磁性纳米紫杉醇微球对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

目的观察不同浓度磁性纳米紫杉醇微球在不同时间段对人胃癌细胞株SGC-7901生长和凋亡的影响。方法实验分为实验组和对照组。实验组:磁性纳米紫杉醇微球0.01、0.05、0.1、0.5、1 μ mol/L。对照组:紫杉醇0.01、0.05、0.1、0.5、1μmol/L;5-氟尿嘧啶1、5、10、50、100μmol/L及空白阴性对照。应用MTT法测定上述不同浓度的磁性纳米紫杉醇、紫杉醇、5-氟尿嘧啶对SGC-7901细胞分别在6、12、24、48、72小时的生长抑制率。流式细胞仪分析细胞周期的改变,细胞免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达。结果MTT法显示不同浓度的磁性纳米紫杉醇微球可抑制SGC-7901细胞增殖(1 μ mol/L作用72小时时的抑制率达72.6%),与浓度和时间均呈正相关;流式细胞仪细胞周期分析提示磁性纳米紫杉醇微球可将SGC-7901细胞阻滞于G2M期(0.5μmol/L作用48小时阻滞率达43.8%±0.8%);免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调。结论磁性纳米紫杉醇微球可诱导人胃癌细胞SGC-7901发生凋亡且具有控释效应,可延长药物对胃癌细胞的有效作用时间;载药...     

缺氧诱导因子-1α与消化系肿瘤

缺氧诱导因子（HIFs）是调节细胞适应缺氧的一个主要调控因子，存在三种亚型：HIF-1、HIF-2、HIF-3，其中HIF-1和HIF-2与肿瘤的血管生成关系密切。HIF-1由α亚单位和β亚单位组成异源二聚体，α亚单位是主要氧调解亚单位。在缺氧条件下，HIF-1α的DNA结合活性和HIF-1α蛋白水平增加。本文就HIF-1α的结构、功能、调控机制和在消化系肿瘤中的表达及其相关的治疗措施作一综述。     

食管鳞癌细胞中缺氧诱导因子-1α与基质金属蛋白酶-2基因相关性研究

目的:观察食管鳞癌细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因表达的关系以及与肿瘤的侵袭、转移行为的相关性。方法:以RNA干扰(RNAi)手段抑制HIF-1α的表达,构建HIF-1α基因沉默食管鳞癌细胞株;以稳定沉默HIF-1α基因的Eca-109细胞、100μmol/L氯化钴模拟缺氧细胞及未干预细胞为研究对象,通过Westernblot检测MMP-2基因在3种细胞中的表达差异,以了解其与HIF-1α基因的关系。结果:4个HIF-1α基因沉默Eca-109细胞组与空白对照细胞组相比HIF-1α蛋白表达均有明显下调,同时MMP-2的蛋白表达均出现不同程度的下降,灰度扫描提示差异有统计学意义(P<0.05)。结论:食管鳞癌中HIF-1α与MMP-2基因之间存在相关性。     

胃镜与胸腔镜联合微创治疗食管平滑肌瘤

目的 探讨食管平滑肌瘤的多镜联合微创治疗方法.方法 回顾性分析我院2004年3月至2009年6月间41例多镜联合微创治疗食管平滑肌瘤患者临床资料,根据病史、食管造影、胃镜、超声内镜和CT扫描确诊,通过胃镜指导胸腔镜手术和胸腔镜保驾内镜手术2种方法微创治疗.术后均进行随访.结果 术后病理证实为食管平滑肌瘤,冰冻报告瘤组织中未见肉瘤病灶,41例均痊愈,临床诊断食管平滑肌瘤的符合率为100%,一次性切除成功率为100%.术后无食管大出血或穿孔等严重并发症;术后1个月复查胃镜未见病变复发.随访3个月～5年,无肿瘤复发.结论 联合微创诊断和治疗巨大食管平滑肌瘤,方法新颖,创伤小,手术安全,疗效确切满意.     

食管鳞癌细胞系EC-109中缺氧诱导因子-1α的表达意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在食管鳞癌细胞系EC-109中的表达及其意义.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测HIF-1αmRNA和蛋白在常氧及缺氧状态下在食管鳞癌EC-109细胞中的表达.结果:HIF-1αmRNA在缺氧食管鳞癌EC-109细胞中过表达(P<0.05),在缺氧24h时HIF-1αmRNA表达最高,其后随时间延长表达下降;HIF-1α蛋白水平在缺氧食管鳞癌EC-109细胞中无明显上调(P>0.05).结论:低氧可诱导食管鳞癌EC-109细胞中HIF-1αmRNA的过度表达,缺氧状态下HIF-1α蛋白水平较常氧时无明显增加.     

HIF-1α基因沉默对食管鳞癌细胞功能性基因的影响

目的观察食管鳞癌细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因与血管内皮生长因子（VEGF）、血红素加氧酶（HO-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）基因之间的关系及其对细胞周期的影响。方法以HIF-1α基因沉默的Eca-109细胞、化学模拟缺氧细胞及未干预细胞为研究对象，通过Western blot检测VEGF、HO-1、MMP-2基因在三种细胞中的表达差异以了解其与HIF-1α基因的关系，并通过流式细胞术分析了解HIF-1α基因沉默后细胞周期的变化。结果Western blot检测发现，同空白及模拟缺氧组比较，HIF-1α基因沉默后HIF-1α蛋白表达明显下调，同时VEGF、HO-1、MMP-2的蛋白表达均出现了明显下降。流式细胞分析表明，HIF-1α基因沉默后的Eca-109细胞组同对照组相比G1、G0期细胞明显增加，G2、M期细胞变化不大，S期细胞比例明显减少。结论HIF-1α与上述三种基因存在明显相关性，进而可能影响着食管鳞癌的血管生成、侵袭、应激保护等生物学行为，HIF-1α沉默可将食管鳞癌细胞阻滞于G1、G0期。     

氯化钴对RNA干扰食管鳞癌细胞HIF-1α基因表达及功能的影响

目的研究氯化钴模拟缺氧对RNA干扰的缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因表达及功能的影响，观察在人食管鳞癌细胞系Eca-109中RNA干扰抑制HIF-1α的效果。方法选择4组细胞分别为食管癌Eca-109细胞和3株稳定转染HIF-1αSiRNA的Eca-109细胞（本实验室编号分别为H2／14号、H3／15号、H2／20号细胞），分别用200、400、600、800μmol／L氯化钴模拟缺氧，缺氧培养时间分别为12、24．48、72h，采用Western印迹和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HIF—1α蛋白及mRNA表达，同时Western印迹检测血红素加氧酶（HO-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、葡萄糖转运体-1（Glut-1）、P53等相关基因的表达。结果4组细胞HIF-1α蛋白表达均随氯化钴浓度加大而增加，常氧与400μmol／L氯化钴处理24h后筛选出H3／15号细胞HIF-1α蛋白表达最少，与其它3组相比差异有统计学意义（P〈0．05），mRNA检测差异无统计学意义；干扰细胞常氧下HO-1、MMP-2、Glut-1、P53表达不同程度减少，缺氧后HO-1、P53表达增加，MMP-2、Glut-1表达无明显变化。结论RNA干扰能抑制Eca-109细胞的HIF-1α基因表达，从而不同程度减少HO-1、MMP-2、Glut-1、P53等相关基因表达；经氯化钴模拟缺氧筛选出干扰效果较好的一株细胞，为进一步研究HIF-1α的功能奠定了基础。     

幽门螺杆菌感染对胃癌患者血管生成相关因子表达的影响

研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染促血管生成素2(angiopoietin2,Ang2)及其受体Tie2、CD34和HER-2/neu蛋白的表达的影响,以探讨Hp诱导胃癌发生发展的可能机制,并寻找胃癌可能的肿瘤标记物。胃癌病人Hp阳性13例,阴性16例,取病灶组织,应用免疫组化方法检测Ang-2、Tie2、CD34和HER-2/neu蛋白的表达。同时将产幽门螺杆菌毒力因子(cytotoxin-associated gene A,cagA)的Hp培养滤液加入胃癌细胞(MGC-803)及正常胃粘膜上皮细胞(GES-1)的培养基中,48 h后应用流式细胞仪检测Tie2、HER-2/neu蛋白的表达。免疫组化结果显示与Hp阴性胃癌组相比,Hp阳性组Ang2和Tie2的阳性表达率均显著升高;流式检测结果显示:幽门螺杆菌毒力因子的添加导致MGC-803细胞中HER-2/Neu的表达显著增加(P<0.05),而正常胃粘膜GES-1细胞Neu表达无明显变化。上述结果表明Ang2及其受体Tie2参与了Hp诱导的胃癌发生发展,对两者的检测可能预示胃癌的发生,含CagA蛋白的幽门螺杆菌培养滤液单独作...     

RNA干扰体外抑制人食管鳞癌细胞Eca-109缺氧诱导因子-1α的表达

目的:观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人食管鳞癌细胞系Eca-109中 HIF-1α基因的沉默效应,筛选有效干扰靶点．方法:设计合成干扰缺氧诱导因子-1α RNA 寡核苷酸片段,经退火、连接等步骤克隆至线性化的PGCsi真核表达载体上,测序鉴定．应用LipofectamineTM2000将该质粒分别转染Eca-109细胞和293T细胞,其中Eca-109抗性细胞又经2-4 wk的G418筛选．荧光显微镜评估转染效率,荧光定量RT-PCR检测HIF-1α mRNA表达情况,western blot检测HIF-1α蛋白表达情况．结果:成功构建了3个靶点的重组质粒pGCsi- H1-shHIF,293T细胞平均转染效率为约85．4％, Eca-109细胞的平均转染效率约73．2％．荧光定量RT-PCR和Western blot显示瞬时转染这3种重组质粒的293T细胞和筛选2 wk的Eca-109 细胞HIF-1 α mRNA和蛋白表达均较对照组有不同程度的下降,其中2号和3号靶点的干扰效应尤为明显．在瞬时转染72 h后的293T 细胞中,其抑制率分别达到了78．5％、86．9％ (P=0．000,P=0．000 vs 72 h空白对照组),筛选2 wk的Eca-109细胞中,3号靶点对HIF-1α mRNA的抑制率也达到了69．7％(P=0．000 vs 2 wk空白对照组)．结论:重组质粒pGCsi-shHIF能有效抑制食管鳞癌细胞Eca-109中HIF-1α基因的表达,经不同细胞中的瞬时和稳定转染筛选出了有效干扰靶位．     

内镜联合胸腹腔镜治疗消化道良性肿瘤的初步应用体会

我院2005年06月至2009年02月通过腹腔镜、胸腔镜联合胃镜、超声胃镜微创治疗33例巨大广基上消化道良性肿瘤，取得满意的疗效，现结果和初步应用体会报告如下。