宫内蛋白营养不良对成年仔鼠肝脏糖皮质激素受体基因启动子甲基化的影响

目的 研究妊娠期蛋白营养不良对宫内生长受限(IUGR)仔鼠肝脏中DNA甲基转移酶1(DNMT1)的水平及糖皮质激素受体(GR)基因启动子甲基化水平和表达的影响.方法 采用妊娠期限制蛋白饮食法建立IUGR模型,IUGR组和正常对照组各取8只成年雄性仔鼠(8周)分离肝脏,采用甲基化敏感限制性内切酶结合荧光定量反转录PCR法检测其肝组织GR基因的启动子甲基化水平,实时荧光定量PCR法检测其肝脏中GR 和DNMT1的mRNA表达,蛋白印迹实验进一步测定其肝脏DNMT1的蛋白水平变化.结果 8周龄IUGR组仔鼠肝脏中GR基因启动子的甲基化水平较同龄正常对照组低28.4%(P＜0.01),定量PCR结果显示IUGR组肝脏中GR mRNA水平较正常对照组高83.0%(P＜0.05).同时,IUGR组仔鼠肝脏中DNMT1 mRNA水平较正常对照组低32.8%(P＜0.05),相关分析证实DNMT1的mRNA水平与GR启动子的甲基化水平呈正相关(P＜0.05).Western blot结果进一步证实IUGR组肝脏中DNMT1蛋白表达水平较正常对照组减低(P＜0.05).结论 宫内营养不良的仔鼠肝脏中DNMT1表达降低,可能引起GR基因启动子的甲基化水平降低,诱导GR蛋白表达.这种持续存在的表观遗传学改变可能与其成年2型糖尿病的发生密切相关.     

宫内生长受限大鼠肝脏组蛋白H3乙酰化的研究

目的：研究孕期营养不良造成的宫内生长受限(intrauterine growth retardation，IUGR)大鼠肝脏中组蛋白H3的乙酰化水平，以及组蛋白去乙酰化酶1 (histonedeacetyl-ases，HDAC1)的表达变化，探讨两者之间的相互联系。方法：采用孕期全程低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型，分离成年雄性子鼠（8周）的肝脏，采用荧光定量RT-PCR技术检测肝脏中HDAC1的mRNA表达，Western blot方法检测肝细胞核中HDAC1的蛋白含量，以及组蛋白H3/K9的乙酰化水平。结果：IUGR组HDAC1的mRNA水平仅是对照组的54%（t=2.042，P＜0.05），肝细胞核中的HDAC1蛋白表达同样明显低于对照组(438±47 vs 1 128±110)（t=2.179，P＜0.05）。与之相反，与对照组（10.5±1.2）%相比，IUGR大鼠肝脏中乙酰化的H3/K9占总H3组蛋白的百分比（17.3±1.6）%明显增高（t=3.597，P＜0.01），且核中的HDAC1蛋白水平与H3/K9乙酰化水平明显负相关（r=-0.781，P＜0.01）。结论：IUGR大鼠肝细胞核中HDAC1蛋白表达降低，引起组蛋白H3的乙酰化水平增高，染色质的表观遗传学变化可能是肝脏某些基因转录调控变化的分子基础。［中国当代儿科杂志，2009，11（9）：753-756］     

Livin与Smac在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的 探讨Liven与Smac在子宫内膜异位症(EM)发生、发展中的意义.方法 采用免疫组化S-P法,检测Livin与Smac蛋白在40例EM异位内膜和34例EM在位内膜及30例正常子宫内膜组织中的表达.结果 Livin在正常子宫内膜、EM在位内膜及EM异位内膜组织中的表达强度逐渐增高,3组间差别有统计学意义(P<0.01).Livin的表达与月经周期无关(P>0.05).Smac与Livin相反,在3组间的表达强度呈递减趋势,差别有统计学意义(P<0.01).Same在EM在位及异位内膜组织中的表达与月经周期无关(P>0.05),而在正常子宫内膜组织中分泌期的表达高于增生期(P<0.05).Livin与Smac在EM中的表达强度呈明显的负相关(r=-0.890,P<0.01).二者在EM中的表达强度与R-AFS分期无关(P>0.05).结论 Livin与Same蛋白在子宫内膜异位症在位及异位内膜组织中的异常表达对子宫内膜异位症的发生可能起着重要作用.     

慢病毒介导的Canstatin基因转移对脐静脉血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的：构建携带Canstatin基因的慢病毒载体,体外转染脐静脉血管内皮细胞ECV304,观察其体外培养的脐静脉血管内皮细胞增殖及凋亡的影响。方法：应用基因重组技术构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Canstatin,通过酶切、测序验证Canstatin基因后,将pGC-FU-Canstatin质粒和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Canstatin基因重组慢病毒GC-FU-Cansta-tin,并测定病毒滴度。将重组慢病毒转染靶细胞人脐静脉血管内皮细胞ECV304,通过Western blotting检测靶细胞中Canstatin的表达。采用MTT法观察Canstatin基因对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外细胞增殖的影响。TUNEL染色、流式细胞仪AnnexinV/碘化丙啶双染法,检测慢病毒介导的Canstatin基因诱导脐静脉血管内皮细胞的凋亡。结果：pGC-FU-Canstatin中携有正确的Canstatin基因序列;pGC-FU-Cansta-tin和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共转染包装细胞293T产生重组病毒GC-FU-Canstatin;检测病毒滴度为1×109TU/ml;Western blotting检测到Canstatin蛋白在靶细胞中持续表达。Canstatin（感染复数分别为25和50）作用72h后,ECV304细胞增殖数目显著少于PBS组和空载体组（P〈0.01）;TUNEL染色,以MOI为25的重组慢病毒GC-FU-Canstatin作用于人脐静脉血管内皮细胞ECV304细胞72h后,出现典型的凋亡形态学改变。以感染复数为25的GC-FU-Canstatin处理ECV304细胞72h后,细胞凋亡率为（21.63±1.32）%,PBS组为（2.87±0.76）%,空载体组为（2.66±0.69）%,转基因组与空载体组、PBS组相比差异均有显著统计学意义（P〈0.01）。结论：慢病毒介导的Canstatin基因可显著抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外增殖,同时对人脐静脉血管内皮细胞的凋亡具有促诱导作用。     

ATF4与RPL41在输卵管癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测ATF4与RPL41在输卵管癌组织中的表达情况,并探讨其表达特点以及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测输卵管癌标本50例和正常输卵管标本26例中ATF4与RPL41的表达情况,并分析其与输卵管癌临床病理参数之间的关系。结果:ATF4在输卵管癌组织中阳性表达率为86.0%,明显高于正常输卵管组织中的38.5%,差异具有统计学意义（P＜0.001）;RPL41在正常输卵管组织中阳性表达率为80.8%,明显高于输卵管癌组织中的38.0%,差异有统计学意义（P=0.001<0.05）。且ATF4与RPL41在输卵管癌组织中的表达有相关性（r=-0.296,P=0.037<0.05）。结论:ATF4与RPL41可能在输卵管癌的发生中起重要作用,高表达的ATF4对诊断原发性输卵管癌可能有指导意义。     

妇产科留学生教学探索与思考

留学生教育是医学教育的重要组成部分,妇产科学作为重要的临床课程,成为妇产科留学生教学重点。总结妇产科留学生教学经验,探索教学方法,提高教学质量。     

宫内生长受限大鼠骨骼肌蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4的表达和活性变化

目的 研究宫内营养不良造成的宫内生长受限(IUGR)子鼠骨骼肌中蛋白激酶B(PKB)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达和胰岛素诱导活性变化,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制.方法 通过妊娠期全程低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型,采用Western blot方法检测雄性子鼠(8周)基础状态下骨骼肌PKB的表达和胰岛素刺激后磷酸化水平的变化,同时测定GLUT4的表达和胰岛素刺激后向细胞膜的转位.结果 胰岛素刺激前后,IUGR鼠骨骼肌中PKB和磷酸化的PKBSer473表达水平都明显低于对照鼠(P<0.01),胰岛素刺激使对照组的PKBSer473磷酸化水平明显增加(P<0.01),IUGR组仅轻度增加.两组子鼠骨骼肌中总GLUT4的蛋白表达没有差别,胰岛素刺激后,对照组细胞膜中GLUT4蛋白浓度显著升高(P<0.01),IUGR组增高的幅度明显低于对照组(P<0.01).结论 宫内蛋白营养不良造成的IUGR鼠骨骼肌中PKB的表达和活性降低,导致胰岛素介导的GLUT4转位受阻,可能引起葡萄糖摄取和利用障碍,促进糖尿病发生.     

慢病毒介导的Canstatin基因转移对脐静脉血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的:构建携带Canstatin基因的慢病毒载体,体外转染脐静脉血管内皮细胞ECV304,观察其体外培养的脐静脉血管内皮细胞增殖及凋亡的影响。方法:应用基因重组技术构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Canstatin,通过酶切、测序验证Canstatin基因后,将pGC-FU-Canstatin质粒和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Canstatin基因重组慢病毒GC-FU-Cansta-tin,并测定病毒滴度。将重组慢病毒转染靶细胞人脐静脉血管内皮细胞ECV304,通过Western blotting检测靶细胞中Canstatin的表达。采用MTT法观察Canstatin基因对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外细胞增殖的影响。TUNEL染色、流式细胞仪AnnexinV/碘化丙啶双染法,检测慢病毒介导的Canstatin基因诱导脐静脉血管内皮细胞的凋亡。结果:pGC-FU-Canstatin中携有正确的Canstatin基因序列;pGC-FU-Cansta-tin和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共转染包装细胞293T产生重组病毒GC-FU-Canstatin;检测病毒滴度为1×109TU/ml;Western blotting检测到Canstatin蛋白在靶细胞中持续表达。Canstatin(感染复数分别为25和50)作用72h后,ECV304细胞增殖数目显著少于PBS组和空载体组(P<0.01);TUNEL染色,以MOI为25的重组慢病毒GC-FU-Canstatin作用于人脐静脉血管内皮细胞ECV304细胞72h后,出现典型的凋亡形态学改变。以感染复数为25的GC-FU-Canstatin处理ECV304细胞72h后,细胞凋亡率为(21.63±1.32)%,PBS组为(2.87±0.76)%,空载体组为(2.66±0.69)%,转基因组与空载体组、PBS组相比差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论:慢病毒介导的Canstatin基因可显著抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外增殖,同时对人脐静脉血管内皮细胞的凋亡具有促诱导作用。     

宫内生长受限大鼠肝脏磷酸肌醇-3-激酶信号通路分子的变化

目的：研究宫内生长受限(IUGR) 成年子鼠肝脏中受体后胰岛素信号传导通路分子的表达变化，探讨IUGR个体发生2型糖尿病的分子机制。方法：通过低蛋白饮食法建立大鼠IUGR模型，采用Western blot检测雄性子鼠（8周）基础状态下肝脏中胰岛素受体底物（IRS）2、磷酸肌醇-3-激酶（PI-3K）、糖原合成酶激酶（GSK）3β的蛋白表达水平，以及胰岛素刺激后蛋白激酶B（PKB）的磷酸化水平变化。结果：基础状态下，IUGR成年子鼠肝脏IRS-2的蛋白表达与正常对照差异无显著性，PI-3K的催化亚单位p110的蛋白表达比对照组明显降低；而GSK-3β蛋白含量比对照组明显增加，差异均有显著性（P<0.01）。基础状态和胰岛素刺激状态下，IUGR组肝脏PKB和磷酸化的PKB-Ser473表达水平都明显低于对照组（P<0.01），胰岛素刺激后，对照组肝脏磷酸化的PKB-Ser473表达明显增加，是基础状态的182%（P<0.01），而IUGR组肝脏磷酸化的PKB-Ser473的增加幅度较小，仅是基础状态的123%（P<0.05）。结论：宫内蛋白营养不良造成的IUGR鼠机体胰岛素抵抗的发生可能与肝脏中PI-3K和其下游靶蛋白PKB的表达和活性降低，以及GSK-3β的表达增高有关。［中国当代儿科杂志，2009，11（3）：221-224］     

利宁凝胶在计划生育手术及宫腔镜检查中应用的临床观察

扩张宫颈是关系到计划生育手术和宫腔镜检查能否成功进行的一个关键步骤 ,也是目前研究的一个焦点。我院于 2 0 0 0年 7月～ 2 0 0 0年 12月应用利宁 (润滑止痛 )凝胶行宫颈粘膜局麻 ,取得了良好的效果 ,现报道如下。1　资料与方法1 1　一般资料1 1 1　对象及分组　 2 0 0 0年