深圳市食品、公共场所从业人员志贺氏菌属带菌情况分析

目的 了解深圳市食品、公共场所从业人员志贺氏菌属的带菌情况。方法 按国标肠道致病菌中志贺氏菌的检验方法。结果 在志贺氏菌属A、B、C、D的4个菌群中，以B群为最高；血清型分属22个血清型，其中以福氏志贺氏3a血清型最高(83／411)。结论 应加强对食品、公共场所从业人员健康检查，加强菌痢的防治工作。     

多重实时PCR快速同时检测沙门菌和志贺菌

目的 建立改良分子信标，多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法，应用于食源性致病菌的快速诊断。方法 根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因，分别设计一对引物和改良分子信标探针，用同色荧光标记，用于同体系检测沙门菌。志贺菌根据ipaH基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，加入沙门菌检测体系中，建立三重实时PCR一改良分子信标检测体系，应用于同时对沙门菌、志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果 改良分子信标一多重实时PCR反应体系DNA灵敏度为69～93fg/μl。菌液灵敏度为32～64CFU／ml或1～2CFu／PCR反应体系，无交叉反应。该反应体系同时检测134株沙门菌和67株志贺菌，均出现特异的荧光信号，两种细菌检测互不干扰。对细菌性食物中毒样本等共1100份同时进行沙门菌和志贺菌检测，569份沙门菌实时PCR阳性，其中551份沙门菌培养阳性；42份志贺菌实时PCR阳性，其中41份志贺菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需时间2h至1d。结论 改良分子信标-多重实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于沙门菌和志贺菌食物中毒的快速诊断，伤寒、痢疾等肠道传染病的初筛及预防医学门诊的健康人群体检，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌

目的：建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌（LMO）的快速方法，应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法：根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，建立改良分子信标-实时PCR检测体系，应用于食品中LMO检测。结果：改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110fg，菌液灵敏度为99cfu／ml或4cfu／PCR反应体系，无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO，均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时问由原来的至少4d缩短至1d。对228份食品进行LMO检测，8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性，其中6份1310细菌培养阳性。结论：改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高，特异性强．能提高LMO的检出率和准确性，可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。     

深圳市食物中毒来源金黄色葡萄球菌的分子流行病学分析

目的建立金黄色葡萄球菌(金葡菌)的分子分型技术,研究深圳市食物中毒来源金葡菌的分子流行病学特征。方法对食物中毒事件中食物链的不同环节均采集标本,进行金葡菌分离培养。对所分离菌株同时应用SPA分型及PFGE技术作分子流行病学分析。结果 136起疑似食物中毒事件中有12起能够从食物链不同环节分离到金葡菌,共59株。PFGE将59株金葡菌分为15个型别,在10起食物中毒事件的不同环节中分析到PFGE型别一致的菌株,分辨系数为0.87。SPA分型将59株金葡菌分为10个型别,在12起食物中毒事件中不同环节样品中分析到SPA型别一致的菌株,分辨系数为0.85。结论 PFGE的分辨力高于SPA分型;通过结合流行病学资料分析,12起食物中毒事件中有6起能够通过分子分型方法准确溯源。     

荧光PCR和PFGE在副溶血弧菌食物中毒诊断中的应用研究

[目的]探讨荧光PCR和脉冲场电泳（PFGE）在副溶血弧菌食物中毒调查中的应用。[方法]对中毒样品进行荧光PCR检测,副溶血弧菌临床分离株基因组DNA经NotI酶切,通过PFGE获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。[结果]部分样品荧光PCR检测结果呈阳性,同起食物中毒菌株PFGE图谱一致。[结论]荧光PCR可以快速准确的鉴定病原体。PFGE具有很强的菌株同源性分析能力,适用于食物中毒病原菌学鉴定和传染源溯源。荧光PCR和PFGE在食物中毒的快速诊断中可发挥重要作用。     

脉冲场凝胶电泳在沙门菌食物中毒溯源中的应用研究

目的用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法,追踪某次沙门菌食物中毒的来源,确定中毒食品,快速控制传染源。方法对食物中毒中分离的肠炎沙门菌用XbaI酶切总DNA,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）法进行分子分型,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行电子化数据分析,绘出聚类分析图。结果脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法对患者样本分离的242株肠炎沙门菌进行分子分型,型别基本一致,表明是同一批食物中毒;从三文治等蛋糕制品中分离的9株菌株与患者分离株图谱完全一致,表明此次食物中毒的源头为某蛋糕厂生产的三文治等食品。结论脉冲场凝胶电泳技术适用于菌株的同源性的分析和传染源的追踪。     

深圳市伤寒PulseNet数据库的初步建立与应用

[目的]建立深圳市伤寒PulseNet数据库,用于伤寒的实时监测和分子流行病学调查。[方法]采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术,对深圳市2002～2005年106株伤寒的染色体DNA进行酶切,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱电子化数据分析,建立分子分型数据库。[结果]深圳市各年的伤寒菌株变异较多,呈现30多种PFGE图谱。同一起伤寒暴发的临床分离株具有相同的PFGE图谱。[结论]深圳市伤寒PulseNet数据库的初步建立,对直观地分析各起疫情之间的相互关系,对疫情的控制和传染来源的追踪具有重要意义。     

食品污染产单核李斯特菌不同检测方法学评估

目的评价以不同方法检测食品中污染产单核李斯特菌（LMO）效果，并对其检测方法进行优化。方法同时用国标法、改良国标法、改良分子信标-实时荧光PCR法、免疫磁性分离法对深圳市2004—2006年食品样品进行LMO分离鉴定并进行比较。结果228份样品中8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性，其中6份LMO细菌培养阳性。国标法、改良国标法，改良分子信标-实时荧光PCR法、免疫磁性分离法都能栓出LMO，栓出率分别为2、63％、2．63％、3．50％、2、63％。深圳市食品中LMO的污染率为2.63％（国标法），速食类冻品污染率为12．8％（国标法）。结论荧光PCR法栓出率最高，将检测时间由原来的至少4—5d缩短至1d，可用于食品污染LMO状况调查的初筛扣食物中毒的快速诊断；国标法与改良国标法的栓出率相等，而后者的操作更方便。免疫磁性分离法的栓出率最低。     

深圳市酒店集中空调通风系统军团菌污染情况调查与分析

目的调查深圳市酒店通风系统军团菌污染情况,为预防和控制军团病提供科学依据。方法随机抽查深圳市6家四星级以上酒店的冷却塔水32份、空气过滤网样本21份作军团菌污染情况检测。结果冷却塔水军团菌阳性检出率为65.6%(21/32),空气过滤网检出率为0。21份阳性水样中共检出25株军团菌,菌型分布为LP1(15株)、LP5(9株)和LP2-14(1株)。结论深圳市酒店集中空调冷却塔水军团菌污染较为严重,必须引起重视。