靶向GST-π、po1β基因的siRNA重组慢病毒对人食管鳞癌顺铂耐药逆转的体内实验研究

目的探讨靶向GST-π、polβ的siRNA重组慢病毒在裸鼠体内对人食管鳞癌顺铂耐药株耐药的逆转作用。方法采用皮下注射细胞法建立裸鼠人食管癌细胞细胞EC9706及其耐药细胞EC9706/cDDP移植瘤模型,观察其成瘤性和体内耐药性。利用靶向GST-π、polβ的siRNA重组慢病毒感染具有 MDR表型的裸鼠移植瘤,以期达到封闭GST-π、polβ的转录和表达,检测移植瘤细胞对药物的敏感性变化。结果 cDDP 联合靶向GST-π的siRNA慢病毒GSTsi2处理组中观察到移植瘤体积与cDDP组及PBS对照组比较,体积显著减小,表明经cDDP联合GSTsi2处理后,可明显恢复移植瘤细胞对 cDDP的敏感性。而在cDDP联合靶向polβ的siRNA慢病毒polsi1处理组中移植瘤体积与cDDP及PBS对照组比较无显著差异,移植瘤细胞对cDDP的敏感性无明显改变。结论靶向GST-π的重组慢病毒可有效逆转食管癌细胞的耐药性,靶向polβ的重组慢病毒逆转肿瘤细胞耐药的效果不明显。     

RNAi沉默polβ基因部分逆转食管鳞癌细胞顺铂耐药性

目的 通过RNA干扰（RNAi）技术沉默DNA聚合酶polβ的表达,观察其对食管癌细胞顺铂（cDDP）耐药性的影响。方法 构建靶向polβ基因的siRNA重组慢病毒pRNAT-U6.2/Lenti-polβ1、pRNAT-U6.2/Lenti-polβ2及阴性对照载体pRNAT-U6.2/Lenti-polβC,将其感染人食管鳞癌顺铂耐药细胞系EC9706/cDDP,通过RT-PCR、蛋白质印迹分析和免疫荧光实验观察细胞polβ的表达情况,采用MTT法观察不同浓度顺铂对细胞生长的抑制作用并计算50%细胞生长抑制所需的药物浓度（IC₅₀）和耐药指数（RI）。结果 靶向polβ的siRNA重组慢病毒pRNAT-U6.2/Lenti-polβ1和pRNAT-U6.2/Lenti-polβ2感染EC9706/cDDP后均可下调polβ的mRNA和蛋白表达水平,其中前者效果更为显著。顺铂以剂量依赖方式抑制EC9706/cDDP细胞增殖,感染pRNAT-U6.2/Lenti-polβ1、pRNAT-U6.2/Lenti-polβC的EC9706/cDDP细胞及未感染EC9706/cDDP细胞对顺铂的IC₅₀分别为55.71、62.41、63.11 μg/mL,耐药指数分别为13.9、15.5、15.7,其中前者与后二者相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论 polβ的表达与食管鳞癌细胞系EC9706/cDDP顺铂耐药性有关,沉默其表达可部分逆转EC9706/cDDP细胞对顺铂的耐药性。     

GST-π表达水平与人食管鳞癌耐顺铂的关系研究

目的拟通过调控GST-π的表达水平,观察其对食管癌细胞耐药性的影响。方法构建GST-π基因的真核表达载体,转染入亲本细胞EC9706细胞后观察GST-π的过表达是否会促使食管癌细胞耐药性的产生。结果 GST-π的表达载体pIRES2-AcGFP1-GST-π转染入EC9706细胞后,RT-PCR检测GST-πmRNA表达增强,Western blotting见其蛋白表达增强,MTT实验显示该细胞针对顺铂的耐药性增强,耐药指数达2.36。结论该实验说明增加食管癌细胞内GST-π的表达会促使食管癌细胞的耐药性产生。