先天性支气管狭窄1例报告

1病例资料 患儿男性,3个月,因咳喘2d入院。2d前因受凉出现咳喘及呼吸急促,小发热,吃奶差,在我院门诊子“头孢硫咪,炎琥宁”输注2d症状不缓解,门诊拟诊“婴幼儿哮喘”,遂收住院。否认家族哮喘病史。患儿系G1P1,足月剖宫产娩出,无窒息,生后即哭。生后40d及2个月龄时因咳喘伴喉中痰鸣拟诊为肺炎在我院治疗。     

原发性胆汁性胆管炎与肝硬化患者临床指标差异分析*

目的 探讨原发性胆汁性胆管炎(PBC)与原发性胆汁性肝硬化患者临床指标的差异。方法 2015年5月～2021年9月我院诊治的PBC患者164例,其中胆管炎组70例,肝硬化组94例。收集临床指标,应用Logistic回归分析影响PBC患者疾病进展的相关危险因素。结果 本组肝硬化患者年龄为(58.6±13.0)岁,显著大于胆管炎组【(53.4±11.1)岁,P＜0.05】;血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、总胆红素分别为49.7(27.5,80.2) U/L、62.6(44.9,114.7) U/L、156.8(126.5,230.5) U/L和31.5(17.6,88.4) μmol/L,显著高于胆管炎组【分别为39.3(23.9,66.0) U/L、36.4(26.8,63.4) U/L、126.5(94.8,187.3) U/L和14.6(10.0,24.3)μmol/L,P＜0.05】;肝硬化组血清抗核抗体和抗gp210抗体阳性率分别为91.5%和43.6%,显著高于胆管炎组的80.0%和25.7%(P＜0.05);肝硬化组血清IgG、IgA和IgM水平分别为17.0(13.2,20.9) g/L、3.5(2.5,4.8) g/L和2.9(2.0,4.8) g/L,显著高于胆管炎组【分别为14.2(12.7,15.8) g/L、2.6(2.0,3.4) g/L和1.8(1.2,3.3) g/L,P＜0.05】,而补体C3和C4水平分别为0.7(0.5,0.9) g/L和0.1(0.1,0.2) g/L,显著低于胆管炎组【分别为1.2(1.1,1.4) g/L和0.2(0.2,0.3) g/L,P＜0.05】;多因素Logistic回归分析发现IgM增高和补体C4降低是PBC进展至肝硬化的独立危险因素(P＜0.05)。结论 原发性胆汁性胆管炎患者进展至肝硬化阶段有一些显著的临床指标变化,血清IgM水平升高和补体C4水平降低有一定的提示作用。     

人EFTUD2基因靶向小分子化合物筛选细胞模型的建立*

目的 体外建立一个以荧光素酶为报告基因,靶向人EFTUD2基因的化合物筛选细胞模型。方法 应用限制性内切酶双酶切LV6载体,将人EFTUD2pro-0.5kb启动子和荧光素酶报告基因的融合片段重组入LV6慢病毒载体。以重组慢病毒感染HepG2细胞,采用嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得Epro-LUC-HepG2细胞株。利用荧光素酶报告基因系统挑选最佳单克隆细胞株并扩大培养。结果 准确构建了LV6-Epro0.5-LUC慢病毒载体,并成功筛选出可稳定表达荧光素酶的Epro-LUC-HepG2单克隆细胞株。根据荧光素酶报告基因检测结果,挑选了最佳克隆株细胞,被命名为Epro-LUC-HepG2细胞。结论 我们成功构建了以人EFTUD2基因为靶点的Epro-LUC-HepG2细胞化合物筛选模型,有助于后续筛选新型靶向免疫调节药物。     

非酒精性脂肪性肝病儿童血清TIMP-1和TIMP-2检测及临床意义

目的：了解非酒精性脂肪性肝病患儿基质金属蛋白酶组织抑制物（TIMP）-1和TIMP-2的水平及价值。方法根据诊断标准将105例肥胖儿童分为单纯性肥胖（n=44）、单纯性非酒精性脂肪肝（SNAFL,n=25）和非酒精性脂肪肝炎（NASH,n=36）3组,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)测定血清TIMP-1、TIMP-2,全自动酶法测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和γ-谷氨酸转肽酶(γ-GT)。结果随着单纯性肥胖向SNAFL和NASH发展,TIMP-1和γ-GT水平逐步升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 血清TIMP-1和TIMP-2指标均可不同程度地反映肝脏的纤维化程度,其中以TIMP-1更为可靠、有效。［中国当代儿科杂志,2010,12（6）：455-458］     

HGF及其受体c-met在肝衰竭与部分肝切除模型中表达差异性研究

目的研究HGF及其受体c-met在肝衰竭和部分肝切除两种动物模型肝组织的表达差异。方法分别采用D-GalN/LPS腹腔注射和70%肝脏外科切除术建立肝衰竭和部分肝切除模型,同时以健康大鼠作为对照组。采用ELISA法检测血清HGF水平,采用Real-time PCR和Western-blot法分别检测肝组织c-met基因和蛋白的表达水平。结果与对照组比,部分肝切除模型大鼠血清HGF及其受体c-met表达水平均有明显升高（P〈0.01）,而在肝衰竭模型大鼠血清HGF水平虽有升高,但c-met蛋白表达水平却明显降低（P〈0.01）。结论肝细胞c-met表达水平的降低是D-GalN/LPS诱导肝衰竭大鼠肝细胞再生障碍的主要原因。     

慢性乙型肝炎患者肝组织基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达及其意义

目的：分析慢性乙型肝炎患者血清和肝组织基质金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）表达水平与肝纤维化分期的相关性。方法分别采用免疫组化法和双抗体夹心酶联免疫吸附法检测患者肝组织和血清 TIMP-1表达水平,分析两者相关性;对159例慢性乙型肝炎患者行肝活检病理学检查,以组织学活动指数（HAI）予以分级（G）和分期（S）,分析慢性乙型肝炎患者血清 TIMP-1水平与 HAI 分级和纤维化分期的相关性。结果慢性乙型肝炎患者肝组织 TIMP-1表达水平与其血清水平呈显著性正相关（r=0.9521,P＜0.01）;不同肝纤维化分期（S1～S4）慢性乙型肝炎患者血清 TIMP-1水平差异显著（P＜0.05）,且血清 TIMP-1水平与肝纤维化分期呈正相关（r=0.704, P＜0.01）,但不同炎症分级的慢性乙型肝炎患者血清 TIMP-1水平差异无显著性。结论血清 TIMP-1水平可以较好地反应肝脏纤维化程度,且不受肝组织炎症分级的影响,有望被用于肝组织纤维化程度的临床无创评估。     

慢性丙型肝炎患者血清Pygo2水平对肝纤维化程度的评估价值探讨*

目的 探讨血清人尾肢同源蛋白（Pygo）水平诊断慢性丙型肝炎（CHC）患者肝纤维化的价值。方法 本研究共入组90例慢性丙型肝炎患者,根据肝活检病理学检查肝纤维化程度,分为F0～F4组,采用ELISA法检测血清Pygo2水平。以肝活检病理检查结果为金标准绘制受试者工作特征曲线,并计算曲线下面积评估慢性丙型肝炎患者血清Pygo2水平对肝纤维化的诊断价值。结果 在90例CHC患者中,经肝组织病理学检查,诊断F0、F1、F2、F3和F4分别为6例（6.7%）、13例（14.4%）、26例（28.9%）、35例（38.9%）和10（11.1%）;F2组血清Pygo水平显著高于F1组[（70.1±19.8）ng/ml对（55.9±20.4）ng/ml,P＜0.05],F3组[（100.1±24.6）ng/ml]显著高于F2组（P＜0.001）,F4组[（145.6±45.7）ng/ml]显著高于F3组（P＜0.01）;血清Pygo2水平与肝纤维化分期呈显著正相关（r=0.704,P＜0.01）;分别以血清Pygo2水平≥69.1 ng/mL、≥83.9 ng/mL和以≥109.60ng/mL为诊断显著肝纤维化、严重肝纤维化和肝硬化的截断点,其AUC值分别为0.8824、0.9004和0.8834,95%可信区间分别为0.806～0.959、0.836～0.964和0.768～0.999。结论 在慢性丙型肝炎患者的各项检查指标中,血清Pygo2水平作为一种简单、有效的血清学指标,可有效评估患者肝纤维化程度。     

c-met慢病毒载体的构建及稳定转染骨髓间充质干细胞

构建肝细胞生长因子受体(c-met)慢病毒载体,并稳定转染骨髓间充质干细胞(BMSCs).将c-met连接到慢病毒载体GV358上,重组获得慢病毒载体GV358-c-met.再将该重组体与病毒辅助质粒共转染293T细胞,包装生产慢病毒并测定其滴度为2×108 TU/ml.将此慢病毒转染BMSCs,经嘌呤霉素筛药后,荧光显微镜下检测荧光阳性率达100%,且Western blot证实该细胞株表达c-met蛋白.成功构建了c-met慢病毒载体,并建立了稳定表达c-met的BMSCs.     

人EFTUD2启动子的鉴定及初步分析

目的：鉴定并分析EFTUD2（elongation factor Tu GTP?binding domain?containing 2）基因的启动子区域。方法：应用生物信息学技术对EFTUD2基因结构及潜在启动子区域进行分析,预测4个EFTUD2启动子序列。使用全基因合成技术以及高保真PCR扩增得到目的启动子序列,通过BglⅡ和NheⅠ双酶切,将目的条带克隆到双荧光素酶报告基因载体psiCHECK?2中,得到4个长度不同并覆盖EFTUD2基因转录起始位点附近约2 kb的EFTUD2基因启动子双荧光素酶报告基因重组体。荧光素酶分析检测启动子活性。结果：经酶切、测序鉴定,成功构建了人EFTUD2启动子荧光素酶报告基因重组质粒。通过荧光素酶活性检测,重组体EFTUD2?0.5的相对荧光素酶活性增加（P < 0.05）,提示EFTUD2基因核心启动子序列位于转录起始位点附近约500 bp的区域内。结论：EFTUD2基因转录起始位点上游500 bp具有启动子活性,初步判定其核心启动子位于该区域。