CRISPR/Cas9构建TGFBI稳定敲除HSC-3细胞系

目的利用CRISPR/Cas9技术稳定敲除人口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）细胞系HSC-3中的TGFBI基因。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计能特异性针对于TGFBI外显子3上下游的小向导RNA（small guide RNA, sgRNA）,并以PX330质粒为骨架构建能表达此sgRNA的真核重组质粒。将此质粒以及PGK-puro质粒共转染HSC-3细胞,用嘌呤霉素抗性筛选细胞克隆,并用PCR、核酸电泳和测序初步确定基因敲除情况,再通过实时荧光定量PCR及免疫印迹法确认细胞中TGFBI的mRNA和蛋白水平的表达变化情况。结果通过CRISPR/Cas9技术,HSC-3中的TGFBI基因外显子3的核苷酸序列已被完全敲除。免疫印迹法检测显示,相对于HSC-3,TGFBI敲除细胞中无法检测到TGFBI蛋白的表达。同时,通过RT-qPCR对部分基因进行检测,发现一系列与细胞周期和上皮间充质转化相关基因表达发生了改变（P＜0.05）。结论通过CRISPR/Cas9技术成功获得了TGFBI基因敲除的HSC-3细胞系,为进一步研究TGFBI在OSCC中的作用及其机制提供了理论基础。     

上海地区汉族健康成年人唾液微生物菌群结构分析

目的 研究健康成年人唾液微生物群落结构。方法 采集37名健康的上海地区常驻汉族居民的非刺激唾液,利用Illumina Hisep测序平台对微生物16 S rDNA的V3~V4高度可变区扩增产物进行测序,分析唾液微生物的群落结构。结果 共获得1329271条优质序列,平均每个样本为（35926.24±4718.069）条,这些序列可归为110个属,12个门。其中有5个优势菌门（97.54%）,以及12个核心菌属(79.71%)。男性与女性两组之间的生物多样性指数及主成分分析等差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 对上海地区汉族健康成年人口腔唾液微生物群落结构的分析,为进一步研究人类口腔唾液微生物群落结构提供了基础资料,且为口腔疾病的防治及诊断提供了参考。