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1.
目的:制备负载hGM-CSF基因的宫颈癌DC疫苗并研究其抗肿瘤作用。方法:(1)分离制备脐血来源的DC,通过相差显微镜和流式细胞仪鉴定;(2)Lenti-hGM-CSF转导DC细胞,ELISA方法检测DC细胞上清液中hGM-CSF的含量。宫颈癌HeLa细胞冻融抗原刺激DC细胞制备DC疫苗;(3)DC疫苗刺激同种T淋巴细胞诱导特异性CTL并用MTT法检测其增殖能力和对靶细胞的特异性杀伤能力。结果:(1)经Lenti-hGM-CSF转导后DC培养液中hGM-CSF含量明显高于未转染的DC细胞(P0.01);(2)Lenti-hGM-CSF转染的宫颈癌DC疫苗刺激淋巴细胞的增殖指数(SI)达2.16,明显优于未转染的宫颈癌DC疫苗;(3)经Lenti-hGM-CSF修饰的宫颈癌DC疫苗诱导的CTL对宫颈癌HeLa细胞的杀伤活性达51.12%,高于未经修饰的DC诱导的CTL(P0.05)。结论:用Lenti-hGM-CSF修饰制备的宫颈癌DC疫苗,其刺激T细胞增殖的能力增强,诱导的CTL对宫颈癌HeLa细胞具有显著增强的杀伤效应。  相似文献   
2.
编码hGM-CSF基因的慢病毒包装及表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:构建编码人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)慢病毒载体转染小鼠结肠癌细胞CT26,建立持续高表达hGM-CSF基因的CT26细胞株。方法:采用PCR法获得hGM-CSF DNA片段,插入转移载体L166;用CaCl2法将载体L166-hGM CSF、L205和L311共同转染到慢病毒包装细胞293T中,72h后收集上清液。测定慢病毒的滴度;用ELISA法检测慢病毒感染后的CT26细胞上清液中hGM CSF的表达。结果:通过酶切电泳证实重组转移载体L166-hGM-CSF含有预期的hGM-CSF片段。收集慢病毒转染CT26细胞,滴度达4.69×105IU/ml。ELISA法检测慢病毒转染的CT26细胞上清液中有hGM-CSF的表达超过2个月。终浓度15μg/ml的嘌呤霉素成功筛选出单克隆CT26细胞株。结论:收集的慢病毒能够有效的将其所携带的目的基因导入CT26细胞并使其在细胞中高效持续表达2个月以上。  相似文献   
3.
甲状腺肿瘤是最常见的内分泌器官肿瘤,其中以甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinomas,PTC)最为常见,早期手术预后较好,因此及早做出诊断有重要意义。病理检查是PTC确诊的主要手段,但由于近年提出的甲状腺微小乳头状癌及滤泡型乳头状癌等特殊类型的存在,使PTC诊断变得困难,尤其是与结节性甲状腺肿伴滤泡上皮乳头状增生和乔本甲状腺炎等甲状腺滤泡上皮良性增生病变难以鉴别。目前免疫组化仍是诊断PTC的主要方法。本文旨在探讨免疫组化联合检测CK19、HBME-1、Galectin-3、TPO、CD56在PTC诊断中的意义。  相似文献   
4.
林阿丽  芦思佳  单晓琼 《浙江医学》2022,44(20):2213-2215,2226
目的探讨肛周Paget病(PPD)的临床表现、组织形态学及免疫组化特征,为病理诊断和临床治疗提供理论依据。方法收集2014年11月至2021年12月在杭州市第三人民医院经病理诊断为PPD的12例患者资料,回顾分析患者的临床表现、组织形态学及免疫组化特征、治疗及预后。结果12例PPD患者以老年男性为多,皮损常表现为肛周湿疹样红斑伴瘙痒,组织形态学特征为病变表皮内可见数量不等的Paget样细胞浸润性生长。PPD多伴有潜在恶性肿瘤,免疫组化标志物细胞角蛋白(CK)7/CK20/尾型同源盒转录因子2/囊泡病液体蛋白-15可用于鉴别诊断并提示肿瘤来源。所有患者均行手术切除治疗,7例患者伴复发转移,其中4例死亡,除去1例患者失访,其余均健在。结论PPD是一种惰性肿瘤,而继发性PPD患者因伴有潜在的恶性肿瘤而有较高的复发转移率,应用免疫组化寻找出恶性肿瘤来源,有助于临床及时干预,调整治疗策略。  相似文献   
5.
林阿丽  孙青 《浙江医学》2013,(22):1967-1971
目的构建编码人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(humangranulocyte—macrophage colony stimulating factor,hGM—CSF)的慢病毒载体,研究编码hGM—CSF的慢病毒载体对树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗抗肿瘤活性的增强作用。方法以质粒pORFhGM—CSF为模板,采用PCR方法扩增出hGM—CSF基因片段;通过BamHI和XhoI限制性内切酶位点。将hGM—CSF基因定向克隆到慢病毒连接载体L166中构建重组载体L166-hGM—CSF。将重组载体L166-hGM—CSF和包装载体L205以及包膜载体L311共同转染慢病毒包装细胞293T,72h后收集病毒上清液获得编码hGM—CSF的慢病毒颗粒Lenti—hGM—CSF。从脐血中分离出单核细胞,rhGM—CSF、rhIL-4和α—TNF诱导获得DC,通过相差显微镜和流式细胞仪鉴定。应用反复冻融法制备可溶性肿瘤抗原,分别将负载肿瘤抗原的DC疫苗和慢病毒Lenti—hGM—CSF感染的负载肿瘤抗原的DC疫苗与T淋巴细胞共同培养,MTT方法检测并比较两者所诱导的CTL对反应细胞的体外杀伤活性。结果编码hGM—CSF的慢病毒载体L166-hGM—CSF成功构建,获得了编码hGM—CSF的慢病毒。该慢病毒的Hela细胞上清液中hGM—CSF的表达明显高于未感染者。从脐血中分离出的DC,显示其高表达CD80(87.2%)和CD86(92.8%),而单核细胞标志CD14的表达率较低(3.56%o慢病毒介导的分泌hGM—CSF的树突状细胞肿瘤疫苗刺激同种T淋巴细胞增殖的能力和抗肿瘤活性较普通DC疫苗明显增强(P〈0.01)。结论本实验制备的慢病毒Lenti—hGM—CSF感染反应细胞后能够显著增强DC肿瘤疫苗刺激同种T淋巴细胞增殖的能力及其诱导的CTL细胞对肿瘤细胞的杀伤能力,为hGM—CSF修饰的DC肿瘤疫苗的临床应用提供了一定的实验依据。  相似文献   
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