深低温停循环时不同脑保护方法对海马区神经元凋亡的影响

目的 通过观察海马区神经元的损伤情况，探讨深低温停循环(DHCA)时中枢神经系统损伤的机制及其保护方法。方法 北京农业大学实验用小型猪16头，体重22～25kg。鼻咽温降至18℃时分别给予如下处理90min：DHCA(I组)，顺行脑灌注(ACP，Ⅱ组)，逆行脑灌注(RCP，Ⅲ组)，RCP 尼莫地平(Ⅳ组)。复温120min至鼻咽温36℃。取左侧海马头部制备细胞悬液，AnnexinV—FITC染色，应用流式细胞仪分析细胞凋亡情况。电镜观察细胞超微结构的变化。结果 正常细胞百分比I组明显低于其他3组，Ⅱ组明显高于Ⅲ组，Ⅱ组、Ⅲ组与IV组之间差异无显著性；早期凋亡细胞百分比I组明显高于其他3组，Ⅱ组明显低于Ⅲ组，Ⅱ组、Ⅲ组与Ⅳ组之间差异无显著性；坏死细胞百分比I组明显高于其他3组，而其他3组之间差异无显著性；死亡细胞百分比I组明显高于其他3组，而其他3组之间差异无显著性(显著性界值P=0．05)。结论 DHCA后神经元发生凋亡、坏死和死亡，是术后神经功能障碍的主要原因；ACP使细胞凋亡和死亡减少，神经元保护作用最佳；RCP亦能使细胞凋亡和死亡减少，但神经元保护作用次于ACP；尼莫地平部分抑制了Ca^2 内流，脑保护效果一般。     

孕三烯酮和米非司酮对子宫内膜异位症患者异位内膜及腹腔液巨噬细胞凋亡的影响

目的：对培养的异位子宫内膜及腹腔液巨噬细胞分组加入孕三烯酮及米非司酮药物,观察其细胞生长情况及形态学变化,同时进行细胞凋亡率检测等研究,探讨子宫内膜异位症的临床治疗。方法：对12例患子宫内膜异位症妇女异位子宫内膜的离体组织及腹腔液进行细胞培养,在相同的生长期,分别加入一定剂量的孕三烯酮或米非司酮后,观察细胞的生长状况并用流式细胞仪检测其凋亡率。结果：加入药物后,细胞的生长速度减慢,其凋亡率较未用药组明显增加,差异有显著性（P＜0．05）,而两种药物在同一种细胞,相同作用时间的凋亡率无统计学意义。结论：孕三烯酮及米非司酮对异位子宫内膜细胞及腹腔液巨噬细胞有抑制作用,并且可以诱导异位子宫内膜细胞及腹腔液巨噬细胞的凋亡。     

流式细胞仪进行干细胞绝对计数的方法

干细胞移植对于白血病等多种疾病的治疗具有重要意义，而准确的干细胞绝对计数对于干细胞移植的成败又十分重要。流式细胞仪结合荧光单抗技术为干细胞绝对计数提供了一种快速、定量、重复性好的方法。本文介绍利用流式细胞仪进行干细胞绝对计数的原理、方法及意义。 　　1　流式细胞仪简介 　　流式细胞仪是对悬浮状态的细胞逐个计数并记录其有关参数的细胞分析仪器，因其测量速度快，在很短时间内可以分析大量细胞，并能测出多个参数，在临床上有广泛的应用。流式细胞仪能测量细胞的五个参数：前向角散射光(FSC)、侧向角散射光(SSC)、绿色荧光(FL-1)、黄色荧光(FL-2)和红色荧光(FL-3)。FSC和SSC是细胞对激发光的散射信号，分别反映了细胞的大小和细胞的粒度：细胞越大，胞内颗粒越多，则FSC和SSC越强。例如在外周血中，根据细胞大小及胞内所含颗粒性物质的多少，可区分出淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。粒细胞有较大的核或较多的颗粒，细胞直径也比淋巴细胞大，因而其FSC和SSC均比淋巴细胞强。     

早期细胞凋亡的流式细胞术分析

目的：探讨多参数流式细胞术分析肿瘤细胞早期凋亡的方法。方法：采用Annexin V FITC／PI双染法及JC-1染色法标记食管癌EC6细胞，通过多参数流式细胞术分析X射线、顺铂诱导产生的细胞凋亡情况及线粒体膜电位的变化。结果：随着剂量的增加，凋亡细胞的百分率逐渐增加，线粒体膜电位下降，去极化细胞增多，并且有明显的剂量依赖性。结论：多参数流式细胞术具有广阔的应用前景，短时间内能够获得大量统计学意义上可靠的数据，为探讨细胞凋亡机制、寻找治疗靶点提供了有益线索。     

一种新的检测细胞凋亡的多参数流式细胞分析方法

建立了一种新的检测细胞凋亡的多参数流式细胞分析方法.HL60白血病细胞株经化疗药物足叶乙甙处理后,加AnnexinV (AV)-FITC/PI孵育双染,用多参数流式细胞术检测细胞凋亡.结果显示,凋亡细胞的百分比随诱导时间的延长而逐渐增多.表明AV-FITC/PT双染法既能对细胞膜表面特异蛋白染色,又同时检测细胞膜完整性.多参数流式细胞术是一种快速、简便又准确的检测细胞凋亡的方法.     

中国人视黄醇结合蛋白cDNA的克隆与序列分析

目的：　为了进行中国人视黄醇结合蛋白（ｈｕｍ ａｎ ｒｅｔｉｎｏｌ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏ－ｔｅｉｎ, ｈＲＢＰ）的原核表达,克隆出ｈＲＢＰ的ｃＤＮＡ。　方法：　利用反转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法获得ｈＲＢＰ的ｃＤＮＡ,克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体后,在美国ＡＢＩＤＮＡ 自动测序仪上以双脱氧法进行核苷酸序列测定。结果：　扩增出了约０．５８ｋｂ的特异片段,并筛选出阳性重组克隆质粒ｐＧＥＭ－ＲＢＰ,核苷酸序列测定表明其含有一段５８０ 个碱基的插入片段,与文献报道的一致。结论：　我们已获得了中国人ＲＢＰ的ｃＤＮＡ,可用于进行原核表达。