基因转染DKK1对17β-雌二醇促进子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞VEGF和MMP-9表达的影响

目的 利用基因转染pcDNA3.1-DKK1阻断Wnt/β-catenin信号通路,观察对17β-雌二醇(17β-E 2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(ESCs)中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路在介导雌激素促进异位内膜粘附、侵袭和转移中的作用.方法 体外分离培养内异症患者ESCs,利用Lipofectamine TM 2000,分别将pcDNA3.1-DKK1质粒,pcDNA3.1空载质粒转入ESCs.选用10 -10 mol/L 17β-E 2处理ESCs不同时间,RT-PCR和Western blot检测转染DKK1前后ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达.结果 17β-E 2能明显促进内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白的表达,于10 -10 mol/L作用48 h最明显(P ＜0.05).转染pcDNA3.1-DKK1质粒组内异症患者ESCs VEGF和MMP-9 mRNA及蛋白表达较空白组和空载体组均显著下降(均 P ＜0.05).结论 阻断Wnt/β-catenin信号通路能明显抑制17β-E 2对内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达的促进作用.雌激素可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进内异症患者在位子宫内膜的异位种植.     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞ERK1/2信号转导通路活化的影响

目的 研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路活化的影响,探讨ERK1/2信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用.方法 体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞.用1×10-6 mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间(0～120 min),然后用MTT法和免疫印迹法(Western blot)检测子宫内膜间质细胞的活性和ERK1/2的活化情况,检测出子宫内膜间质细胞活性最强的时间点.用Western blot和MTT法分别检测不同浓度ERK1/2抑制剂PD98059对1×10-6mol/L 17β-E2作用20 min后子宫内膜间质细胞活性及ERK1/2活性的变化.结果 1×10-6 mol/L 的17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,ERK1/2活化在17β-E2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着PD98059作用浓度的增加,ERK1/2活化水平逐渐下降,浓度为50 μmol/L时已被完全阻断;随着PD98059作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50 μmol/L和100 μmol/L时,活性最低,但此时仍高于空白对照组.结论 17β-E2增强子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的ERK1/2信号转导通路有关.     

免疫相关性不良妊娠患者临床药学的研究

目的 对免疫相关性妊娠多学科诊疗(MDT)门诊的全程化药学服务模式、流程及成果进行介绍，为提升药物治疗有效性、安全性和患者依从性提供参考。方法 以合并风湿免疫的基础疾病、或者因为免疫异常等因素而存在复发性流产的患者为服务对象，介绍本院免疫相关性妊娠MDT门诊的团队构建、工作模式和临床药师职责。统计分析215例免疫相关性妊娠患者的一般情况、疾病情况、合并用药情况、药学服务内容、患者孕期并发症发生情况及母儿结局。结果 药师为215例MDT门诊就诊患者提供了全程化药学服务，包括用药史回顾、医嘱审核、药物重整、用药教育和生活方式指导，回答家属咨询，解答患者疑问，并就用药方案及治疗方案调整提出意见建议，开展患者随访、药物不良反应监测等，患者满意度达100%。在有效随访且有妊娠结局的53例就诊患者中，活产47例，活产率87.04%;2例自然流产，自然流产率3.78%;2例治疗性流产，治疗性流产率3.78%;2例胎死宫内，胎死宫内发生率3.78%;1例出生缺陷，产检发现胎儿脑积水，母亲选择性终止妊娠(羊膜腔穿刺引产),出生缺陷率为1.86%,相较于我国总人群的出生缺陷发生率(5.6%)明显偏低。18...     

阻断Wnt/β-catenin信号通路对17β-雌二醇作用后子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞活化的影响

目的 探讨17β-雌二醇(17β-E2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cell,ESC)内是否存在功能性Wnt/β-catenin信号通路的激活,以及阻断该信号通路对ESC活化的影响.方法 体外分离培养内异症患者在位ESC,用0.1 nmol/L 17β-E2处理ESC 48 h.免疫细胞化学染色检测17β-E2作用后β-cate-nin在ESC中的表达.通过转染T细胞因子(T-cell facter,TCF)依赖的荧光索酶报告质粒(PGL3一OT)检测ESC内的Wnt/β-catenin信号,以PGL3-OF为阴性对照.将TCF的显性负性突变体(dominant negative TCF,dnTCF)表达质粒转染ESC,阻断Wnt/β-catenin信号的转导,用Western blot法检测ESC血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达变化.结果 免疫细胞化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在ESC核内的表达.17β-E2(0.1 nmol/L)作用后,转染相同量的质粒,PGL3-OT组细胞荧光活性明显高于PGL3-OF组(P<0.01).Western blot检测结果显示17β-E2能明显促进ESC VEGF和MMP-9的表达;转染dnTCF-3阻断Wnt/β-catenin信号通路,ESC中VEGF和MMP-9的表达较转染空载体(pcDNA3)组均显著下降(均P<0.01).结论 17β-E2能促进内异症患者ESC Wnt/β-catenin信号通路的激活,阻断该信号通路可抑制ESC的活化.     

新冠肺炎疫情对辅助生殖中心发展的影响——以四川省人民医院为例

目的:了解新冠肺炎疫情对四川省人民医院辅助生殖中心发展的影响.方法:对2020年1-6月及2019年1-6月(对照数据)门诊量、建档周期量、试管婴儿助孕周期方案、控制性超促排卵周期、冻胚移植周期以及因个人原因取消周期数进行比较.结果:与2019年同一时期比较,2020年1-3月新冠肺炎疫情暴发阶段,助孕周期方案明显以返院时间更长的超长方案为主,而4-6月后疫情阶段,以取卵周期时间更短的拮抗剂方案为主;且两个时间段的门诊量、建档周期量、控制性超促排卵周期及冻胚移植周期均较2019年同一时期有不同程度减少.结论:新冠肺炎疫情对辅助生殖中心门诊量及患者辅助生殖计划均有一定程度影响,应积极采取有效措施改进辅助生殖中心管理及服务质量,提高患者辅助生殖效率.     

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞PI3K/Akt信号转导通路活化的影响

目的 研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞磷脂酰肌醇3激酶/Akt(PI3K/Akt)信号转导通路活化的影响,探讨PI3K/Akt信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用. 方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞.用1×10-6 mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间(0、10、20、30、120 min),然后用MTT法检测子宫内膜间质细胞的活性,Western blot法检测细胞Akt的活化情况,确定子宫内膜间质细胞活性最强的时间点.用Western blot和MTT法分别检测不同浓度PI3K抑制剂LY294002对1×10-6 mol/L 17β-E2作用子宫内膜间质细胞20 min后Akt、细胞活性的影响. 结果 1×10-6 mol/L 17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,Akt活化在17β-E2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着LY294002作用浓度的增加,Akt活化水平逐渐下降,浓度为50 μmol/L时已被完全阻断;随着LY294002作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50 μmol/L和100 μmol/L时活性最低,但此时仍高于空白对照组.结论 17β-E2增强在位子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的PI3K/Akt信号转导通路有关.