一管酒精法提取转基因小鼠胚胎组织基因组的实验方法及应用

目的：优化提取基因组的方法,建立高效、简便、快速提取基因组DNA的方法,用于大批量转基因小鼠鉴定。方法：用一管酒精基因组DNA抽提法抽提基因组DNA。结果：经过分光光度法检测基因组DNA浓度、纯度及电泳分析DNA质量,显示一管酒精抽提法提取的基因组与经典酚氯仿提取法提取的基因组产量、纯度及质量没有明显差别;酶切全基因组后,2种方法获得的基因组都可以被酶完全切开;两者模板都能成功应用PCR扩增来鉴定基因敲入小鼠并可应用于基因组测序及Real-time PCR检测基因敲入小鼠中外源基因并鉴定其相对拷贝数。结论：一管酒精基因组抽提法得到的DNA质量可靠,可高效、简便、快速鉴定转基因小鼠及进行基因组DNA酶切、测序、Real-time PCR等后续实验。     

转录因子Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的时空表达

目的检测胚胎期小鼠Tbx18在mRNA及蛋白水平的表达情况,了解Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的时空表达模式。方法用整体原位杂交技术检测小鼠整胚TBX18 mRNA的表达,用X-gal染色检测Tbx18-Cre/Rosa26R/LacZ双杂合基因谱系示踪模型小鼠胚胎的报告基因LacZ蛋白的表达,用荧光定量PCR检测小鼠胚胎期心脏mRNA的定量表达。结果发现在小鼠胚胎期9.5～10.5 d转录因子Tbx18主要在前体心外膜表达,由前体心外膜逐渐迁移定位于心外膜;在11.5～12.5 d的小鼠胚胎Tbx18主要定位于心脏、上下肢、体节及上下唇鄂区域;大于12.5 d的小鼠胚胎Tbx18除了上述部位外还定位于肾、输尿管、膀胱等区域。结论转录因子Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的表达具有时空特异性,对小鼠心脏的发育可能起着至关重要的作用;同时在上下肢、体节、唇鄂、肾、输尿管、膀胱的发育中也可能起非常重要的作用。     

三拗芎葶合剂对哮喘大鼠肺组织转录因子T-bet、GATA-3及血浆中IFN-γ、IL-4的影响

目的探讨三拗芎葶合剂对哮喘大鼠肺组织转录因子T-bet,GATA-3及血浆中IFN-γ、IL-4的影响。方法取健康雄性SD大鼠60只,随机分为空白对照组、哮喘模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、地塞米松组6组。空白对照组用生理盐水造模,其余5组大鼠用OVA加氢氧化铝腹腔注射,从第3周起各组分别用等量生理盐水、1%OVA溶液雾化激发,同时用等量生理盐水、不同浓度三拗芎葶合剂灌胃、地塞米松腹腔注射2周。4周后处死大鼠取右肺采用RT-PCR法测量肺组织转录因子T-betmRNA、GATA-3mRNA,取血浆用ELISA法测量IFN-γ、IL-4浓度。结果实验显示模型组GATA-3 mRNA、IL-4浓度明显升高。T-betmRNA、IFN-r浓度降低;空白对照组、地塞米松组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组GATA-3 mRNA、IL-4浓度明显下降,T-betmRNA、IFN-γ浓度升高,以中药高剂量组、地塞米松组效果明显。结论三拗芎葶合剂能够通过升高大鼠血浆IFN-r水平、肺组织中T-bet mRNA抑制哮喘大鼠气道炎症,并改善大鼠生存质量。本结论为宣肺逐瘀化痰法治疗哮喘提供了实验依据。     

复方薤白胶囊治疗慢性支气管炎急性发作期的Ⅱ期临床研究

目的观察复方薤白胶囊治疗慢性支气管炎急性发作期痰热郁肺证的安全性和有效性。方法采用随机、双盲单模拟、阳性药平行对照方法。试验组口服复方薤白胶囊，每次4粒，每日3次；对照组口服芩暴红止咳胶囊，每次2粒，每日3次。疗程均为10d。结果试验组临床控制32例，显效45倒，有效34例，无效9例；对照组临床控制21例，显效54例，有效36例，无效9例。两组显效率和总有效率相近（P〉0．05）；服药第5天对咳嗽症状的改善，试验组优于对照组（P〈0．05）。治疗组有3例出现白细胞减少，未经特殊处理自行恢复。结论复方薤白胶囊治疗慢性支气管炎急性发作期痰热郁肺证是安全、有效的。     

B型利钠肽联合TIMI危险积分对STEMI患者远期死亡风险预警价值的研究

目的:评价B型利钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)联合心肌梗塞溶栓(Thrombolysis in myocardial infarction,TIMI)危险积分对急性ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI)患者远期死亡率预警价值.方法:345例STEMI患者在首发胸痛24 h内采血测定血浆BNP水平,并进行TIMI风险积分评定.对纳入病例进行长期随访,随访终点为全因性死亡,包括心血管病死亡和非心血管病死亡.结果:平均随访(314±208)d,死亡率为(69人)20.0%.远期死亡率与高TIMI积分密切相关(P＜0.001).血浆BNP水平升高与远期死亡率增加相关(中位数[全距]ng/L,存活者447.5[8～2 854]vs死亡者986.0[31～4 986],P＜0.001).多因素Cox分析表明,发病24 h内血浆BNP水平升高和TIMI危险积分均为预测远期死亡风险升高的独立可靠指标(BNP,2.608[95%CI,1.840～3.696],P＜0.001;TIMI危险积分,1.227[95%CI,1.138～1.323],P＜0.001).Kapian-Meier生存曲线分析结果为BNP低于中位数者较高于中位数者远期预后明显较佳(P＜0.001).远期生存曲线下面积(Area undera cunre,AUC)BNP为0.797(P＜0.001),而TIMI危险积分0.780(P＜0.001),TIMI积分联合BNP可以提高预测死亡率的价值(AUC,0.853,P＜0.001).结论:发病24 h内测定BNP水平和TIMI危险积分评定能可靠的预测STEMI患者远期死亡风险,BNP水平与TIMI危险积分两者联合能提高其预测远期死亡风险的价值.     

碎裂QRS波预警左心室收缩功能障碍患者心脏事件和死亡风险队列研究

目的:评价碎裂QRS波(Fragmented QRS complexes,fQRSs)对左心室收缩功能障碍(LVSD)患者心脏事件和死亡率的影响。方法:504例LVSD病例入选,常规ECG检测,分为f QRSs组和非f QRSs组2组;随访比较2组患者全因死亡率和心脏事件发生率。结果:随访(32·8±13·8)个月,f QRSs组全因死亡率[54例(34·62%)∶83例(23·85%),P=0·012]和心脏事件[97例(62·18%)∶151例(43·39%)]的发生率明显高于非f QRSs组(P<0·001)。Kaplan-Meier生存分析提示f QRSs组无心脏事件生存率明显降低(P<0·001),生存率降低(P=0·012);多变量Cox回归分析揭示f QRSs是LVSD患者心脏事件和全因死亡率的独立预警指标。结论:f QRSs是LVSD患者心脏事件和全因死亡率独立预警的指标,f QRSs与无心脏事件生存率和生存率降低有关。     

三拗芎葶合剂防治支气管哮喘机制探讨

支气管哮喘（以下简称哮喘）是一种在世界范围内严重危害人类健康的慢性呼吸系统疾病，全球约有3亿哮喘患者。如果哮喘得不到很好的控制，患者的日常生活将会受到很大影响，甚至危及生命。哮喘是由多种细胞（如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分（cellular elements）参与的气道慢性炎症性疾患。     

醒脑静注射液治疗慢性阻塞性肺疾病合并肺性脑病疗效观察

目的：观察醒脑静注射液治疗慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并肺性脑病的临床疗效。方法：95例COPD合并肺性脑病患者随机分为治疗组、对照组两组,两组均常规根据病情分级按2006GOLD指南治疗方案治疗,其中治疗组54例合用醒脑静注射液。比较两组患者病死率、神智改变情况、血气分析等指标。结果：治疗组神智状态好转明显优于对照组;PaCO2有所降低;两组的病死率差异无统计学意义。结论：醒脑静注射液对改善COPD合并肺性脑病患者神智状态有良好的治疗效果。