外胚叶发育不全基因及其受体在斑马鱼牙齿早期发育中的表达

目的 探讨外胚叶发育不全（EDA）基因及其受体（EDAR）基因在斑马鱼早期咽齿发育过程中的表达模式,为进一步研究其在牙齿发育过程中的功能奠定基础。方法 提取受精后48 h（48 hpf）的斑马鱼胚胎总RNA,之后逆转录合成cDNA,以该cDNA为模板,特异性扩增斑马鱼咽齿特异性标记基因dlx2b、Eda信号通路相关基因eda及edar基因片段,用TA克隆试剂盒将这3个基因片段分别连接到pGEMT载体上,将对应质粒用聚合酶链反应（PCR）线性化,以PCR线性化做模板,选择相应的RNA聚合酶体外转录,合成dlx2b、eda及edar基因的反义mRNA探针。收集36、48、56、60、72、84 hpf的斑马鱼胚胎,运用全胚原位杂交技术检测eda及edar基因在斑马鱼咽齿发育部位的表达分布。比较原位杂交结果eda及edar表达区域与斑马鱼咽齿特异性标记基因dlx2b所指示咽齿部位的关系。结果 获得了dlx2b、eda及edar基因的反义mRNA探针。原位杂交结果显示,48~72 hpf时eda及edar在鳃弓牙齿相应部位可见强棕褐色阳性信号,与dlx2b所指示咽齿部位吻合。结论 Eda信号通路配体与受体在斑马鱼咽齿早期发育过程中即牙齿发生至形态发生阶段于咽齿部位特异性强表达,这一结果显示该信号通路可能参与斑马鱼咽齿早期发育的调控。     

变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗免疫防龋实验研究:唾液和血清抗体水平测定

目的　将基因疫苗pcDNA3-pac和pcDNA3-gtfB经腺周注射免疫定菌大鼠,观察唾液和血清抗体的变化,证实基因疫苗的免疫原性。方法　36只Wistar大鼠分为6个免疫组:pcDNA3-pac,pcDNA3-gtfB,pcDNA3-pac联合 pcDNA3-gtfB,阳性对照灭活变形链球菌,阴性对照pcDNA3及PBS液组。建立龋攻击定菌鼠模型3个月,各组大鼠均以100μg剂量免疫定菌鼠3次,ELISA法检测唾液SIgA和血清IgG水平。结果　疫苗组在首次免疫后第33天 (第5周)都出现较高水平的唾液SIgA,在第75天(第11周)后达最高水平,并持续至实验结束。成组单因素方差分析唾液SIgA水平在总体上各实验组间存在差异(P<0·01或P<0·05),q检验分析在联合免疫组和全菌细胞组最高,单基因疫苗免疫组次之,pcDNA3与PBS组最低;血清IgG水平在4个免疫组之间没有差异(P>0·05),但都高于空白及阴性对照组(P<0·05)。结论　pcDNA3-pac和pcDNA3-gtfB腺周途径免疫定菌Wistar大鼠,能有效诱导唾液 SIgA和血清IgG抗体产生,两种疫苗联合免疫优于单基因疫苗。     

AP-PCR基因指纹用于变形链球菌传播株与非传播株的筛选

目的　应用AP-PCR基因指纹筛选变形链球菌(mutans streptococci,MS)的传播株(transmitted strains)与非传播株(nontransmitted strains),探讨影响MS传播的因素。方法　选取20对口腔中已定居有MS的儿童(3~4岁) 与他们的母亲,取牙面菌斑样本涂于轻唾-杆菌肽培养基。每人随机挑取45株分离株,提取染色体DNA,AP-PCR 基因指纹检测。结果　①从200个分离株中共分辨出45个不同的基因型,其中10位(50%)母亲和15位(75%)儿童分别带有1种类型,另5位(25%)儿童带2种类型,另10位(50%)母亲带有2种或2种以上类型(2位母亲带有5 种型),表明人群口腔中定居的MS存在基因多态性;②比较母亲与其子女MS基因型的相似性发现,20对母子中 16对(80%)有相似基因型出现,提示MS在此人群中的高传播现象;③对有传播现象的16位母亲的S.mutans进行传播株与非传播株的筛选发现,10(50%)位母亲口腔中传播株与非传播株共存,表明并非所有基因型的S.mutans 都能传播。结论　①AP-PCR基因指纹能清晰地分辨出S.mutans的传播株和非传播株;②在S.mutans的母婴传播过程中某一型菌株的优先传播是普遍存在的,进一步探讨造成这种现象的原因是很有必要的。     

变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗防龋动物实验:Keyes龋齿计分研究

目的 :了解变形链球菌基因疫苗 pcDNA3 pac和 pcDNA3 gtfB的免疫防龋效果。 方法 :2 8d龄Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为pcDNA3 pac组 (A组 )、pcDNA3 gtfB组 (B组 )、pcDNA3 pac联合 pcDNA3 gtfB组 (C组 )、变形链球菌灭活全菌组 (D组 )、pcDNA3空载体组 (E组 )和PBS液组 (F组 )进行 3次双侧颌下腺腺周注射免疫。建立定菌鼠模型 ,诱龋 3个月 ,根据Keyes经典评分方法从龋损范围及深度进行龋损综合评估和比较。结果 :龋损牙面计分在 pcDNA3与PBS组最高 ,其次为单基因疫苗免疫组 ,联合免疫和灭活全菌细胞最低 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;窝沟龋各级计分 :E级龋在单基因疫苗组 ,联合疫苗组、灭活全菌细胞组无区别 (P >0 .0 5 ) ,而PBS组和 pcDNA3组则较低 (P <0 .0 1) ;Dm级、Ds级则是联合免疫组与灭活全菌细胞组最低 ,单基因疫苗免疫组较高而PBS和 pcDNA3组最高 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;Dx级四个免疫组发生率很低或不发生 ,显著低于PBS组和pcDNA3组 (P <0 .0 1)。结论 :重组质粒pcDNA3 gtfB和pcDNA3 pac具显著有效的免疫防龋作用 ,以联合基因疫苗免疫最好 ,是理想的防龋决策之一。     

变形链球菌表面蛋白遗传多态性与黏附作用关系的初步研究

表面蛋白P1是人类的主要致龋菌———变形链球菌 (以下简称变链菌 )重要的毒力因子之一 ,主要介导变链菌的非蔗糖依赖性黏附。不同菌株的黏附性能不同 ,而此差异是由其毒力因子遗传变异所决定的。我们通过对变链菌临床分离株表面蛋白P区及V区、C末端编码基因的研究 ,探讨其遗传多态性与黏附性能的关系。1.材料和方法 :(1)引物设计与合成 :因V区在P区上游 ,编码基因相距近 ,所以此二区一起扩增。用引物设计软件Primer 3.0设计两对引物 ,分别扩增变链菌表面蛋白P、V区及C末端编码基因spaP pv(2 0 6 0～ 315 7bp)、spaP c(40 0 3～ 4 85 1…     

变形链球菌母子传播与其对牙面初始粘附关系的研究

目的:探索变形链球菌母子传播与其对牙面初始粘附能力的关系。方法:首先以AP-PCR检测Mutans streptococci(MS)在20对3~4岁儿童和母亲之间的传播,并从母亲口腔中筛选出传播株和非传播株;再采用同位素标记法,检测传播株和非传播株对SHA的粘附差异,同时对其表面蛋白粘附功能区spap-a和spap-pv分别用限制性内切酶haeⅢ和AluⅠ进行RFLP分析。结果:传播株较非传播株具有较弱的粘附力(P<0.01),spap-a和spap-pv经酶切后分别呈现的3种和2种基因型在传播和非传播人群的MS中分布不同(P<0.01)。结论:初始粘附能力弱的菌株被传播的可能性较大,不同MS株传播能力的差异可能与其表面蛋白A区,PV区的基因多态性有关。     

不同血清型变形链球菌表面蛋白可变区(extended-V)的同源性分析

目的 分析不同血清型变形链球菌表面蛋白可变区（extended-V）的基因及蛋白质的同源性，探讨该区在防龋疫苗研制中的作用。方法 以变形链球菌血清型c、d、f、g参考株及部分c型临床株为模板，PCR扩增SrV+区片段，通过内切酶DdeⅠ进行限制性片段长度多态性分析并测序，将其测序结果在NCBI服务器上用blastn搜索软件进行同源性比较。结果 在相同条件下血清c、f型菌株均扩增出约1.13 kb左右的片段，酶切后出现5种基因型（A、B、C、D、E）。选取所占比例较多的A、B、C型代表株进行测序，经比较显示其基因型间的同源性达92%-98%。血清d、g型无扩增产物，将g型6715表面蛋白SpaA全片段基因同OMZ175的产物序列在blastn上进行比较，有3个大小不一的片段出现同源性；血清d型OMZ176的表面蛋白基因序列在GeneBank上未能查出，故无法比较，但其相应蛋白质的同源性也在77%-82%之间，显示出相当高的同源性。结论 就c、f型菌株来说，可以将该区纳入疫苗的研究范畴；d、g型虽未能扩增出相应产物，但其基因还是存在部分区域的相似性，且其蛋白质同源性很高，也可以考虑利用d、g型上同c、f型共有的某些肽段进行疫苗的研制。     

变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗免疫防龋动物实验:体质量影响研究

目的 :了解变形链球菌基因疫苗单独及联合免疫对定菌鼠体质量的影响。方法 :2 8d龄Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为pcDNA3 pac组、pcDNA3 gtfB组、pcDNA3 pac联合pcDNA3 gtfB组、变形链球菌灭活全菌阳性对照组、pcDNA3空载体阴性对照组和PBS液空白对照组 ,进行 3次双侧颌下腺腺周注射免疫 ,建立定菌鼠模型及诱龋实验 3个月 ,于实验开始和结束时测定体质量。结果 :基因疫苗免疫组体质量与 pcD NA3及PBS组无显著差异 (P >0 .0 5) ,而灭活全菌细胞免疫组体质量显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :pcD NA3 gtfB和pcDNA3 pac对大鼠体质量无不良影响 ,较灭活全菌疫苗安全     

变形链球菌葡糖基转移酶gtfB／CAT真核表达质粒的构建及表达

目的:构建变形链球菌葡糖基转移酶催化区(gtfB/CAT)真核表达质粒(pVAX1-gtfB/CAT),并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达.方法:通过基因重组技术构建pVAX1-gtfB/CAT;通过脂质体转染法,将其转染至COS-7细胞中,然后以免疫组化SABC法检测其在细胞中的表达.结果:pVAX1-gtfB/CAT经酶切分析证实携带gtfB/CAT片段;pVAX1-gtfB/CAT转染的细胞胞质呈褐色染色,pVAX1空质粒转染的细胞胞质中无着色.结论:成功构建防龋基因疫苗pVAX1-gtfB/CAT,所携带的基因序列正确,能够在真核细胞COS-7中正确表达目的蛋白.     

口腔专业住院医师规范化培训胜任力评价标准的探研

住院医师规范化培训是医学生毕业后教育的重要组成部分,是近年来国家卫计委医疗改革的一个重要方面.培养住院医师的核心胜任力是口腔专业住培的基本目标和要求,通过对我国口腔住院医师规范化培训的现状分析,参考国外牙科医学博士培养模式,结合口腔医学专业的自身特点,并反复征求住培基地学员和教员的意见,制定了一套口腔专业住院医师胜任力考核评价标准.该标准包括专业知识、临床诊疗、人际沟通能力、职业素养、再学习能力、心理素质六大方面,较基于专业知识考试和临床操作模拟考试的评价模式更加全面客观,可供今后在规范化培训中参考应用.