四环素及β-内酰胺耐药性基因芯片的制作及优化

目的 优化四环素及β-内酰胺耐药性基因芯片制作和杂交条件.方法 设置多组实验,逐一改变影响寡核苷酸在玻片表面固定及芯片杂交效率的实验条件,从中优化出芯片实验的最佳条件.结果 得出的最佳条件是:探针以30 pmol/μL的终浓度溶于50%二甲基亚砜中,在温度为20℃、湿度70%的条件下点制在基片上;荧光探针纯化后使用2×杂交液在42℃湿盒中杂交5 h.结论 优化出了耐药基冈芯片制作和杂交的最佳条件,总结出芯片制作优化的方法.     

抗氯霉素单克隆抗体的制备、纯化及其特异性鉴定

目的：获得能稳定分泌高亲和力抗体的抗氯霉素杂交瘤细胞。方法：重氮化法偶联制备氯霉素（CAP）的免疫抗原和检测抗原（CAP-BSA和CAP-OVA）。应用常规技术融合,三次有限稀释克隆和间接竞争ELISA法筛选杂交瘤细胞株,并鉴定抗体特异性。结果：得到一株能够稳定分泌高亲和力,特异性强抗体的杂交瘤细胞株4B12,辛酸-硫酸铵法纯化体内诱生法制备的腹水;纯化后的抗体效价>1∶256 000,杂交瘤细胞染色体平均数为50±2,分泌的抗体属于IgG₁亚类,相对分子质量为157.92 ku,亲和常数为8.26×10⁸M^-1;与甲砜霉素、庆大霉素、泰乐菌素、青霉素、链霉素和卡那霉素无交叉反应。结论：该细胞株可满足建立免疫学检测方法的需要和开发应用的要求。     

副溶血弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及原核表达

副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）革兰阴性嗜盐杆菌,广泛分布于自然界,尤其以海产品携带率最高,是一种引起食源性疾病的重要病原。特别是沿海省份,VP引起的食物中毒,人群暴露规模及发生规模呈明显上升趋势,已经高居微生物性食物中毒首位。