重组腺病毒介导mIL-12 基因转染的 EL-4细胞生物学特性的研究

目的：观察 ｍ Ｉ Ｌ１２ 基因转染的小鼠 Ｅ Ｌ４ 细胞（ Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ 小鼠 Ｔ 淋巴瘤细胞株）体外生物学特性的改变。方法：阳离子脂质体协同 Ｉ Ｌ１２ 重组腺病毒感染 Ｅ Ｌ４ 细胞。结果及结论：基因转染的 Ｅ Ｌ４ 细胞有 ｍ Ｉ Ｌ１２ 的 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达,培养上清中可以检测到 ｍ Ｉ Ｌ１２ 的生物学活性。与野生型 Ｅ Ｌ４ 细胞相比,ｍ Ｉ Ｌ１２ 重组腺病毒感染的 Ｅ Ｌ４ 细胞形态及体外增殖能力无明显改变, 转染细胞的成瘤性降低。此外,研究结果还表明,阳离子脂质体能显著提高腺病毒的感染效率。     

重组腺病毒介导mlL—12基因转染的EL—4细胞生物学特性的研究

目的：观察ｍＩＬ－１２基因转染的大鼠ＥＬ－４细胞（Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｔ淋巴瘤细胞株）体外生物学特性的改变。方法：阳离子脂质体协同ＩＬ－１２重组腺病毒感染ＥＬ－４细胞。结果及结论：基因转染的ＥＬ－４细胞有ｍＩＬ－１２的ｍＲＮＡ表达,培养上清中可以检测到ｍＩＬ－１２的生物学活性。与野生型ＥＬ－４细胞相比,ｍＩＬ－１２重组腺病毒感染的ＥＬ－４细胞形态及体外增殖能力无明显改变,转染细胞的成瘤性降低,此外,     

c-CBL是连接BCR/ABL与磷脂酰肌醇-3激酶的桥梁

目的 :探讨原癌基因产物c CBL在P2 10BCR/ABL激发的异常信号转导中的作用。方法 :以慢性粒细胞白血病细胞株K56 2细胞为研究对象 ,用反义技术、免疫沉降和蛋白免疫印迹分析 ,研究c CBL、BCR/ABL和磷脂酰肌醇 3激酶 (phosphatidylinositol 3kinase ,PI3K)三者之间的相互关系。结果 :在K56 2细胞内 ,c CBL、BCR/ABL与PI3K可能形成一种三分子复合物 ,c cbl反义RNA转染细胞后BCR/ABL免疫沉降物中PI3K含量减少 59%左右 ,而BCR/ABL自身酪氨酸磷酸化水平无明显改变。结论 :原癌基因产物c CBL对BCR/ABL酪氨酸激酶活性无反向调节作用 ,它是连接BCR/ABL与PI3K之间的重要桥梁分子。     

骨髓间充质干细胞的生物学特性

从人骨髓中分离人间充质干细胞（ＭＳＣｓ）,台盼蓝拒染法测定细胞增殖状态,ＭＴＴ实验检测不同细胞因子对细胞增殖的影响。应用流式细胞学技术测定细胞周期及细胞表面抗原特征并观察细胞组织化学特点。结果：ＭＳＣｃ具有独特的表征,即ＣＤ２９,ＣＤ４４,ＣＤ１６６阳性,ＣＤ３４,ＣＤ４５,ＨＬＡ－ＤＲ和荆豆素阴性。细胞化学结果显示,几乎所有细胞酸性萘酚醋酸酯酶（ＡＮＡＥ）及糖原（ＰＡＳ反应）阳性,酸性磷酸酶（Ａ     

点突变p53及其抗原肽重组痘苗病毒抗肿瘤效应的比较研究

目的　比较点突变p5 3及其抗原肽重组痘苗病毒诱导的抗瘤免疫反应 ,为重组抗原疫苗用于肿瘤免疫治疗提供实验依据。方法　以人 135位Cys→Tyr点突变 p5 3为肿瘤相关抗原模型 ,观察以表达该点突变 p5 3蛋白的重组痘苗病毒rVV p5 3FL与表达包含该点突变抗原肽 p5 312 5 14 5的重组痘苗病毒rVV p5 3M 所诱导的CTL及对荷瘤Balb/c小鼠的免疫保护和治疗作用。结果　rVV p5 3FL和rVV p5 3M 均能诱导以CD8 T细胞为主的特异性CTL。用rVV p5 3FL与rVV p5 3M 免疫小鼠后 ,接种致死剂量的P815 mp5 3细胞 ,能保护部分小鼠免遭致死剂量肿瘤细胞的攻击。小鼠接种致死剂量的肿瘤细胞后 ,以rVV p5 3FL与rVV p5 3M 治疗荷瘤小鼠 ,可使小鼠平均存活时间显著延长。两种疫苗的抗瘤效应无明显区别。结论　来源于突变p5 3的抗原肽重组疫苗 ,可代替抗原大分子应用于肿瘤的免疫防治     

mIL-12基因转染促进小鼠树突状细胞混合淋巴细胞反应

目的 观察ｍＩＬ－１２基因转染的小鼠树突状细胞（ＤＣ）功能的改变。方法 分离小鼠骨髓单个核细胞与ｒｍＧＭ－ＣＳＦ和ｒｍＩＬ－４培养１周，对培养的细胞进行形态学观察，ＦＡＣＳ检测细胞表面ＤＥＣ２０５、ＣＤ８６表达。以ｍＩＬ－１２重组腺病志染培养的ＤＣ，ＥＬＩＳＡ测定培养上清中ｍＩＬ－１２的水平。混合淋巴细胞反应检测转染细胞的功能。结果培养１周后，得到具有典型ＤＣ形态的细胞，以ｍＩＬ－１２重组腺病毒为     

树突状细胞用于肿瘤免疫治疗的研究进展

树突状细胞是一类专职的抗原提呈细胞,在抗原的加工提呈、抗原识别及Ｔ细胞激活中发挥着重要作用。ＤＣ具有体内外都能直接刺激原初Ｔ细胞的独特性质。树突状细胞用于肿瘤的免疫治疗涉及诸如肽、肿瘤细胞及提取物的体外致敏、肿瘤相关抗原、ＲＮＡ或细胞因子的基因转移,与肿瘤细胞形成融合蛋白等。ＤＣ疗法是充满希望的肿瘤治疗方案,有关临床实验目前正在进行。     

p53抗原肽及B7重组痘苗病毒抗肿瘤的研究

目的：探索点突变ｐ５３抗原肽重组痘苗病毒诱导的抗瘤免疫效应,以及Ｂ７对之的加强作用,为重组抗原肽疫苗用于肿瘤免疫治疗提供实验依据。方法：选择人１３５位Ｃｙｓ→Ｔｙｒ点突变ｐ５３为肿瘤相关抗原模式,观察包含该点突变ｐ５３抗原肽ｐ５３１２５～１４５的重组痘苗病毒ｒＶＶ－ｐ５３Ｍ单独和联合应用表达Ｂ７的重组痘苗病毒ｒ－ＶＶ－Ｂ７诱导的ＣＴＬ及对荷瘤小鼠的免疫保护和治疗效应。结果：以ｒＶＶ－ｐ５３Ｍ经静脉免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠能够诱导以ＣＤ８＾＋Ｔ细胞为主的特异性ＣＴＬ。ｒＶＶ－ｐ５３Ｍ能以１：１的比例混合接种可加强ｒＶＶ－ｐ５３Ｍ诱导的抗瘤免疫反应。结论：以痘苗病毒为载体的ｐ５３抗原肽疫苗代夫人工合成抗原肽,有潜在临床应用价值,共刺激分子Ｂ７与肿瘤抗原相结合是一种有效的免疫治疗策略。     

人骨髓间充质干细胞支持体外造血

体内的稳态造血依赖于复杂而完整的骨髓造血微环境系统，其中的细胞成分是该系统的关键。存在于骨髓中的间充质干细胞（ＭＳＣｓ）是成纤维细胞、内皮细胞、成骨细胞、脂肪细胞等多种骨髓基质细胞的前体细胞，在造血调控中可能具有一定的作用。本研究首先建立了成人骨髓ＭＳＣｓ的分离及体外培养的方法，并应用长期骨髓细胞培养体系，观察了ＭＳＣｓ滋养层体外维持长期培养启动细胞（ＬＴＣ－ＩＣ）的能力及其促进造血细胞分化的功能     

Biological features of mesenchymal stem cells from human bone marrow

Objective To study the biological characteristics of mesenchymal stem cells (MSCs) from human bone marrow. Methods A culture of mesenchymal stem cells was initiated from bone marrow low-density mononuclear cells separated by Percoll Centrifugation and maintained in low-glucose Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) with 10% selected fetal calf serum. Cell growth pattern and its responses to cytokines were evaluated by trypan blue exclusion and MTT test, respectively. Cell cycle and surface antigenic features were analyzed by flow cytometry technique. Cytochemistry characteristics of MSCs were determined.Results Easy-handling methods to isolate and culture expand MSCs were developed in this study. MSCs were unique in their phenotypes. They were positive for CD29, CD44, CD166, and negative for CD34, CD45, HLA-DR and Ulex europaeus. Cytochemistry evaluation showed that MSCs were homogeneously positive for acid α-naphthl acetate esterase (ANAE), glycogen (periodic acid Schiff reaction, PAS), and negative for acid phosphatase (ACP) and the Sudan black reaction (SB). Around 5% of them were positive for alkaline phosphatase (ALP). The cells had a population doubling time of 30 hours and cell cycle analysis showed that approximately 10% of them were in S phase. MSCs grew at significantly different rates when incubated in the presence of various recombinant human cytokines, of which interferon γ, tumor necrosis factor α, stem cell factor and insulin-like growth factor promoted the proliferation of MSCs dramatically, while others tested had no effects on cell growth. Conclusions MSCs are a homogenous population of cells that have unique growth, phenotypical and cytochemical characteristics. Furthermore, the diverse responses of MSCs to different cytokines provide a clue for the selection of optimal expansion and maintenance of MSCs.