Ghrelin对糖尿病大鼠心肌梗死后心肌重塑基质金属蛋白酶表达的影响

目的:探讨生长激素促分泌物受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)的内源性配体ghrelin对糖尿病大鼠心肌梗死后心室重塑基质金属蛋白酶(matrix metalloptoteinases,MMPs)表达的影响。方法:选取7~8周龄的SD大鼠随机分为4组:1单纯心肌梗死组;2糖尿病合并心肌梗死组;3糖尿病合并心肌梗死+ghrelin干预组;4糖尿病合并心肌梗死+ghrelin+GHSR1a特异性拮抗剂[D-Lys3]-GHRP-6干预组。建立链脲佐菌素糖尿病大鼠模型,12周后所有大鼠均结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型。Ghrelin干预组大鼠腹腔注射ghrelin[200μg/(kg·d)],ghrelin+[D-Lys3]-GHRP-6干预组大鼠分别腹腔注射ghrelin[200μg/(kg·d)]+[D-Lys3]-GHRP-6[50μg/(kg·d)],其余2组分别腹腔注射等量生理盐水。4周后苦味酸天狼猩红染色检测其心肌纤维化情况,Masson染色检测心肌梗死面积,免疫组织化学和Western blot分别检测左心室心肌组织基质金属蛋白酶2(matrix metalloptoteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloptoteinase-9,MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloprotroteinase-1,TIMP-1)分布与表达变化。结果:与单纯心肌梗死组相比,糖尿病合并心肌梗死组心肌胶原容量分数(P=0.003)、心肌梗死面积明显增加(P=0.001),MMP-2(P=0.000)和MMP-9(P=0.000)明显增高,心肌间质纤维增生。Ghrelin腹腔注射干预后可明显降低糖尿病心肌梗死大鼠胶原容量分数(P=0.001)、心肌梗死面积(P=0.005),MMP-2(P=0.001)和MMP-9(P=0.001)表达减少,心肌间质纤维增生减轻。TIMP-1在合并糖尿病的组别中均明显升高(P=0.000),但3组间无统计学意义(P>0.05)。Ghrelin的上述效应均被[D-Lys3]-GHRP-6阻滞。结论:Ghrelin可通过抑制糖尿病心梗大鼠心肌组织MMP-2和MMP-9的表达,从而抑制糖尿病心梗大鼠心肌间质纤维化、减少心肌梗死面积,抑制心肌细胞外基质重塑。     

超声微泡联合双特异性抗体对骨髓间充质干细胞干预心肌纤维化的实验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在超声辐照微泡(MB)和双特异抗体(BiAb)的辅助下干预心肌纤维化的效果及可能机制.方法 在MB的辅助下,将雄性小鼠MSCs与BiAb输入异丙肾性心肌纤维化雌性小鼠(MSCs+BiAb+MB组).BiAb由能识别间充质干细胞的anti-CD29和能特异性结合损伤心肌的抗肌凝蛋白轻链抗体(AMLCA)制备.另设未治疗组、单纯MSCs组、单纯BiAb组、单纯MB组、MSCs+BiAb组和正常对照组.5周后处死小鼠,实时荧光定量PCR检测心肌Y染色体鉴别基因(SRY)的表达.天狼猩红染色对比心脏胶原纤维含量.免疫组织化学染色法观察心脏热休克蛋白-70(HSP-70)表达.结果 MSCs归巢数最多的是MSCs+BiAb+MB组,其次为MSCs+BiAb组,MSCs组归巢数最少.与未治疗组相比,MSCs+BiAb+MB组、MSCs+BiAb组和单纯MCSs组的心肌胶原纤维含量下降(P＜0.05),HSP-70表达下调(P＜0.05).其中,与单纯MSCs组相比,MSCs+BiAb+MB组的心肌胶原沉积量更低(P＜0.05).单纯MB组、单纯BiAb组与未治疗组的胶原沉积量、HSP-70表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MB可促进骨髓间充质干细胞的归巢,联合BiAb,可进一步增加干细胞的归巢率和修复效果.MSCs归巢后能干预心肌纤维化,其机制可能与HSP-70的介导有关.

Abstract：

Objective To explore the effects of transplantated bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) on myocardial fibrosis with the aid of ultrasound-mediated microbubbles (MB) and bispecific antibody(BiAb) combination.Methods With the aid of MB,isolated MSCs from male mice and the BiAb were transfused into female mice with isoproterenol-induced myocardial fibrosis via tail vein (MSCs + BiAb + MB group).BiAb was producted with anti-CD29 which can recognize MSCs and anti-myosin light chain antibody (AMLCA) which can specifically bind to injured myocardium.There were six groups investigated:MSC + BiAb + MB,MSC,BiAb,MB,MSC + BiAb,untreated,and control groups.Five weeks after treatment administration,the expressions of sex-determining region of Y-chromosome (SRY) in myocardium were detected by fluorescent quantitative PCR.The distribution of collagen was observed by sirius red staining.Heat shock protein-70 (HSP-70) in myocardium was detected by immunohistochemistry.Results The highest homing number of MSCs was in the MSCs + BiAb + MB group,MSCs + BiAb group ranked the second,and lowest in MSCs group.Compared to the untreated group,the MSCs + BiAb + MB,MSCs + BiAb and MSCs groups had less collagen deposition (P ＜0.05),and decreased level of HSP-70.Compared to those of the MSCs group,the collagen deposition were decreased in MSCs + BiAb + MB group (P ＜0.05).Conclusions MB and BiAb can promote the homing number of MSCs in mice.MB can further the homing rate and the repairing efficacy of MSCs.The homing MSCs can prevent the process of myocardial fibrosis.And HSP-70 was involved in the internal mechanism.     

冠状动脉造影和血管成形术诊治老年冠心病:经桡动脉与经股动脉途径对比

目的比较经桡动脉和经股动脉途径在冠状动脉造影和血管成形术中的优缺点,评价经桡动脉途径介入治疗老年冠心病的有效性与安全性。方法 60岁及以上冠心病或可疑冠心病患者1637例,按穿刺途径随机分为桡动脉组（n=909）和股动脉组（n=728）,比较两组间动脉穿刺成功时间、穿刺成功率、造影时间、X线曝光时间、经皮冠状动脉介入治疗（PCI）成功率、穿刺相关血管并发症、迷走反射发生率、平均住院时间及随访术后3个月主要心脏不良事件（MACE）发生情况。结果桡动脉组桡动脉穿刺成功897例（897/909,98.68%）,股动脉组股动脉穿刺成功722例（722/728,99.18%）。桡动脉组穿刺时间较股动脉组长（P〈0.05）。两组的穿刺成功率、PCI成功率,术后MACE等差异均无统计学意义（P〉0.05）。在造影时间、X线曝光时间、穿刺相关血管并发症、迷走反射发生率、平均住院时间等方面,桡动脉组明显低于股动脉组（P〈0.01）。结论经桡动脉途径行冠状动脉造影及PCI治疗老年冠心病安全可行,且易止血,术后无须卧床,并发症少,创伤小,可作为老年冠心病介入治疗的首选途径。     

血清脂蛋白a与冠心病的研究

目的:探讨冠心病患者血清脂蛋白a水平与冠状动脉病变程度的关联.方法:对我科2002年4月～2010年7月连续8年1 260例住院临床诊断或疑诊冠心病患者行冠状动脉造影检查并同时进行血脂检测资料进行回顾性分析,按年龄分为青中年组(31～59岁)217例,老年组(60～74岁)561例和高龄老年组(75～93岁)482例.各年龄组患者根据冠状动脉造影结果分为冠心病组和对照组.分别对不同年龄组的甘油三酯(Triglycendes,TG)、血清总胆固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(High-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、游离脂肪酸(Free fatty acids,FFA)、脂蛋白a[Lipoprotein(a),Lp(a)]、载脂蛋白A1 (Apolipoprotein A1,ApoA1)、载脂蛋白B(Apolipoprotein B ApoB)等指标与冠脉病变程度进行相关分析.结果:老年和高龄老年组中冠心病患者血清Lp(a)、TC、LDL-C水平较对照组增高或显著增高(P＜0.05或P＜0.01),高龄老年组冠心病患者血清HDL-C较对照组降低(P＜0.05);青中年组冠心病患者血清Lp(a)ApoB也较对照组显著增高(P＜0.05或P＜0.01).在中青年、老年及高龄老年冠心病患者组间Lp(a)水平比较无统计学差异.在不同年龄组间,高龄老年冠心病组中冠状动脉狭窄支数较老年冠心病组及中青年冠心病组均有显著增加(P＜0.01);高龄老年冠心病组中Gensini积分较老年冠心病组及中青年冠心病组均有显著升高(P＜0.01).对冠状动脉狭窄支数及狭窄程度进行有序多分类Logistic回归分析显示,Lp(a)、LDL-C和增龄进入回归方程(P＜0.05或P＜0.01).结论:Lp(a)、LDL-C和增龄均是冠心病的独立危险因素,共同促进冠状动脉粥样硬化的发生发展.     

人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转导

背景: 研究证实多数造血生长因子通过JAKs-STATs途径转导信号,调节血细胞的增殖与分化。人参总皂苷能够促进早期的造血干/祖细胞向红系细胞分化,具有类似造血生长因子的功效,在红系血细胞发生中造血细胞膜表面红细胞生成素受体起着关键性的作用。 目的：通过红细胞生成素及其受体介导的JAK2/STAT5 信号转导途径,分析人参总皂苷定向诱导红系血细胞发生的分子机制。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2006-05/2008-10在在重庆医科大学基础医学研究所、组织胚胎学教研室完成。 材料：脐血细胞来源于正常足月妊娠产妇分娩脐带血,由重庆医科大学第一附属医院提供。人参总皂苷由重庆中药研究所惠赠,纯度95%以上,添加MI-1640培养液配成1 g/L的工作液。 方法：①集落形成实验：取5×106 L-1脐血单个核细胞,添加含马血清的RPMI-1640培养液,10,25,50,75,100 mg/L人参总皂苷组分别加入对应终浓度的人参总皂苷,并设立空白对照组。在96孔板上培养,0.2 mL/孔,14 d计数早期红系祖细胞,6 d计数晚期红系祖细胞。②取脐血单个核细胞悬液100 μL(5×108 L-1),进行MTT检测。③分别将0,25,50,100 mg/L人参总皂苷与脐血造血细胞1×109 L-1共培养24 h,进行Western blot检测。④取脐血造血细胞 1×109 L-1,对照组加入含体积分数为10%马血清的RPMI-1640培养液,人参总皂苷组在常规培养体系中加入终浓度25 mg/L人参总皂苷。分别用5 U/mL红细胞生成素诱导0,2,5,30 min后终止反应,进行免疫沉淀检测。 主要观察指标：人参总皂苷刺激红系造血祖细胞增殖的能力,红细胞生成素对脐血细胞增殖的影响,人参总皂苷对造血细胞红细胞生成素受体表达的影响,JAK2、STAT5蛋白酪氨酸磷酸化情况。 结果：10~75 mg/L人参总皂苷均能提高脐血细胞形成早期红系祖细胞、晚期红系祖细胞的集落产率,以25 mg/L提高幅度最为明显。2~50 U/mL红细胞生成素均能促进脐血细胞的增殖,以5 U/mL促进增殖效果最为明显。0~100 mg/L人参总皂苷作用脐血细胞24 h后,红细胞生成素受体的表达无明显变化。人参总皂苷作用造血细胞24 h后,加入红细胞生成素继续刺激0~30 min,JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化程度均明显增强。 结论：人参总皂苷在促进造血细胞增殖的过程中,尽管对造血细胞红细胞生成素受体的表达无明显影响,但可能通过在红细胞生成素受体介导的信号转导过程中增强JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化程度发挥作用。     

肿瘤坏死因子在急性心肌梗死病程中的作用

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是由激活的巨噬细咆分泌的一种具有多种生物学效应的细咆因子。应激状态下．TNF-α可由成熟的心肌细咆本身分泌产生并参与多种心脏疾病的病理生理过程。有研究证明．TNF-α在急性心肌梗死(AMI)的心肌损害中起重要作用。本文对TNF-α在AMI中的作用及其机制的研究进展作一综述。     

紫外分光光度法测定青蒿素的含量

目的:建立测定青蒿中青蒿素含量的紫外分光光度检测方法,为筛选收购优质青蒿提供快速检测的方法.方法:用紫外分光光度计对青蒿素标准溶液进行波长扫描,确定最适吸收波长,在最适吸收波长下建立青蒿素标准品的吸光度-浓度曲线.根据标准曲线测定青蒿样品中青蒿素的含量.结果:青蒿素的最适吸收波长为290.5nm,吸光度-浓度回归方程为:Y=0.043X 0.006,不同青蒿样品中青蒿素含量有差异.结论:紫外分光光度法测定青蒿中青蒿素成分含量操作简便、快捷、准确.     

高密度脂蛋白胆固醇和冠心病的相关性研究

目的:探讨高密度脂蛋白胆固醇水平与冠心病的相关性.方法:选择427例经冠状动脉造影证实的冠心病患者作为病例组,并选择同期住院的冠脉造影结果阴性的306例非冠心病患者作为对照组,测定两组患者的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白LP(a)等指标进行比较分析.结果:冠心病组与对照组比较,HDL-C水平显著降低(P＜0.05);在冠心病组中随着冠状动脉病变支数的增加,HDL-C逐渐下降(P＜0.05).多元Logistic回归分析,低HDL-C水平为冠心病的独立危险因素.结论:HDL-C与冠心病发生发展及冠脉病变程度呈显著负相关.TC/HDL-C可能对冠心病的诊断具有更好的预测价值.     

老年人外周动脉粥样硬化与冠心病

外周动脉粥样硬化(AS)常与冠状动脉(冠脉)病变同时存在,近年研究已证实,颈动脉AS与冠心病(CHD)存在相同的病理生理变化和危险因素[1],二者有密切的关系;颈动脉AS在一定程度上代表了全身AS的进展情况。     

Ghrelin对易损斑块内血管新生和心肌梗死后血管新生的影响及机制研究

目的：　探讨ghrelin对易损斑块内血管新生和心肌梗死后血管新生的影响及机制。方法：　将ApoE^-/-小鼠分为易损斑块组、易损斑块+心梗双模型组和ghrelin干预组。所有ApoE^-/-小鼠均高脂饮食喂养12周诱导动脉粥样硬化易损斑块,构建的动脉粥样硬化易损斑块模型即为易损斑块组。遗传背景相同的C57BL/6J小鼠正常饮食喂养12周,分为正常对照组和单纯心梗组。第8周时,单纯心梗组、易损斑块+心梗双模型组和ghrelin干预组结扎冠状动脉左前降支构建急性心梗模型。急性心梗造模后,ghrelin干预组腹腔注射ghrelin（100 μg/kg,2次/d）,直至第12周实验结束。超声心动图检测各组左室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）和左室短轴缩短率（left ventricular fraction shortening,LVFS）,油红O染色观察主动脉窦粥样斑块面积的百分比,CD31免疫组化染色检测易损斑块内和心梗周边区新生血管生成密度（microvascular density,MVD）,Masson染色检测心肌梗死面积。Real-time PCR和Western blot分别检测各组血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、血管生成素（angiopoietins,Ang）-1/2和络氨酸激酶受体（tyrosine-protein kinase receptor,Tie）-2的表达。结果：　①与单纯心梗组相比,易损斑块+心梗双模型组[（65.518±4.160）%,P=0.000]心梗面积明显增加,LVEF[（58.560±11.900）%,P=0.012]和LVFS[（27.182±7.807）%,P=0.013]降低,心梗周边区MVD（5.800±0.837,P=0.000）减低,VEGF（1.870±0.122,P=0.001）、Ang-1（1.830±0.056,P=0.007）、Ang-2（1.660±0.217,P=0.006）和Tie-2（1.660±0.115,P=0.020）表达降低,ghrelin干预后可明显缩小心梗面积[（39.751±3.039）%,P=0.000],增加易损斑块+心梗双模型组LVEF[（74.679±6.535）%,P=0.013]和LVFS[（37.507±5.210）%,P=0.020）,增加心梗周边区MVD（9.857±1.345,P=0.000）,升高VEGF（3.503±0.384,P=0.004）、Ang-1（3.277±0.186,P=0.017）、Ang-2（3.450±0.187,P=0.000）和Tie-2（3.133±0.139,P=0.009）的表达;②易损斑块组、易损斑块+心梗双模型组和ghrelin干预组主动脉窦粥样斑块面积的百分比、斑块内MVD、斑块内VEGF、Ang-1、Ang-2和Tie-2的基因与表达在3组间无统计学差异,ghrelin对易损斑块合并心梗小鼠斑块内血管新生无影响。结论：　Ghrelin可通过上调VEGF、Ang-1、Ang-2和Tie-2的基因与蛋白表达,促进易损斑块+心梗双模型组小鼠心梗后血管新生,减少心肌梗死面积,稳定和缩小易损斑块。Ghrelin对易损斑块+心梗双模型组小鼠斑块内血管新生无影响。