羊毛固醇合成酶抑制剂对KCs细胞分化和凋亡的影响

目的 探究单独应用羊毛固醇合成酶抑制剂(RO)或联合胆固醇(CH)刺激皮肤角质形成细胞(KCs)后对其分化及凋亡的影响.方法 RO单独或联合CH于KCs共培养不同时间后,加入Ca2+(1.8 mmol/L)处理1d,Western blot法分析KCs的分化相关蛋白角皮蛋白(INV)和兜甲蛋白的表达;RO单独或联合CH...     

羊毛固醇合成酶抑制剂RO对KCs细胞增殖的影响

目的研究羊毛固醇合成酶抑制剂(RO)单独或联合胆固醇(CH)使用对皮肤角质形成细胞(KCs)细胞增殖及细胞周期的影响。方法 RO不同剂量作用KCs一定时间,采用MTS比色法检测KCs细胞增殖的变化;使用一定浓度的RO单独或联合CH作用KCs不同时间,使用MTS比色法和流式细胞仪检测记录KCs细胞增殖和细胞周期的变化;单独使用相同浓度RO或联合CH经过不同时间刺激KCs后通过蛋白质免疫印迹法对细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinE表达水平进行分析。结果 RO抑制KCs细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性;联合使用CH降低RO对KCs的增殖抑制作用;RO可时间依赖性增加KCs细胞周期在G1期比例,联合使用CH缓慢增加KCs周期在G1期比例;RO可时间依赖性降低细胞周期调控蛋白CyclinB1、CyclinE的表达,联合使用CH部分拮抗RO下调CyclinE,并具有时间效应,而CyclinB1的表达没有受到明显的影响。结论 RO可能通过影响CyclinB1、CyclinE的表达使KCs细胞周期G1期阻滞进而抑制KCs增殖。     

法尼基转移酶抑制剂和香叶基香叶基转移酶抑制剂对皮肤角质形成细胞增殖的抑制作用

目的探讨法尼基转移酶抑制剂(FTI)和香叶基香叶基转移酶抑制剂(GGTI)对皮肤角质形成细胞(KCs)增殖的影响。方法使用不同浓度的FTI、GGTI对KCs进行处理,细胞活力测定实验(MTS)法分析KCs增殖受各处理组的影响;利用流式细胞术检测各加药组细胞周期受一定浓度FTI、GGTI的影响; Western blot分析各加药组细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinE和P21及pAKT和pERK1/2表达量受一定浓度FTI、GGTI的影响。结果 MTS显示FTI、GGTI对KCs增殖有抑制作用,并呈浓度依赖性,FTI(5μmol/L)、GGTI(5μmol/L)时KCs细胞活力最小,抑制率分别为14.7%、24.5%。流式周期结果表示FTI、GGTI阻滞KCs在G1、G2、S各期不明显。Western blot结果表明FTI、GGTI均能够下调CyclinB1,并且可以上调P21和CyclinE的表达。同时,FTI、GGTI能促进P13K-AKT信号通路的激活,抑制MAPKS-ERK1/2信号通路的激活。结论 FTI、GGTI对原代KCs的增殖有抑制作用。     

LSS基因功能缺失对雄性小鼠生殖的影响

目的 研究羊毛固醇合成酶(LSS)基因功能缺失对小鼠生殖的影响.方法 取8周龄的LSS+/+(WT)型和LSS+/-(KO)型鼠雌雄共30只鼠,分别按♂WT×♀WT、♂WT×♀KO、♂KO×♀WT、♂KO×♀KO分组进行1:1合笼,时长4个月,统计每胎生仔个数及平均产仔周期;取WT型和KO型小鼠的血清,进行性激素检测;...     

LSS基因敲除小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定

探讨羊毛固醇合成酶(LSS)基因敲除鼠的繁育和基因型分析.将引进杂合子小鼠进行饲养并繁育,提取其基因组DNA,利用PCR反应扩增目的 基因片段,鉴定出小鼠的基因型;Westem blot分析并比较LSS基因敲除杂合子小鼠和野生型小鼠的肝脏、皮肤组织中LSS蛋白的表达情况.成功的繁育出LSS基因敲除小鼠,使用PCR鉴定其...     

基于转录组测序筛选不同性别C57BL/6J小鼠差异基因及通路

目的 通过转录组测序筛选雌性与雄性C57BL/6J小鼠差异基因及通路,为进一步探讨小鼠雌雄间行为学差异的分子机制奠定基础。方法 C57BL/6J品系的8周龄雌性与雄性小鼠,完整分离小鼠海马体组织,提取总RNA后逆转录构建cDNA文库,并在华大基因平台上生成单端为50个碱基的读数进行转录组测序。测序结束后基于GO和KEGG数据库,结合R语言中的phyper函数对数据进行筛选、校正和富集分析,计算P值;然后对P值进行矫正得到Q值并基于超几何测试方法对带注释的不同基因表达情况进行了分析,筛选出不同性别小鼠海马体中的差异基因及通路。测序结束后,使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证在雌雄小鼠海马中筛选出的差异基因并比较差异基因在不同信号通路上的表达情况。结果 通过雌雄差异比较,筛选出325个差异基因,其中上调基因233个,下调基因92个,这些差异基因功能主要富集于长时程增强(LTP)、钙离子信号通路、尼古丁成瘾等过程;雌雄差异基因相互作用网络共有362个连接点和1 703个相互作用边,筛选出的10个核心基因分别为：赖氨酸脱甲基酶5D(Kdm5d)、细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cdkl5)、...