Survivin启动子介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因的抗肿瘤研究

目的 探讨Survivin启动子介导的CD/5-FC自杀系统的抗肿瘤效果.方法 利用Survivin启动子替换pEGFP-N1载体上的巨细胞病毒(CMV)启动子,构建重组表达载体pSurP-EGFP,通过报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达确定Survivin启动子的特异性;将酿酒酵母的胞嘧啶脱氨酶(CD)基因克隆在pSurP-EGFP中,构建成重组载体pSurP-CD,转染肿瘤细胞后利用毛细管电泳仪检测前药5-氟胞嘧啶(5-FC)的转化效率,同时分析肿瘤细胞的凋亡.结果 GFP的表达表明Survivin启动子具有较好的肿瘤靶向性;毛细管电泳检测表明CD能够有效地将5-FC转化为5-FU,显微镜观察和流式分析表明了Survivin启动子介导的CD的抗肿瘤效果.结论 Survivin启动子能有效地介导CD自杀基因的表达,具有较好的靶向性抗肿瘤效果.     

1例甲状腺危象流浪病人的护理

甲状腺危象是甲状腺毒症急性加重的一个综合征,属甲状腺功能亢进恶化的严重表现[1].其发病原因可能与交感神经兴奋,垂体-肾上腺皮质轴应激反应减弱,短时间内大量三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)释放入血有关.     

神经生长因子撤退诱导神经元样PC12细胞凋亡及HRK/MCL-1基因表达变化

目的:探讨神经生长因子(NGF)撤退对已分化神经元样PC12细胞的影响.方法:建立NGF诱导PC12细胞交感神经元样分化模型,观察NGF撤退后,神经元样PC12细胞形态学及超微结构的变化情况,检测凋亡相关基因HRK/MCL-1的表达变化情况.结果:神经元样PC12细胞在NGF撤退后,可观察到显著的细胞凋亡样特征性改变,并随着NGF撒退时间的延长,凋亡率不断增加,同时随着NGF撤退时间的延长,促凋亡基因HRK的表达不断增高.而抑凋亡基因MCL-1在撤退24 h内表达水平下降明显,撤退24 h后变化不显著.结论:NGF撒退确实能诱导已分化的神经元样PC12细胞出现典型的神经元细胞凋亡现象,该现象与凋亡相关基因HRK/MCL-1的表达变化有密切关系.     

人类TCRαβ家族V基因的进化研究

目的：了解人类TCRα家族V基因（TCRAV）和TCRβ家族V基因（TCRBV）的进化特征。方法：采用MEGA3．1软件对人类TCRAV和TCRBV基因分别构建进化树，并估算基因复制的发生时间；采用FEL法检测TCRAV和TCRBV编码序列正选择和负选择位点。结果：进化树显示TCRAV和TCRBV的基因分组在进化过程中已经维持了相当长的时间。TCRAV已经不受正选择作用，TCRBV基因序列的CDR8区域检测到两个正选择位点。结论：人类TCRαβ家族V基因的进化特征为研究TCR基因在机体免疫及疾病防治提供了理论分析基础。     

Hela细胞Survivin克隆及HLA-A2限制性CTL表位预测研究

目的：从Hela细胞中克隆凋亡抑制因子Survivin的编码序列,进行测序,并由此预测其HLA-A＊0201限制性CTL表位。方法：设计人Survivin基因序列特异引物,通过RT-PCR扩增Survivin编码序列,构建至pGEM-T载体后,测序分析,并对其进行了HLA-A＊0201限制性CTL表位抗原表位相关预测。结果：从Hela细胞中克隆得到的Survivin和Survivin-ΔEx3两种剪接体,其中Survivin-ΔEx3发生1个同义突变和三个错义突变,预测其抗原表位抗原性发生了变化。结论：寻找抗原性强、结合力高的表位,对于今后抗肿瘤多肽疫苗的研究具有重要的意义。     

甘草水提物中miRNA对人免疫细胞基因表达的影响

微小RNA(micro RNA,miRNA)是一类在转录后水平调节基因表达的非编码小分子RNA,其调控基因表达、影响细胞活性的功能已为人们所重视。近年来miRNA的跨界调控成为新的研究方向,为人们更全面地认识和了解miRNA的功能提供了新的视角。植物miRNA由于通常经过了甲基化修饰,因此较为稳定,不易降解。前期研究表明,甘草干燥药材的水煎剂中存在着丰富的小分子RNA,这为了解甘草的作用机制提供了新的思路。在本研究中,利用从甘草水煎剂中提取的小分子RNA以及合成的miRNA模拟物(mimic)作用于分离自健康人的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),然后利用RT-PCR对其模式识别受体(PRR)基因以及部分转录因子、信号分子和细胞因子的基因表达变化进行了分析。结果表明甘草miRNA对人免疫细胞的基因表达具有明显的调节作用,能够显著抑制T细胞分化相关基因的表达,以及炎症和凋亡相关基因的表达。这为进一步更全面地了解甘草的作用机制以及中药新药的研制带来了新的思路。     

HLA-A2限制性Survivin点突变肽诱导特异性抗肝癌CTL反应

目的 探讨HLA-A2限制性Survivin点突变抗原肽体外诱导CTLs的抗肝癌作用.方法 生物信息学软件BIMAS和SYFPEITHI用来鉴定点突变的HLA-A2限制性Survivin抗原九肽;流式细胞术检测突变肽与HLA-A2分子结合效率;肽体外刺激肝癌患者腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)诱导反应性CTLs,用流式细胞术及ELISA检测反应性CTLs释放IFN-γ情况;肽诱导的CTLs与肝癌细胞系HepG2及BEL-7402共孵育,CytoTox 96(R)非放射性细胞毒性检测法检测对肿瘤细胞的裂解情况,倒置相差显微镜观察肝癌细胞形态学变化.结果 生物信息学分析筛选出与MHC分子结合效率评分显著提高的点突变Survivin抗原九肽Sur79M2 (KMSSGCAFL),流式细胞术检测证实负载Sur79M2的T2细胞,HLA-A2表达率显著提高,经Sur79M2体外刺激诱导的CTLs与靶细胞共孵育后能释放较高水平的IFN-γ,Sur79M2诱导的CTLs能通过HLA-A2限制性机制有效杀伤肝癌细胞系HepG2,对HLA-A2阴性的BEL-7402细胞无明显杀伤作用.结论 点突变肽Sur79M2能在体外诱导反应性CTLs产生,该CTLs能以HLA-A2限制性方式有效杀伤肝癌细胞系.     

P53和P21在PC12细胞分化中的作用

目的探讨P53及其下游P21蛋白在PC12细胞分化中的可能作用机制。方法用反转录病毒质粒pBabe-P53/m175转染未分化PC12细胞,经筛选后建立野生型P53蛋白功能丧失的细胞系PC12(P53/m175);利用倒置相差显微镜、流式细胞术及Western blot等方法,比较两种细胞在神经生长因子(NGF)作用后,细胞分化表型、细胞周期及相关蛋白表达的改变。结果NGF作用于正常PC12细胞组,P53/P21蛋白表达持续升高,细胞G1期阻滞出现的时间与蛋白表达开始增加的时间相一致;而在NGF作用的PC12(P53/m175)细胞组,细胞不能表达P21蛋白,且细胞周期G1期阻滞的程度也出现显著下降。NGF作用下,两组细胞都能观察到神经突起的生长,表现出明显的分化表型。结论PC12细胞经NGF作用后出现P53及P21蛋白持续表达增加,主要介导了细胞分化过程中细胞周期G1期阻滞这一特征的出现,但并不是导致神经突起进行性生长这一特征的必需条件。