稳定过表达生长分化因子５基因大鼠脂肪干细胞系的建立

目的:探讨慢病毒介导的稳定过表达生长分化因子5(GDF-5)基因大鼠脂肪干细胞(ASCs)的构建条件和方法。方法:取大鼠腹股沟脂肪垫组织,采用Ⅰ型胶原酶消化贴壁法分离培养大鼠ASCs。倒置相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法测定细胞生长曲线,流式细胞仪鉴定细胞表型。制备带GDF-5/GFP融合基因的慢病毒载体系统,探索不同感染复数(MOI=1、5、10、20、40、60、80、100)的转染效率,选择最佳MOI,采用流式细胞仪检测转染效率。对转染细胞行流式细胞筛选,测定筛选后转染细胞的阳性率。筛选出的细胞行细胞爬片,DAPI染色,形态学上进一步验证细胞阳性率;并采用CCK-8法检测转染后细胞活力。结果:成功培养大鼠ASCs,流式细胞免疫表型鉴定:间充质干细胞表面抗原(CD90、CD29、CD44、CD105)表达阳性,造血细胞表面抗原(CD45、CD34)和骨髓干细胞表面抗原(CD106)表达阴性。成功构建GDF-5过表达慢病毒载体系统,慢病毒转染大鼠ASCs最佳MOI为40,转染率为65%。采用GFP荧光流式细胞筛选技术筛选后阳性率可提高至96%。CCK-8法显示,转染后细胞活力、生长曲线与未转染细胞无明显差异。结论:胶原酶消化法可成功培养大鼠ASCs,流式细胞筛选技术可显著提高转染细胞阳性率,且对细胞系活力无显著影响。     

鼠神经生长因子联合甲钴胺治疗合并足下垂的腰椎间盘突出症

目的 探讨鼠神经生长因子(mNGF)在合并足下垂的腰椎间盘突出症患者中的应用价值. 方法 对复旦大学附属中山医院骨科自2008年1月至2011年6月进行手术治疗的76例合并足下垂的腰椎间盘突出症患者的临床资料进行回顾性分析,其按照术后处理方法不同分为2组:联合组36例(应用mNGF联合甲钴胺治疗)、单纯组40例(单纯应用甲钴胺治疗).分析患者治疗后一般情况,比较2组治疗后1周、4周、12周、12个月时视觉模拟评分(VAS)和神经功能(感觉功能和肌力)恢复情况. 结果 患者获得12～54个月(平均24.8个月)随访,无一例死亡,均无创口感染,平均8个月时植骨融合.治疗后1周、4周、12周及12个月时2组VAS评分均明显低于治疗前,且各时间点联合组VAS评分亦明显低于单纯组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后1周、4周、12周及12个月时联合组感觉功能改善有效率均明显优于单纯组,差异有统计学意义(P＜0.05);除1周外其余时间点联合组肌力改善有效率均明显优于单纯组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 mNGF与甲钴胺联合使用能促进合并足下垂的腰椎间盘突出症患者的神经功能恢复.     

应用明胶海绵野三明治冶法在硬脊膜缝合后预防脑脊液漏的作用

 目的 探讨明胶海绵“三明治”法(医用胶+明胶海绵+医用胶)在加强硬脊膜后方裂口缝合预防脑脊液漏的作用。方法 回顾性分析2007年2月至2011年6月收治的54例椎管内硬脊膜下肿瘤患者资料,根据修复硬脊膜的方法将患者分成两组。常规修复组23例,男16例,女7例;年龄24～69 岁,平均(45.2±7.2)岁;“三明治”组31例,男19例,女12例;年龄22～67 岁,平均(44.2±6.4)岁。患者在切除椎管内硬脊膜下的肿瘤后,常规修复组采用连续锁边缝合硬脊膜后覆盖大小合适的明胶海绵;“三明治”组在连续锁边缝合硬脊膜后,加用医用胶喷涂缝合口及周缘硬脊膜,而后覆盖大小合适的明胶海绵,最后再次在明胶海绵表面及周缘喷涂医用胶。结果 与常规修复组比较,“三明治”组术后当天、第1天、第2天、第3天引流量均明显下降。常规修复组在引流管拔除后7～10 d仍有3例出现切口积液,经穿刺抽液、沙袋加压、俯卧体位等治疗后切口愈合。两组患者均获随访,随访时间12~63个月,平均26.5个月。常规组3个月后有5例伤口发生深部积液;“三明治”组未见明显异常。结论 应用“三明治”法修复硬脊膜背部损伤裂口可明显提高缝合修复效果,有效减少术后引流量,降低脑脊液漏发生率。     

人骨髓间充质干细胞结合多孔β-TCP构建生物相容性人工骨

研究人骨髓间充质干细胞(HBMSCs)结合多孔β磷酸三钙(β-TCP)的生物相容性与体内成骨作用. 密度梯度离心结合差异贴壁法分离HBMSCs,常规扩增传代,相差显微镜形态学观察和流式细胞仪检测细胞表面标记CD13、CD29、HLA-2、CD34、CD45和HLA-DR;分别在成骨、成软骨和成脂肪细胞培养基中定向诱导分化,验证其多向分化能力.将HBMSCs在低压下载入多孔β-TCP立方块,形成MSCs/β-TCP复合物,电镜观察材料内部与细胞结合情况.继续成骨诱导培养2周后植入裸鼠背部皮下,于植入4周和8周后取出复合物做组织学检查.设非成骨诱导培养复合物为对照. 原代和传代细胞呈梭形外观,生长增殖能力良好;流式细胞仪检测间充质细胞来源表面标记物CD13、CD29,HLA-2阳性,造血细胞来源表面标记物CD34、CD45 和HLA-DR阴性;能成功高效定向分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞;细胞在β-TCP材料表面贴附、增殖良好;MSCs/β-TCP复合物植入皮下4周后即有少量新骨生成,至8周时更明显;对照组新骨生成量较少.本方法快速、高效分离扩增HBMSCs;HRMSCs与多孔可降解β-TCP材料生物相容性良好;二者结合能显著提高体内新骨生成,提示其可用于临床作为骨移植替代物,可提高骨移植修复骨缺损的疗效.     

手术治疗颈椎后纵韧带骨化症同时合并胸椎腰椎黄韧带骨化症1例报告

患者女性,60岁。因"双下肢紧绷感、足底至大腿进行性麻木伴行走无力2年加重2个月"于2008年3月28日首次收入我院。患者2年前无明显诱因出现双下肢紧绷     

一期后路全脊椎切除治疗胸腰椎恶性肿瘤

目的:探讨一期后路全脊椎切除治疗胸腰椎恶性肿瘤的可行性、安全性和疗效。方法:回顾分析2004年5月至2009年12月复旦大学附属中山医院骨科收治的40例胸腰椎恶性肿瘤患者的临床资料。均采用一期后路全脊椎切除治疗,其中分块切除23例,整块切除17例。比较两组患者手术时间、术中出血量、术中输血量和临床治疗效果等。结果:分块切除组手术时间4.8～7h,平均5.8h,术中出血量1500～5000ml,平均2705ml,术中输血量平均1769ml,术后随访6～68个月,平均18个月,随访期内死亡5例,8例肿瘤复发,骨水泥陷入椎体和移位各1例;整块切除组手术时间6.5～8h,平均7.3h,术中出血量1000～2000ml,平均1678ml,术中输血量平均1087ml,随访期间未发现肿瘤复发,除1例钛网轻度移位外,余内固定可靠。两组术后VAS评分有明显下降,与术前相比有显著性差异(P0.05),两组间VAS改善无统计学差异(P0.05)。两组在手术时间、术中出血量和术中输血量比较有显著性差异(P0.05)。脊髓神经功能Frankel分级32例患者均有1级以上恢复。结论:一期后路全脊椎切除治疗胸腰椎恶性肿瘤安全有效。整块切除法在术中出血量、术中输血量和局部复发率方面明显优于分块切除法。     

修复关节囊及外旋肌群对预防全髋关节置换术后关节脱位的作用

目的 探讨采用髋关节后外侧切口进行初次全髋关节置换术(THA)时修复关节囊及外旋肌的作用.方法 2002年1月至2006年6月,初次采用后外侧切口行THA 116例122髋,术中保留后方关节囊及外旋肌群,并且分别将其用疝缝线"8"字直接缝合至股骨大转子(修复组).将修复组THA术后脱位率与同期常规行THA(未修复关节囊及外旋肌,对照组)的255例266髋THA做比较分析. 结果术后6个月内,修复组仅1髋(1/122,0.8%)发生术后早期脱位;对照组则有15髋发生早期脱位(15/266,5.6%),早期脱位率差异有统计学意义(X2=4.914,P=0.027);两组术后6个月均无冉脱位. 结论采用后外侧切口进行THA时修复关节囊及外旋肌群技术能够有效预防术后早期脱位.     

在胸腰椎转移瘤分离手术中应用短节段骨水泥强化椎弓根螺钉固定的临床研究

【摘要】 目的：探讨在胸腰椎转移瘤分离手术中应用骨水泥强化椎弓根螺钉固定的临床疗效。方法：回顾性分析2018年2月~2019年10月于我院行分离手术治疗的伴有硬脊膜外脊髓压迫症（epidural spinal cord compression,ESCC）的胸腰椎转移性肿瘤患者59例,其中男25例,女34例,年龄56.2±7.5岁（45～76岁）。所有患者均采用骨水泥强化椎弓根螺钉固定,共置入236枚螺钉。统计手术时间、术中失血量、输血量、术后住院天数,患者术前、术后3个月的Frankel脊髓损伤分级,患者术前、术后7d、3个月及末次随访的疼痛视觉模拟评分（visual analogue scale,VAS）及Karnofsky功能评分,围手术期相关并发症情况。收集患者术前、术后7d及末次随访时手术节段正侧位X线片,随访观察有无内固定失败及手术节段矢状位Cobb角的变化。结果：患者随访时间为18.3±3.9个月（5～34个月）;患者手术时间为169.0±23.7min（125～210min）,术中出血量为535±120.0ml（200～1300ml）,术中输少浆血1.2±0.6u（0～6u）、血浆105±32ml（0～400ml）;术后住院时间6.5±2.3d（5～11d）。术中发生骨水泥渗漏2例,均为椎前静脉少量渗漏,暂停注射后渗漏未进展,术后无不良反应;脑脊液漏1例,患者俯卧位以及补液等对症处理后痊愈;伤口愈合不良2例,予以清创缝合后伤口愈合。术后VAS评分、Frankel分级、Karnofsky功能评分与术前相比均有显著性改善（P＜0.05）。无内固定失败,末次随访时手术节段Cobb角较手术后即刻无显著性差异（22.5°±2.1° vs 21.2°±1.8°,P>0.05）。结论：对伴有ESCC的脊柱转移瘤患者行分离手术时,应用骨水泥强化椎弓根螺钉可以提供更加坚强的脊柱稳定性。     

一期后路全脊椎切除术治疗多椎节脊柱肿瘤

目的 :探讨一期后路全脊椎切除术治疗多椎节脊柱肿瘤的安全性和有效性。方法 :回顾性分析2009年11月~2015年9月因多椎节脊柱肿瘤于我院行全脊椎切除术(total en bloc spondylectomy,TES)且资料完整的9例患者,男8例,女1例;年龄42.0±13.7岁(24~64岁)。原发肿瘤5例,其中骨巨细胞瘤2例,恶性神经鞘膜瘤、造釉细胞瘤、间叶源性肿瘤各1例;转移性肿瘤4例,其中肾癌、肝癌、前列腺癌、脂肪肉瘤各1例。记录手术时间、术中出血量、输血量、并发症、住院天数、术前及术后疼痛程度、神经功能情况。术后随访观察肿瘤是否复发、远处转移以及患者存活情况。结果:9例患者均成功接受一期后路多椎节全脊椎切除术,其中2椎节切除6例,3椎节2例,4椎节1例。手术时间8.9±2.8h(7~16h)、术中出血量3422.2±1342.4ml(1700~6000ml)、输血量2200.0±842.6ml(1000~4000ml)、住院时间31.1±20.3d(14~73d)。3例患者术中硬膜撕裂,1例胸膜破裂,3例患者术后出现胸腔积液,1例4椎体切除患者术后出现胸腔感染,无神经、大血管损伤等严重并发症。围手术期无死亡病例。1例患者随访期间出现钛网下沉,其他无内固定并发症。术后VAS评分(0.9±1.1分)较术前(7.1±1.2分)明显下降(P0.05)。术前脊髓神经功能5例ASIA分级为E级,术后仍为E级;3例术前D级,2例恢复至E级,1例仍为D级;1例术前C级,术后恢复至D级。9例患者均得到随访,随访时间29.8±15.2个月(12~61个月),随访期内6例患者局部无肿瘤复发,另3例患者分别于术后8个月、18个月、28个月时发现手术部位局部肿瘤复发。4例死亡,其中3例因全身多发转移死亡,1例死于肿瘤复发引起的并发症,中位生存期为34.75个月。结论:一期后路全脊椎切除术治疗多椎节脊柱肿瘤仍是高风险、高难度手术,但是可以术后即刻改善患者生活质量,需严格把握手术指征。     

正位透视下椎弓根穿刺椎体后凸成形术治疗胸腰段骨质疏松性骨折的疗效分析

目的:评价行经皮椎体后凸成形术治疗胸腰椎骨质疏松性压缩性骨折术过程中,在正位透视下进行椎弓根穿刺的疗效及安全性。方法:选择2018年8月至2020年8月诊治的55例胸腰椎骨质疏松性压缩骨折患者,分别采用常规正侧位透视下椎弓根穿刺(传统组,n=29),以及术前根据三维CT结果规划穿刺方案,术中在正位透视下完成椎弓根穿刺(正位组,n=26)。比较两组患者年龄、术前病椎高度、注入骨水泥量、骨水泥渗漏率、手术时间、透视次数、手术前后视觉模拟评分(VAS)评分及疗效。结果:两组患者年龄、术前病椎高度差异无统计学意义。正位组患者平均骨水泥注入量[(5.08±0.70)mL vs(5.77±0.79) mL]、手术时间[(32.69±5.03)min vs(44.93±6.16) min]、中位透视次数(25次vs 32次)均少于传统组患者(P0.01)。两组患者骨水泥渗漏率、术前后VAS评分差异均无统计学意义。结论:采用C臂机单一正位透视下双侧椎弓根穿刺经皮椎体后凸成形术治疗胸腰椎骨质疏松性压缩性骨折与常规透视下手术缓解疼痛的疗效和安全性相当,但所用时间更短、透视更少。