一氧化氮在全脑缺血再灌注大鼠脑损害中的作用

目的　探讨一氧化氮在全脑缺血 2 0min后再灌注大鼠脑损害中的作用。方法　雄性Wistar大鼠 84只 ,体重 (2 2 0± 2 0 )g ,随机分为对照组 (12只 )和缺血组 (72只 ) ,后者设 8、2 4、48、72、96、16 8h 6个时相点。参照Pulsinelli等的方法制作大鼠全脑缺血 2 0min再灌注模型 ,于再灌注后 8、2 4、48、72、96、16 8h活杀取血及海马组织 ,对照组施行麻醉及手术 ,但不缺血 ,观察 72h后取血及海马组织 ,测定血清NSE、海马NO含量及海马CA1区锥体神经元 (Pyramidalneuron ,PN)密度。结果　①海马NO含量于缺血再灌注后 48h明显升高 ,72h达峰值 (与对照组比较P均 <0 .0 1) ,以后逐渐下降 (96h仍明显高于对照组水平 ,P <0 .0 5 ) ,16 8h降至接近对照组 ;②缺血组各时相点血清NSE含量均显著高于对照组 (P 均 <0 .0 1) ;③缺血组海马CA1区PN密度呈明显的逐渐减少趋势 ,自 48h后均明显低于对照组 (P均 <0 .0 1) ,再灌注后 16 8h仅为对照组水平的 2 2 .8% ;④缺血再灌注后海马NO含量与血清NSE水平的变化呈显著的线性正相关 (r =0 .90 2 2 ,P <0 .0 1)。结论　NO在全脑缺血再灌注损伤中起着重要作用 ,是引起海马CA1区锥体神经元DND发生的主要因素之一。     

人正常肠上皮细胞内毒素信号转导相关受体mRNA的表达

目的 研究人正常肠上皮细胞内毒素信号转导相关受体TLR4、TLR2、CDl4和MD2 mRNA的表达情况，以及内毒素刺激对其表达的影响。方法 提取有、无内毒素刺激的培养人肠上皮细胞和阳性对照THP1细胞的总RNA，用RT—PCR方法检测TLR4、TLR2、CDl4和MD2 mRNA的表达。结果 和THP1细胞相比，人肠上皮细胞TLR4、TLR2、CDl4和MD2 mRNA的表达均较弱。内毒素刺激后，TLR4、CDl4和MD2 mRNA表达明显减弱，而TLR2的表达无显著变化。结论 人正常肠上皮细胞组成性低表达TLR4、CDl4和MD2 mRNA，且在受脂多糖(LPS)刺激后反应性下调其表达，这可能是肠上皮细胞(IEC)耐受LPS的关键机制之一，而TLR2在IEC耐受LPS的机制中可能不起主要作用。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3对缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡的影响

背景：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在正常细胞中以酶原形式存在，受凋亡刺激因素作用后能够被激活从而引起细胞凋亡。 目的：通过检测脑海马组织胞质S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性及海马区神经元凋亡情况，探讨全脑缺血再灌注后脑海马神经元凋亡与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的关系。 设计：随机对照实验。 单位：解放军第三军医大学西南医院急救部。 材料：实验于1999-01／04在解放军第三军医大学西南医院完成。选取雄性Wistar大鼠182只，随机分为3组：假手术组14只，脑缺血再灌注组84只，乙酰天冬氨酰谷氨酰缬氨酰天冬氨酸乙醛（acetyl-asp-glu-valasp．aldehyde，AC-DEVD-CHO）治疗组84只，后两组均设立缺血再灌注8，24。48，72，120，168h 6个时相点，每个时相点14只大鼠。 方法：脑缺血再灌注组、AC-DEVD-CHO治疗组建立大鼠全脑缺血20min再灌注模型，分别于再灌注后8，24，48，72，120，168h处死取海马组织；假手术组施行麻醉及手术，但不夹闭颈总动脉和烧灼椎动脉，术后观察72h后处死取海马组织备检。以单位质量标本于单位时间内裂解产生的氨甲基香豆素量表示标本中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性。各组不同时相点脑组织切片封固后在荧光显微镜下于330～350nm处观察脑海马细胞凋亡情况。 主要观察指标：①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化。②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系。 结果：实验纳入182只大鼠，脱落14只，共168只大鼠进入结果分析。①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化：假手术组术后观察72时为0。与脑缺血再灌注组比较，AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24，48，72，120，168h均明显降低[（1．71&;#177;0．03），（1．22&;#177;0．03）；（2．77&;#177;0．09），（1．59&;#177;0．7）；（5．54&;#177;0．51），（2．3&;#177;0．19）；（6．28&;#177;1．71），（3.43&;#177;0．46）；（3．11&;#177;1．21），（1．73&;#177;0．14）nkat／kg；P〈0．05或0．01]。②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况：每400倍视野下，假手术组术后观察72h为（1．2&;#177;0．4）个。与脑缺血再灌注组比较，AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24，48，72，120，168h均明显降低[（6．4&;#177;1．7），（2．8&;#177;0．8）；（11．8&;#177;1．3），（5．8&;#177;1．9）；（19．8&;#177;3．1），（10．0&;#177;1．9）；（31．2&;#177;5．9），（16．4&;#177;2．4）；（19．8&;#177;2．3），（9．0&;#177;2．3）个／400倍视野；P〈均0．011。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系：脑缺血再稽注组、AC-DEVD-CHO治疗组均行直线相关分析，二者的变化呈显著正相关（r分别为0．9356及0．9800，P均〈0．01）。 结论：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的激活是引起海马神经元调亡的主要因素之一，在缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中起着重要作用。     

中毒患者血液灌流期间的监护与并发症处理措施探讨

目的探讨中毒患者血液灌流中的有效监护和并发症处理措施。方法对142例中毒患者进行血液灌流治疗,监测血流动力学、出凝血时间、电解质和药物浓度等相关指标,及时发现和处理低血压、血小板减少、凝血障碍、电解质紊乱等并发症,使血液灌流得以顺利进行。结果142例中院内死亡2例,分别为百草枯和有机磷中毒,死于晚期并发症;术中出现低血压42例,低钠、钾29例,血肿形成5例,血尿3例,均予相关治疗后短期内缓解、纠正。结论血液灌流期间专人严密监测血液中中毒物质浓度,确定灌流效果,设立血液灌流并发症防治预案,有预见和有准备的防治并发症,可以保证血液灌流顺利进行。     

本科临床实习岗前急救技能培训中模拟人系统的应用及效果分析

目的研究模拟人系统在本科生临床实习岗前急救技能培训中的应用。方法在本科生临床实习岗前培训中引入模拟人系统,采用四段式教学互动的学导式教学法,在培训结束和实习半年后通过学生考核成绩和满意度调查评价教学效果。结果岗前培训结束后,所有学生在理论和操作考试中均能顺利通过,合格率达100%;两组学生对所采取的教学方式较为接受,对教学效果比较满意,满意率均达100%;在实习半年后对部分学生的调查表明学生的满意程度均有所下降,分别为89.6%和86.1%;带教教师对部分学生的总体评价表明两组学生掌握急救理论知识和实际操作能力、配合能力较高,合格率分别为89.6%和88.9%。结论应用模拟人系统有利于增加教学的直观性,提高学生的主动性,值得在教学中进一步推广。     

人肠上皮细胞内毒素低反应性及其机制探讨

为探讨人正常肠上皮细胞对内毒素（LPS）刺激低反应性的机制，用ELISA法检测LPS刺激肠上皮细胞18h后IL－8的分泌水平，用RT－PCR及RPA法检测肠上皮细胞LPS跨膜信号转导相关受体TLR4，TLR2，CD14和MD2 mRNA的表达及LPS刺激对其表达的影响，结果表明：LPS刺激不能引起肠上皮细胞IL－8的分泌，而IL－1β刺激却能引起其分泌；人正常肠上皮细胞TLR4，TLR2，CD14和MD2mRNA的表达均较弱，LPS刺激后，TLR4，CD145 CD14和MD2 mRNA表达进一步降低，而TLR2的表达无显著变化，说明肠上皮细胞对LPS的低反应性与细胞表达LPS相关受体低表面有一定的内在联系，从而进一步证实TLR4，CD14，MD2在介导LPS跨膜信号转导中起重要作用。     

Caspase-3在缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中作用的实验研究

目的探讨一种在天冬氨酸残基后进行裂解的半胱氨酸蛋白酶caspase-3(cystein protease cleaving after an aspresidue,caspase-3);在全脑缺血20min再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中的作用.方法雄性Wistar大鼠182只,体质量(220±20)g,分为对照组(14只)、缺血组(84只)和Ac-DEVD-CHO治疗组(84只),后两组设立8、24、48、72、120、168 h 6个时相点.按Pulsinelli等的方法制作大鼠全脑缺血20min再灌注模型,别于再灌注后上述6个时相点处死取海马组织,对照组施行麻醉及手术,但不缺血,观察72 h后活杀取海马组织,分别测定海马组织胞质(S-100)中caspase-3活性及海马区神经元凋亡情况,分析caspase-3活性与海马区神经元凋亡的关系.结果①海马组织胞质中caspase-3活性在对照组中为0,缺血再灌注后酶活性随时间的推移逐渐升高,至120 h达最高点,168 h则有所下降;Ac-DEVD-CHO治疗后并不能完全抑制酶的活性,但显著降低了各时相点酶的活性(8 h P＞0.05,24～120 h P＜0.01,168 h P＜0.05);②对照组海马中偶见凋亡细胞,缺血再灌注8 h凋亡细胞无明显增加(P＞0.05),24 h凋亡细胞明显增加,120 h达峰值,168 h有所减少,但24～168 h各时相点凋亡细胞数均明显多于对照组(P均＜0.01);Ac-DEVD-CHO治疗后并不能完全阻止凋亡细胞的增加,但与相应时相点缺血组比较,除8 h外,显著降低了凋亡细胞的升高程度(P均＜0.01).凋亡细胞主要分布在CA1区,CA2、CA3区于48h后亦可见凋亡细胞,但数量明显少于CA1区,齿状回区仅偶见凋亡细胞;③分别以缺血组、治疗组各时相点S-100中caspase-3活性与海马区神经元凋亡数行直线相关分析,结果二者的变化呈显著正相关(r分别为0.9356及0.9800).结论caspase-3在缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中起着重要作用,Caspase-3的激活是引起海马神经元凋亡的主要因素之一.     

大剂量糖皮质激素对下丘脑室旁核神经元促肾上腺皮质激素释放激素mRNA转录及其蛋白表达的调节作用

目的 观察大剂量糖皮质激素（GC）对下丘脑室旁核（PVN）神经元促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）蛋白表达、CRH mRNA转录的调节作用，以了解大剂量GC与生理剂量的GC经典作用是否存有差异。方法 Wistar大鼠60只，随机分为10μmol／LDEX组、10μmol／L地塞米松（DEX）组、等渗盐水组以及预先予以10^-1mol／LRU486，再予以10μmol／LDEX组（以上均为终浓度），通过预先股静脉置管给人。利用免疫组织化学与激光共聚焦扫描技术，观察CRH蛋白表达的情况；利用原位杂交技术，观察PVN神经元CRH mRNA转录的变化。结果 终浓度10μmol／LDEX作用约20min后，PVN神经元胞浆内出现CRH mRNA阳性染色颗粒；作用约30min后，出现CRH蛋白阳性荧光颗粒。预先拮抗糖皮质激素受体（GR）后，上述10μmol／LDEX的促进作用被逆转。10μmol／LDEX、等渗盐水与空白对照均无类似表现。结论 大剂量GC可使PVN神经元CRH基因表达上调，这与经典GC的作用具有较大差异，可能由于大剂量GC依赖于mGR而经典GC的作用主要经由iGR所致。