输卵管和子宫均分泌该细胞因子。它对胚胎的生长、发育和子宫内膜“着床窗口期”的构建有一定影响。本文仅就着床期间TGF-α对胚胎及子宫的作用加以综述。     

肠道菌鉴定培养基的研究进展

目前,细菌学的分类和鉴定技术有了很大的发展,但是,临床上肠道菌鉴定主要还以生化反应为主.单管多用的显色培养基筛选微生物是一种较新的技术,其操作简便、特异性强,能提高微生物细菌鉴定在临床上的地位,单管多用的显色培养基的开发、应用是今后的发展趋势.     

人参皂甙Rg3诱导人肝癌细胞凋亡作用的研究

目的研究人参皂甙Rg3抑制人肝癌细胞生长及诱导凋亡作用机制。方法体外培养人癌细胞(SMMC-721),观察人参皂甙Rg3高剂量组(80μg/ml)、中剂量组(40μg/ml)、低剂量组(20μg/ml)、阳性顺铂对照组(DDP,80μg/ml)和空白对照组(PBS)于12 h、24 h4、8 h、72 h培养后,肝癌细胞的形态学和生长情况。采用MTT法,分析人参皂甙Rg3对细胞生长抑制率的影响。通过电镜观察细胞凋亡的形态学特征。结果应用人参皂甙Rg3后,普通光镜下发现细胞数随Rg3浓度增加而减少,呈剂量依赖性,人参皂甙Rg3高、中、低剂量组细胞生长的抑制率分别为34.6%、19.1%和6.1%,与未处理空白对照组的细胞生长抑制率(5.7%)相比,以人参皂甙Rg3高剂量组于作用72 h后对细胞生长的抑制作用最明显(P<0.001),中剂量组次之(P<0.05),低剂量组及Rg3 2 h,24 h,48 h组未见明显差别。阳性对照顺铂组的细胞生长抑制为22.2%。人参皂甙Rg3作用72 h后的电镜分析显示,细胞出现典型的凋亡形态学改变。结论人参皂甙Rg3具有抑制人肝癌细胞生长作用,与促进细胞凋亡机制有关。     

PCNA、P16、MMP9在人参皂甙Rg3抗肝癌淋巴道转移中的表达及意义

目的 :通过检测PCNA、P16及MMP 9在人参皂甙Rg3抗荷瘤小鼠淋巴道转移中的表达 ,探讨人参皂甙Rg3抗肿瘤作用的机制。方法 :建立小鼠肝癌淋巴道转移模型 ,应用免疫组织化学方法检测PCNA、P16及MMP 9在各实验组 (Rg3预防组、Rg3治疗组、Rg3+DDP合用组、DDP阳性对照组和生理盐水阴性对照组 )的原发瘤及相应转移瘤 (淋巴结 )中的表达水平。结果 :应用人参皂甙Rg3组较未用药组 ,PCNA及MMP 9在原发瘤的表达减少 ,P16的表达增加 ,差异显著 (P <0 0 0 1) ;而在转移瘤中的变化不明显。结论 :人参皂甙Rg3抗淋巴道转移作用的机制与上调P16表达及下调PCNA和MMP9表达有关。     

多媒体技术在成人高等教育生物化学教学中的应用

随着现代教育技术的不断发展,多媒体技术在教学中的应用越来越普遍,已成为一种重要的教学手段.多媒体教学图文并茂,集光、声、色、动画于一体,使教学活动更加形象、直观、生动,是一种全新的教学手段.     

人α1,3-岩藻糖基转移酶VII荧光真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pIRES2-EGFP-FUT7真核表达载体。方法:采用RT-PCR方法获得α1,3-岩藻糖基转移酶VII(FUT7)全长基因,克隆至pMD18-TSimple载体后,将FUT7亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体并进行鉴定。通过脂质体转染到子宫内膜RL95-2细胞中,荧光显微镜下观察并经RT-PCR检测FUT7的表达。结果:测序及酶切鉴定证明获得人全长FUT7基因,FUT7基因正确插入pIRES2-EGFP中,在荧光显微镜下观察到了绿色荧光蛋白在RL95-2细胞中的表达,半定量RT-PCR检测结果显示FUT7的表达明显增加。结论:成功构建了绿色荧光蛋白为报告基因的FUT7真核表达载体,并检测到在RL95-2细胞中的表达,为研究FUT7及其合成的糖抗原sLex在胚胎着床中的作用奠定了基础。     

人α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅳ荧光真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pEGFP-N1-FUT4真核表达载体.方法:采用RT-PCR方法获得α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅳ(FUT4)全长基因,克隆至pEGFP-N1- FUT4表达载体并进行鉴定.通过脂质体转染到人表皮癌细胞系A431中,荧光显微镜下观察并经逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测FUT4的表达. 结果:测序及酶切鉴定证明获得人全长FUT4基因,FUT4基因正确插入pEGFP-N1中,在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白在A431细胞中的表达,RT-PCR和Western blot检测结果显示FUT4的表达明显增加.结论:成功构建绿色荧光蛋白为报告基因的FUT4真核表达载体,并检测到在A431细胞中的表达.