人线粒体亮氨酰tRNA合成酶的表达、纯化及其动力学研究

目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数.方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融合蛋白,再经Ni2+亲和层析柱一步法纯化后用酶促反应检测其氨酰化活力.作为mtLeuRS酶促反应底物,人tRNALeu(UUR)由T7 RNA聚合酶体外转录生成.结果:经IPTG诱导,人mtLeuRS蛋白表达量约占细菌总蛋白量的1％～2％,1 L培养液的菌体内可收获约2 mg的纯化酶蛋白.通过体外转录生成的酶底物tRNALeu(UUR)可达转录模板的100倍.经酶促反应,人mtLeuRS可氨酰化人线粒体内tRNALeu(UUR).反应的亲和常数(Km)为16.67 μmol/L,催化常数(Kcat)为0.17 s-1.结论:本实验成功克隆并表达了人mtLeuRS,并成功用于催化tRNALeu(UUR)的氨酰化.     

虾壳虾青素制剂的抗氧化作用

目的：为了有效综合利用虾壳废弃物，研究虾青素制剂的抗氧化作用。方法：用石油醚－丙酮－水萃取法提取虾青素，通过抑制小鼠肝匀浆产生脂质过氧化物的方法，测定虾青素制剂的抗氧化作用。结果：表明虾青素的抗氧化能力比a生育酚强得多（10(-9)mol／Lvs10(-6)mol／L）。结论：虾青素具有强大的抗氧化性能，在开发有关抗氧化作用的保健食品、药品、化妆品和食品保鲜等方面有广阔应用前景。     

HSV-TK/GCV系统在难治性卵巢癌裸鼠移植瘤模型中的实验研究

目的:建立人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠模型,用HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗模型动物,观察疗效及协同因素。方法:常规培养携带HSV-TK基因的重组逆转录病毒包装细胞PA317,测定病毒滴度。在移植瘤内多点注射包装细胞,观察GCV、ATRA、TPT对移植肿瘤独立及协同治疗后的肿瘤体积变化。治疗结束后分析移植肿瘤组织病理,PCR检测TK基因在NIH3T3细胞及移植肿瘤组织的转导。结果:人卵巢癌标本裸鼠原代移植成功率16.7%,鼠间传代移植成功率89.7%;重组逆转录病毒滴度为6×104cfu/ml;HSV-TK/GCV系统或TPT治疗后肿瘤生长受到抑制(P<0.05),两者联合治疗后,抑制更明显(P<0.05);ATRA灌胃未显示独立或协同治疗作用(P>0.05);HSV-TK/GCV组、TPT组及两者联合组有明显的治疗反应;PCR检测证实,TK基因在NIH3T3细胞及肿瘤组织中的转导。结论:HSV-TK/GCV系统及TPT对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠有单独及协同治疗作用,全反式维甲酸灌胃对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠疗效不明显。     

重组人Endostatin/MBP 融合蛋白的体内外抗肿瘤作用研究 *

血管生成是实体肿瘤生长和转移的必要条件,新生血管为异常增殖的肿瘤细胞提供充足的营养。为了刺激血管生成,肿瘤分泌一系列促血管生长因子,如成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ和ｂＦＧＦ）等,新近研究发现,许多恶性肿瘤还可产生血管生成抑制因子,如血小板因子４（ＰＦ４）、凝血栓蛋白、Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ［１］和Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ［２］等。越来越多的实验表明,血管生成是受血管刺激因子和抑制因子的网络来调节的,肿瘤生长是在血管生长因子和抑制因子失衡情况下血管大量再生而引起的。我国徐根兴等也在研究内皮细胞过程中发…     

一种改进的提取人外周血和组织线粒体DNA的方法

目的：建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体DNA的方法。方法：以差速离心法分离线粒体,用碱性SDS法裂解线粒体膜,释放线粒体DNA后用酚／氯仿抽提,TE或ddH2O溶解。然后将所得线粒体DNA进行纯度鉴定并和其他现有方法制备的线粒体DNA用PCR进行长片段扩增,比较扩增效果。结果：用改进的方法制备的线粒体DNA中没有检测到核DNA,并能有效扩增8kb长的目的片段。结论：改进后的方法简便、快捷,制备的线粒体DNA纯度高,也有利于长片段PCR扩增。     

大鼠肝再生时线粒体通透性转换的变化

目的:研究大鼠肝再生过程中肝细胞线粒体膜通透性转换(PT)的变化规律.方法:SD大鼠肝70%部分切除(PH)制作肝再生模型,断头取肝分离线粒体后,通过检测静息态和不同浓度钙离子诱导下线粒体悬液在540 nm处光密度值(D540)变化来观察线粒体PT的时相变化.结果:与对照组比较,大鼠肝再生早期(PH后0～24 h)和后期(PH后120～168 h)都表现为肝线粒体先收缩后肿胀,也即通透性先下降后增高;同时大鼠肝再生早期肝线粒体可明显抵抗钙离子的诱导作用,而PH后24 h和168 h组的大鼠肝线粒体对钙离子的诱导非常敏感.环孢素A(CsA)可阻断钙的诱导作用.结论:大鼠肝再生过程中线粒体PT出现明显规律性改变,这可能与肝再生过程中线粒体氧化磷酸化的变化以及肝再生的启动和终止有关.     

Detection of mitochondrial DNA deletion by a modified PCR method

Objective: To develop a simple and efficient method for detecting small populations of mitochondrial DNA deletion. Methods: Peripheral blood cell DNA was obtained from a victim who was aecidently exposed to a ^60Co radiation source 11 years ago. Using the DNA as template, PCR was performed to generate multiple products including true deletions and artifacts. The full length product was recovered and used as template of secondary PCR. The suspicious deletion product of mtDNA could be confirmed if it was only yielded by first PCR. Using either original primers or their nested primem, the suspicious deletion product was amplified and authenticated as true deletion product. The template was recovered and determined to be a deletion by sequencing directly. Results: A new mtDNA deletion, spanning 889 bp from nt11688 to nt12576, was detected in the peripheral blood cells of the victim. Conclusion: The new PCR-based method is more efficient in detecting small populations of mtDNA deletion than other routine methods. MtDNA deletion is found in the victim, suggesting there is relationship between the deletion and phenotypes of the disease.     

线粒体:新的细胞内药物作用靶点

线粒体除了作为细胞内能量生成的关键细胞器 ,还与细胞凋亡、自由基生成、脂质代谢等重要生化过程密切相关。近年来随着对线粒体结构和功能的深入研究 ,发现线粒体是多类药物的细胞内作用靶点 ,与相关药物之间存在广泛而复杂的相互作用。研究线粒体与相关药物之间的相互作用对于明确药物作用机制、研发新药和避免药物毒副作用等方面具有重要意义。该文就线粒体的靶点特性及与药物之间的相互作用作一简要介绍     

An improved method of mitochondrial DNA isolation for XL-PCR

Objective： To obtain high quality of mitochondrial DNA （mtDNA） and carry out extra-long PCR （XL-PCR）. Methods： Mitochondria were isolated by differential centrifugation, and membranes were disrupted using 10%SDS （pH 7.0）. mtDNA was then extracted using phenol and chloroform. Resuits： The mtDNA obtained by using our improved method can be used as effective template for XL-PCR, and total mtDNA （16 kb） can be amplified easily. Conclusion： Our improved method is effective in preparing high quality of mtDNA, which can be used as template for XL-PCR.     

虾壳虾青素制剂的抗氧化作用

目的：为了有效综合利用虾壳废废物，研究虾青素制剂的抗氧化作用。方法：用石油醚－丙酮－水萃取法提取虾青素，通过抑制小鼠肝匀浆产生脂质过氧化物的方法，测定虾青素制剂的抗氧化作用。结果：表明虾青素的抗氧化能力比α生育酚强得多（１０＾－９ｍｏｌ／Ｌｖｓ１０６－６ｍｏｌ／Ｌ）。结论：虾青素具有强大的抗氧化性能，在开发有关抗氧化作用的保健食品、药品、化妆品和食吕保鲜等方面有广阔应用前景。