白血病抑制因子受体α亚基胞内区远膜端对HL-60细胞增殖分化的影响

目的　探讨白血病抑制因子 (LIF)受体α亚基胞内区远膜端对HL 60细胞增殖分化的影响。方法　构建LIF受体α亚基胞内区远膜端 (gp190CT3 )真核表达载体 ,利用脂质体转染HL 60细胞 ,G418筛选阳性细胞株 ,免疫组化检测其表达。倒置显微镜观察野生型HL 60细胞及转染有gp190CT3的HL 60细胞的生长状态。以Westernblot及流式细胞仪分别检测野生型HL 60细胞及转染有gp190CT3的HL 60细胞中细胞增殖核抗原 (PCNA)及CD15水平。 结果　转染有gp190CT3的HL 60细胞体积增大 ,与野生型HL 60细胞相比 ,转染有gp190CT3的HL 60细胞增殖速度减慢 ,PC NA的表达水平明显降低 ,而CD15水平明显升高 (转染有gp190CT3的HL 60细胞中CD15阳性细胞百分率为 89.98% ,野生型HL 60对照组中CD15阳性细胞百分率为 40 .79% )。结论　LIF受体α亚基胞内区远膜端参与LIF受体的信号转导 ,其效应是抑制细胞的增殖 ,促进细胞分化。     

胸苷嘧啶激酶/丙氧鸟苷治疗脑胶质瘤时fas mRNA的检测

利用胸苷嘧啶激酶/丙氧鸟苷(ＴＫ/ＧＣＶ)治疗胶质瘤是目前研究的热点之一,其中有一个较为重要的旁观者效应,但机制未明。有报道认为可能是ＴＫ阳性的胶质瘤细胞在死亡过程中有凋亡信号传给ＴＫ阴性的肿瘤细胞[1]。ｆａｓ是现在研究较为明了的抗原,位于细胞膜上,参与诱发凋亡。为了研究ｆａｓ在ＴＫ/ＧＣＶ系统治疗肿瘤中的作用,及加药培养后不同时间脑胶质瘤ｆａｓｍＲＮＡ表达的相对变化,我们检测了治疗脑胶质瘤时ｆａｓ在ＴＫ阳性肿瘤细胞中的表达,现报道如下。一、材料和方法1.材料:Ｃ6胶质瘤细胞株购于上海细胞生物所。ＴＫ基因为本室…     

白血病抑制因子受体不同亚基细胞内区与HL—60细胞内STAT3激活的关系

目的　观察白血病抑制因子（LIF）受体gp190亚基和gp130亚基胞内区在人白血病细胞系HL-60中与STAT3表达及激活的关系,了解白血病抑制因子（LIF）引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。方法　用基因重组技术将gp130和gp190的细胞内区互换以构成两个嵌合体受体基因（130/190,190/130）并分别在HL-60细胞表达。用免疫组化和免疫印迹杂交方法分析形成受体亚基细胞内区同源性二聚体后的磷酸化STAT3的水平和STAT3的表达水平。结果　转染pED130/190,LIF诱导10min后,HL-60细胞内的STAT3磷酸化增加（P＜0.01）,经LIF诱导的转染pED130/190的HL-60细胞的STAT3磷酸化水平存在时间依赖性,转染pED190/130的HL-60细胞,LIF诱导6h后,STAT3的表达降低。结论　白血病抑制因子受体gp190亚基细胞内区在LIF诱导下参与HL-60细胞中STAT3的激活。     

hVEGF121基因转染对人脐静脉内皮细胞生长的作用

目的:构建人血管内皮生长因子(hVEGF)-121的真核细胞复制表达质粒,将hVEGF121基因转染进人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),通过旁分泌作用来加快其生长速度.方法:采用RT-PCR方法,从人胚胎成纤维细胞中克隆hVEGF121前体蛋白全长cDNA,构建重组真核表达质粒pcDNA3-hVEGF121,用FuGENE 6介导转染入HUVEC.收集转染的HUVEC培养上清,用ELISA法定量检测hVEGF蛋白的表达情况;绘制细胞生长曲线,检测hVEGF121促进HUVEC增殖的生物学活性.设转染pcDNA3空质粒载体和不转染任何DNA的HUVEC做对照.结果:(1)成功构建了pcDNA3-hVEGF121真核表达质粒,经测序证明基因序列与GenBank中核酸序列一致,且插入方向正确;(2)转染细胞瞬时表达hVEGF蛋白,于转染1d后每104个细胞每天可分泌hVEGF蛋白59.95 Pg,约为对照组的100倍;之后表达水平先快后慢下降,于转染7d后仍较对照组高近1倍;(3)转染细胞生长速度明显加快,在转染3 d后细胞数与对照组相比即有显著性差异(P＜0.01),细胞倍增时间从对照组的7d以上缩短为3d左右.结论:成功构建了pcDNA3-hVEGF121真核表达质粒;该质粒能在HUVEC中表达有生物活性的hVEGF121蛋白,通过旁分泌作用明显促进HUVEC的分裂增殖.     

睫状神经营养因子对应激引起海马CA3神经元损害的作用

目的;探讨睫状神经营养因子对应激引起海马ＣＡ３区神经元损害的作用。方法：采用Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ－Ｇｒｏｓ－Ｌａｗｒｅｎｔｊｅｗ染色法和常规透射电镜技术,观察急性和慢性足底电击大鼠的海马ＣＡ３区神经元开矿的变化,及双侧海马注射睫状神经营养因子对其影响。结果;急性应激大鼠海马神经元形态无明显变化;慢性应激大鼠海马神经元出现明显的损伤性形态变化;睫状神经营养因子对正常大鼠和急性应激大鼠的海马神经元     

不同发育阶段人胚胎原始生殖细胞的定位及体外培养

目的:对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞(PGC)进行定位并比较其体外培养的差异.方法:取4～7周发育阶段的人胚胎,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶(AP)以对其定位.体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养,第1次传代后,用AP标记,计数不同发育阶段AP阳性的PGC和体外培养的阳性克隆并进行比较.结果:在卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处有AP强阳性细胞,阳性信号位于胞质内.阳性细胞散在分布,在生殖嵴处聚集成团.不同发育阶段的胚胎组织培养均有阳性克隆出现.统计学分析结果表明,4～7周人胚胎内AP阳性的PGC数目及细胞内信号强度无明显差异(P>0.05);由胚胎组织培养获得的AP阳性克隆数也无显著差异.结论:人PGC位于卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处.4～7周发育阶段,胚胎内PGC数目和体外培养的克隆数无明显变化.     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动及粘附中的作用

目的 :检测蛋白酪氨酸磷酸酶SHP - 2在IL - 1所促发的细胞移动中的作用。方法 :首先构建重组质粒SHP - 2 -GFP以及SHP - 2C >S -GFP ,并分别转入MCF - 7乳腺癌细胞中 ,建立两种细胞株 ,即 :SHP - 2 -GFP -MCF - 7和SHP - 2C >S -MCF -7。利用细胞移动实验、细胞粘附实验、免疫沉淀、蛋白印迹等生物学实验方法 ,从形态学、蛋白表达量、磷酸化水平等方面分析细胞形态变化、E -钙粘蛋白和基质金属蛋白酶MMP - 1、9在 3种细胞株中的表达情况和细胞因子IL - 1刺激后 3种细胞株中的表达情况 ,进而分析SHP - 2蛋白酪氨酸磷酸酶…     

白血病抑制因子受体中gp130细胞内区诱导白血病细胞Meg-01内c-myc的表达

观察人白血病细胞系Ｍｅｇ－０１白血病抑制因子（ＬＩＦ）受体α亚基（ｇｐ１９０）和另一亚基ｇｐ１３０细胞内区与ｃ－ｍｙｃ的关系,以探明白血病细胞过度增殖和晚期分化异常的机制。方法：用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体受体（１９０／１３０,１３０１９０）,并分别在Ｍｅｇ－０１表达,其与     

发育相关转录因子GATA4在小鼠肝癌细胞中的表达及其意义

l病例资料患者男性,37岁,江苏如东人,因"左侧胸痛伴反复咯血1年半"于2004-03-31入院.病史及诊治经过如下:患者2002年10月出现痰中带血,后转为咯血,血色鲜红,每次约1～2 ml,1 d约10次,伴左侧胸痛、发热,体温38℃左右,稍感畏寒,无寒战及盗汗,无胸闷、气急.     

人胚胎间充质干细胞向平滑肌细胞定向分化标志蛋白的选择

目的:选择平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)特异性标志蛋白,作为判断人胚胎间充质干细胞(mesenchymalstem cell,MSC)是否向SMC方向分化的指标.方法:采用免疫细胞化学、免疫荧光、Western印迹和RT-PCR等方法,检测SMC分化早、中、晚期标志蛋白smooth muscle(SM)-α-actin、calponin、SM-myosin heavy chain(SM-MHC)在人胚MSC中的表达情况.结果:各实验均证明SM-α-actin和calpomn蛋白在人胚MSC中表达.各种实验方法在人胚MSC中均检测不到SM-MHC蛋白及其mRNA的表达.结论:SM-MHC是一个有价值的SMC特异性标志物,可以做为判断人胚MSC向SMC方向分化与否的指标.