人淀粉样前体蛋白基因与绿色荧光蛋白融合基因筛选系统的建立

目的 构建携带人淀粉样前体蛋白（APP）的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）载体。以利于初步筛选对APP mRNA水平作用的药物。方法 将pEGFP质粒和携带野生型APP695亚型的pXCJL经Hind Ⅲ酶切，连接．PCR初筛，酶切鉴定。进一步经测序证实。携带野生型人类APP751亚型cDNA的pCDNA3．1质粒用XbaⅠ酶切．Klenow酶填平．再用HindⅢ酶切．回收APP751片段；质粒EGFP用SmaⅠ和Hind Ⅲ酶切。将目的基因APP751片段与EGFP载体片段连接生成重组质粒．酶切鉴定．测序证实。构建好的重组质粒转染COS-7细胞．观察EGFP的表达情况。结果 APP695和APP751重组质粒上的EGFP在COS-7细胞内得以表达。结论 构建的APP—EGFP融合基因重组质粒．有助于方便、快速地初筛出作用于APP mRNA水平的药物。     

小干扰RNA对人淀粉样前体蛋白基因的沉默作用

目的 观察小干扰RNA(siRNA)对人淀粉样前体蛋白(APP）基因的沉默作用，方法 该研究将设计好的一对寡核甘酸在细胞内源性地转录成小发夹RNA（shRNA)，同时构建了携带两个APP亚型的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的GFP-APP重组质粒。利用EGFP作为报告基因。在COS-7细胞内通过共转染siRNA表达质粒和GFP-APP的重组质粒来观察沉默效应。结果 针对APP的siRNA可有效地下调APP基因。结论 针对APP的siRNA将不仅在研究APP基因功能和深入研究阿尔茨海默病（AD）的病理分子机制上，而且在运用siRNA这种新型的反应核酸药物治疗AD方面扮演重要角色。     

小干扰RNA对人淀粉样前体蛋白基因的沉默作用

目的观察小干扰RNA(siRNA)对人淀粉样前体蛋白(APP)基因的沉默作用.方法将设计好的一对寡核苷酸在细胞内源性地转录成小发夹RNA(shRNA),同时构建了携带2个APP亚型的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的GFP-APP重组质粒;利用EGFP作为报告基因,在COS-7细胞内通过共转染siRNA 表达质粒和GFP-APP重组质粒来观察沉默效应.结果针对APP的siRNA可有效地下调APP基因.结论针对APP的siRNA将不仅在研究APP基因功能和深入研究阿尔茨海默病(AD)的病理分子机制上,而且在运用siRNA这种新型的反义核酸药物治疗AD方面扮演重要角色.     

Induction of Silencing Effect of Swedish Mutant Amyloid Precursor Protein by RNA interference

RNA interference (RNAi), as a novel technique of si- lencing genes, brings thrilling breakthrough in Alzheimer disease (AD) research. As a precursor of abnormally elevated Aβ, mutated APP is selectively inactivated by siRNA while wild type APP protein remains unaffected. Therefore, siRNA brings hope to gene therapy of familial AD (FAD) and further study of AD etiology. In order to observe the siRNA triggered silencing effect of APP, we constructed a green fluorescence protein (G…     

RNA干扰对阿尔茨海默病家族性瑞典型APP突变的沉默作用

目的诱导小干涉RNA(small interference RNA，siRNA)对阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白家族性瑞典型突变(APPswe)的沉默作用。方法设计一对针对APPswe的寡核苷酸，构建成内源性表达相应siRNA的质粒，与构建的APP-EGFP重组质粒瞬时共转染COS-7细胞，利用GFP报告基因来间接观察siRNA对APPswe的沉默作用。结果siRNA可有效地下调突变型APP，相比APPwt而言，针对突变型APP的siRNA对APPswe的沉默作用更强。结论针对APPswe的siRNA可有效地沉默APPswe基因，并有一定的等位基因特异性。因此，针对APPswe的siRNA将在阿尔茨海默病治疗研究领域扮演重要角色。