含人AFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染树突状细胞瘤苗的制备

目的：构建含人AFP基因的腺病毒载体，体外转染树突状细胞，制备树突状细胞肝癌瘤苗。方法：将AFP基因亚克隆到pIND载体和Shuttle2载体中，构建穿梭载体Shuttle2-AFP。用PI—SceⅠ和I—Ceu Ⅰ双酶切后将所获AFP基因片段再与线性化的腺病毒载体pAdeno—X连接，构成pAdeno—AFP重组腺病毒载体。其后，用重组腺病毒载体转染HEK293细胞，包装腺病毒表达载体。通过酶切、PCR对腺病毒载体进行鉴定。包装好的重组病毒载体pAdeno—AFP体外感染树突状细胞制备树突状细胞肝癌瘤苗后，FACS分析pAd-eno—AFP／DC表面分子的表达，酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测AFP水平。结果：酶切、PCR鉴定证实，穿梭质粒插入片段为AFP基因。包装的腺病毒载体具有良好的感染性，可以在293细胞中形成病毒颗粒，腺病毒载体内携带AFP基因感染树突状细胞，pAdeno—AFP／DC能高水平的表达CD1a，CD11c，CD80，CD86以及HIA—DR，并分泌较高水平的AFP。结论：构建成功的含AFP腺病毒载体可以在树突状细胞中表达AFP，为DC瘤苗的进一步研究奠定了基础。     

制备源自HBsAg基因修饰树突状细胞的外切体

目的:制备一种新型负载HBsAg基因的外切体(exosome)瘤苗,并探讨其生物学特性、免疫学功能。方法:运用分子克隆和病毒载体转染HBsAg基因构建AdVHBsAg-DC肝癌瘤苗,采用流式细胞术鉴定转染基因表达;提取exosome;以透射电镜观察、Western blot法鉴定exosome。结果:构建的重组AdVHBsAg腺病毒载体,经PCR和酶切鉴定,结果显示HBsAg基因片段已正确插入腺病毒载体中。包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒。提取的exosome在透射电镜下可观察到直径为50-100nm的膜性微囊,圆形或椭圆形,有完整包膜。Western blot检测结果表明,exosome含有DC的特征分子和HBsAg基因。结论:成功制备并获得HBsAg基因修饰树突状细胞为来源的exosome瘤苗,为治疗乙肝相关肝癌提供新的思路。     

全身热疗联合化疗治疗晚期恶性肿瘤-220例疗效分析

目的:观察晚期恶性肿瘤患者全身热疗联合化疗的近期疗效与毒副反应。方法:220例晚期恶性肿瘤患者,采用常规化疗联合全身热疗,观察其疗效。全身热疗采用SRI全身热疗系统,温度40℃±0.5℃,持续90-120分钟,1次/3周。结果:近期疗效,完全缓解(CR)3例(1.36%),部分缓解(PR)28例(12.73%),疾病稳定(SD)118例(53.64%),疾病进展(PD)71例(32.27%),疾病控制率(CR+PR+SD)67.73%。绝大多数患者自觉症状好转,生活质量提高。结论:全身热疗联合化疗近期疗效确切,不同肿瘤对全身热疗的敏感性还有待进一步研究证实。     

CBL联合PBL模式在肿瘤内科临床教学中的应用

肿瘤内科学是医学生临床教学的重要内容,需要掌握的知识繁多复杂,临床教学难度较大.传统的讲授教学法存在手段单一、过程枯燥、与临床脱节等不足,易造成学生自主学习意识差,综合利用知识能力不足等问题.为了克服传统教学的缺点,将案例教学法(CBL)和以问题为基础的教学法(PBL)联合应用于肿瘤内科的临床教学中,可以培养学生的临床思维和临床实践能力,达到提高肿瘤内科学临床教学质量的目的.     

胰腺癌的分子靶向治疗

近年来胰腺癌的发病率有明显增加趋势,且治疗困难。吉西他滨是治疗胰腺癌相对有效的药物,但其治疗进展期胰腺癌的1年生存率仅为18％,中位总生存期(mOS)为5.4～5.6个月。日前,传统治疗方法联合靶向治疗成为晚期胰腺癌治疗的研究焦点。     

siRNA对胃癌AGS细胞中血管生成相关分子表达的影响

目的： 研究小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制Rac1b表达后对胃癌AGS细胞血管生成相关分子表达的影响。 方法： 体外合成针对 Rac1b 基因的siRNA序列（ Rac1b siRNA）,脂质体法转染AGS细胞,RT-PCR和Western blotting观察 Rac1b siRNA 对AGS细胞 Rac1b mRNA和蛋白水平表达的影响,ELISA和Western blotting检测缺氧条件下转染 Rac1b siRNA后AGS细胞培养上清中VEGF表达水平以及细胞中血管生成相关分子P53、VHL和HIF-1α表达水平的变化。 结果： 测序证实体外合成的 Rac1b siRNA序列正确。 Rac1b siRNA转染AGS细胞后,可在mRNA和蛋白水平特异性抑制Rac1b的表达,对其同源分子Rac1的mRNA和蛋白表达水平无影响。 Rac1b siRNA可显著抑制AGS细胞培养上清中VEGF的分泌,这种抑制作用在缺氧情况下更为明显。同时, Rac1b siRNA在缺氧情况下可抑制AGS细胞内HIF-1α蛋白的表达、上调p53和VHL蛋白的表达。 结论： Rac1b siRNA可抑制胃癌AGS细胞中 Rac1b 在mRNA和蛋白水平的表达,可能通过调节血管生成相关分子HIF-1α、P53及VHL的表达抑制缺氧情况下AGS细胞VEGF的分泌。     

新型抗癌药埃坡霉素类似物联合卡培他滨治疗晚期乳腺癌的临床疗效观察

目的：观察埃坡霉素类似物（BMS-247550）联合卡培他滨治疗晚期乳腺癌的疗效与安全性。方法：2005年12月至2007年6月,以埃坡霉素类似物联合卡培他滨治疗晚期乳腺癌12例。埃坡霉素类似物40mg／m2,静滴,持续3h以上,第1天;卡培他滨1000rag／m2,口服,2次／日,连用14天,21天为1周期。本组中位化疗周期数为6个（2—10周期）。结果：12例均可评价疗效及不良反应。完全缓解（CR）0例（0％）,部分缓解（PR）8例（66．7％）,稳定（SD）4例（33．3％）,进展（PD）0例（0％）,总有效率（CR＋PR）66．7％。中位肿瘤进展时间（TrP）6．5个月,1年生存率75．0％。主要毒性为骨髓抑制、黏膜炎、腹泻、恶心、呕吐、便秘、手足综合征、神经毒性。结论：埃坡霉素类似物和卡培他滨联合方案治疗晚期乳腺癌的疗效较好,使用方便,毒性反应可以耐受,是晚期乳腺癌的有效解救治疗方案。     

重组腺病毒介导白细胞介素-18和甲胎蛋白基因修饰的树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫活性的研究

目的 探讨甲胎蛋白(AFP)、白细胞介素(IL)-18基冈修饰树突状细胞(DC)较以往AFP基因修饰DC作为肝癌免疫治疗瘤苗是否更具优势.方法 分离外周血单个核细胞定向诱导为DC,以Ad-IL-18和Ad-AFP共感染DC,感染后细胞通过噻唑蓝(MTT)比色法检测其激活的T细胞对HepG2的杀伤活性.结果 检测结果显示目的 基因能够表达于DC细胞中.流氏细胞仪(FCM)结果显示共感染的DC细胞均高表达CD1a(73.4%)、CD11c(84.3%)、CD80(89.5%)、CD86(87.9%)和HLA-DR(91.7%).CTL结果显示IL-18/AFP-DC-T对HepG2的杀伤率(67.49±3.24)%明显高于对SMMC7721细胞(27.32±1.75)%和K562细胞(17.31±1.56)%的杀伤率,另外共感染IL-18/AFP-DC-T组对HepG2的杀伤率与AFP-DC-T、IL-18-DC-T组比较,其差异有统计学意义.结论 AFP和IL-18基因修饰DC,能够在体外诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应,而_且对HepG2细胞杀伤率大于AFP转染DC组.     

含人AFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染树突状细胞瘤苗的制备

目的:构建含人AFP基因的腺病毒载体,体外转染树突状细胞,制备树突状细胞肝癌瘤苗.方法: 将AFP基因亚克隆到pIND 载体和Shuttle2载体中,构建穿梭载体Shuttle2-AFP.用PI-Sce Ⅰ和I-CeuⅠ双酶切后将所获AFP基因片段再与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接,构成pAdeno-AFP重组腺病毒载体.其后,用重组腺病毒载体转染HEK293细胞,包装腺病毒表达载体.通过酶切、PCR对腺病毒载体进行鉴定.包装好的重组病毒载体pAdeno-AFP体外感染树突状细胞制备树突状细胞肝癌瘤苗后,FACS分析pAdeno-AFP/DC表面分子的表达,酶联免疫吸附试验法( ELISA) 检测AFP水平.结果: 酶切、PCR鉴定证实,穿梭质粒插入片段为AFP基因.包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒,腺病毒载体内携带AFP基因感染树突状细胞,pAdeno-AFP/DC能高水平的表达CD1a,CD11c,CD80,CD86以及HLA-DR,并分泌较高水平的AFP.结论: 构建成功的含AFP腺病毒载体可以在树突状细胞中表达AFP,为DC瘤苗的进一步研究奠定了基础.     

白细胞介素-2基因修饰树突状细胞体外增强其诱导的抗肝癌免疫反应

目的探讨腺病毒介导的白细胞介素(IL)-2基因修饰能否使抗原冲击的树突状细胞(DC)在体外诱导出更强的抗肝癌免疫反应。方法IL-2的重组腺病毒载体体外转染经肝癌细胞株HepG2冻融抗原致敏的DC(AdIL-2-HepG2/DC),FACS分析AdIL-2-HepG2/DC表面分子的表达,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测IL-2水平,3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖分化能力,噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应。结果AdIL-2-HepG2/DC能高水平的表达CD1a(61.7±8.1)%,CD11c(72.9±6.2)%,CD80(81.1±7.1)%,CD86(76.4±6.8)%以及HLA-DR(90.6±6.4)%,并分泌较高水平的IL-2(6.78±0.18)mq/L。AdIL-2-HepG2/DC能非常显著地刺激自体T细胞增殖(CPM值为21 878±1089),当靶细胞为HepG2时,其诱导的CTL杀伤活性(74.5±3.8)%显著高于其他各组,并且其杀伤能力与效应细胞数量成正比。结论AdIL-2- HepG2/DC可以增强体外诱导的特异性抗肝癌免疫反应。