PCR-毛细管电泳法在小龙虾中三种食源性致病菌检测中的应用评价

目的 探讨PCR-毛细管电泳法在检测小龙虾中沙门氏菌、副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌的应用效果。方法 同时应用食品微生物检验国标GB 4789方法和PCR-毛细管电泳法检测60份小龙虾中的三种致病菌,对两种检测方法的效果进行比较评价。结果 利用国标方法,小龙虾中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的检出率分别为25.00%、20.00%、10.00%。运用PCR-毛细管电泳方法,沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的检出率分别为30.00%、20.00%、10.00%。PCR-毛细管电泳方法沙门氏菌的检出率高于国标方法,三种致病菌的检出情况与国标方法一致,检验过程可控制在24 h之内。结论 PCR-毛细管电泳方法可用于小龙虾中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的检测,具有快速、灵敏、自动化程度高等优点。     

淮安市56株临床分离肺炎克雷伯菌耐药性和分子分型特征

目的了解淮安市临床分离肺炎克雷伯菌的耐药特征以及分子分型特点。方法 2018年1—6月,收集国家致病菌识别网络淮安市各哨点医院从临床标本中分离的肺炎克雷伯菌株,以拉丝试验测定分离菌株的黏液表型,以微量肉汤稀释法测定菌株对24种常用抗生素的耐药性,PCR检测荚膜血清型、毒力基因和碳青霉烯类耐药基因,利用脉冲场凝胶电泳进行分子分型。结果共收集临床分离肺炎克雷伯菌56株,高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)占55.36%,经典肺炎克雷伯菌(cKP)占44.64%。菌株多来自脓肿液(26.79%)、痰液(41.07%)。总耐药率为66.07%,多重耐药菌占58.93%,ESBLs菌株占17.86%,耐碳青霉烯类抗生素(美罗培南、亚胺培南)菌株占35.71%,3株为多粘菌素耐药菌株。除氯霉素、吉米沙星外,高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)MIC50均经典肺炎克雷伯菌(cKP)。耐药基因kpc的检出率为28.57%,cKP菌株的携带率(48.00%)大于hvKP菌株(12.90%),差异有统计学意义(P=0.004),OXA-48和NDM-1未检出。K1、K2、K5、K20、K54、K57荚膜血清型检出率分别为16.07%、10.71%、3.57%、8.93%、9.68%和3.23%。毒力基因magA、rmpA在hvKP(29.03%,80.65%)中检出率均高于cKP菌株(4.00%,24.00%),差异均有统计学意义(P值均0.05)。菌株PFGE带型相似度为5.91%～100.00%。结论淮安市临床分离肺炎克雷伯菌多为高毒力菌株,且耐药水平较高,PFGE带型多样性较高,应加强监测及临床抗生素使用指导。     

淮安市2013-2015年致泻大肠埃希氏菌的检测和流行特征分析

目的：了解2013-2015年淮安市致泻大肠埃希氏菌的检出情况和流行特征,为疾病的防治提供依据。方法于2013-2015年从淮安市各哨点医院和社区医院腹泻门诊患者的795份粪便标本中分离大肠埃希氏菌,使用多重PCR方法筛查致泻大肠埃希氏菌,再结合生化实验验证。结果在795份腹泻标本中共检出致泻大肠埃希氏菌80株,检出率为10.06%。其中ETEC 34株,检出最高,其余依次为EAEC 18株、EPEC 16株、EIEC 7株和EHEC 5株。按季节分布统计,差异有统计学意义(P<0.05),夏秋两季为主要流行时段。城市和农村的地域分布则差异无统计学意义(P>0.05);从人群分布分析,不同性别阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),但不同年龄组之间比较则差异有统计学意义(P<0.05)。结论淮安市致泻大肠埃希氏菌主要流行型别为ETEC,夏秋两季为主要流行时段,≤5岁和6~18岁为易感人群,今后应加强对重点时段和人群的监测。     

淮安市417份腹泻患者粪便标本病原菌检测及病原学分析

目的 了解淮安市腹泻患者病原菌感染情况、耐药性以及分子分型,为淮安市腹泻患者病原菌的防治提供依据。方法 对2016年淮安市腹泻患者的粪便标本进行目标病原菌的分离培养,检测出的菌株进一步做药敏试验和PFGE分子分型。结果 在417份腹泻标本中共检出致泻大肠埃希氏菌16株,沙门菌5株,志贺氏菌2株,总检出率为5.52%。药敏结果显示,目标致病菌对12种抗生素普遍耐药,其中致泻大肠埃希菌对红霉素、氨苄西林、萘啶酸、庆大霉素的耐药率均超过50%,分别为100%、81.25%、56.25%和56.25%,最高对10种抗生素耐药。沙门菌主要对红霉素耐药。PFGE分子分型分析显示,目标致病菌带型均比较分散,亲缘关系较近。结论 淮安市2016年腹泻患者病原菌感染主要以致泻大肠埃希菌为主,其次是沙门菌。菌株耐药性强,多重耐药谱广。菌株基因图谱比对显示淮安市腹泻致病菌呈多态性分布,且具流行相关性。     

淮安地区寄生长角血蜱中携带病原体情况调查

目的 了解淮安市南部丘陵地区寄生长角血蜱中携带病原体情况。方法 将采集的83只（羊、牛、犬）寄生长角血蜱编为48组待检样本,通过分离培养法检测蜱携带的细菌,PCR法检测立克次体、伯氏疏螺旋体、埃立克体、蜱传脑炎病毒、克里米亚-刚果出血热病毒和发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒。结果 羊、牛、犬寄生蜱分别检出12种、9种和4种细菌,它们隶属于13个属。其中,泛菌属（24/48, 50.00%）、气单胞菌属（19/48, 39.58%）、鞘氨醇单胞菌属（11/48, 22.92%）和葡萄球菌属（8/48, 16.67%）的携带率较高;种水平上,携带率较高的为泛菌属（24/48, 50.00%）、少动鞘氨醇单胞菌（11/48, 22.92% ）、杀鲑气单胞菌（10/48, 20.83%）、温和气单胞菌（9/48, 18.75%）和金黄色葡萄球菌（8/48,16.67%）。PCR方法在羊寄生长角血蜱中检测到发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（3.57%, 1/28）、立克次体（7.14%, 2/28）和埃立克体（3.57%, 1/28）;牛寄生长角血蜱中检测到立克次体（5.88%, 1/17）。结论 淮安市南部丘陵地区寄生长角血蜱中携带多种病原体,应针对性加强监测和防控。     

淮安地区寄生蜱携带立克次体的检测及遗传进化分析

目的 了解淮安市南部丘陵地区寄生蜱中携带立克次体的分子流行特征,为立克次体病的防治提供依据。方法 采集宿主（羊、牛、犬）体表寄生蜱,形态学鉴定蜱虫种类,然后通过PCR扩增立克次体的外膜蛋白B基因(ompB),对立克次体ompB基因进行测序和生物信息学分析。结果 共调查210只（头）宿主动物,蜱携带率为31.43%（66/210）。捕获的83只蜱经形态学鉴定均为长角血蜱。PCR检测发现长角血蜱中立克次体的感染率为3.61%（3/83）。ompB基因G+C平均含量36.43%,平均核苷酸多样性(Pi)为0.00535。3株立克次体分离株ompB基因序列之间的一致性很高,并与GeneBank中立克次体属斑点热群立克次体R. hulinensis（AY260452.1）的同源性最高,分别为98.1%、97.6%和97.5%。结论 淮安市南部丘陵地区寄生蜱中存在斑点热群立克次体感染,应制定防控措施,以免危害动物及人类健康。     

淮安市诺如病毒聚集性感染病原监测分析

目的 了解淮安市诺如病毒聚集性感染流行病学特征，为制定诺如病毒性腹泻的防制措施提供依据。方法 对“中国疾病预防控制信息系统”病毒性腹泻数据进行描述，收集2018—2020年淮安市诺如病毒聚集性感染病例标本进行监测分析。结果 2018—2020年淮安市共发生诺如病毒聚集性感染16例，报告病例256例，主要发生在托幼机构、小学和初中等场所，实验室检测样本331份，核酸阳性报告112份，检出诺如病毒阳性率为33.84%,聚集性感染多发生在4月和11月，主要以诺如病毒GⅡ型为主，且存在多个型别的流行，诺如病毒GI型与GⅡ型检测阳性率差异有统计学意义(χ²=845.6,P<0.05)。结论 诺如病毒聚集性感染易发生在幼儿园和学校等集体单位，感染型别以诺如病毒GⅡ型为主，流行趋势由GⅡ.4型向GⅡ.8型转变，应加强校园监督管理，采取病例隔离和环境消毒等综合干预措施以控制诺如病毒感染性腹泻的传播。