脐血体外同时诱导扩增T,NK和CD34+细胞

体外研究表明,人脐血含有比骨髓细胞更原始更早期的造血干细胞群。移植后所引起的GVHD发生率及程度都比骨髓及外周血要低,但其相应的GVL效应也较低,容易复发。单份脐血所含有的造血细胞量仅可以满足一定体重以下的儿童患者需求,对需移植的大部分成人患者则要进行体外扩增。脐血体外扩增后进行干细胞移植是一种新的设想和尝试,移植物中免疫细胞的组成和功能是决定干细胞移植能否成功重建造血与免疫、以及平衡GVHD和GVL的重要因素。为了研究脐血体外同时诱导扩增T、NK和CD34 细胞的可能性,本实验无菌采集健康正常足月产新生儿脐血,并分离出单个核细胞,在不同的细胞因子组合作用下用IMDM培养液培养14天。在培养0、3、7、14天时收集细胞,用FCM分析扩增前后脐血干/祖细胞及T、NK免疫细胞含量。结果表明,与无细胞因子的对照组相比,所有细胞因子SCF,IL3,IL6,IL7,IL2组合组别均能显著扩增脐血中的单个核细胞。所有细胞因子组合组别均能显著增加脐血中的CD34 细胞比例,使其含量从新鲜脐血中的1.6%升高到最高D组的11.9%。第7天时CD34 细胞平均增加10至50倍不等。新鲜脐血中CD3 T细胞平均为(18.7±4.3)%,在无细胞因子的对照组中CD3 T细胞下降明显,而在含细胞因子的组别中CD3 T有不同程度的增加,扩增最高的组别中CD3 T细胞是新鲜脐血的2倍。在新鲜脐血中含(3.6±1.9)?56 细胞。CD56 细胞数量仅在含细胞因子IL2的组别中有显著增加,其它组则无明显变化。结论:脐血中T细胞、NK细胞在一定细胞因子组合下,可与干/祖细胞同时在体外被扩增和诱导分化。     

采用双重凝集反应(diabody-based)或重组IgG1技术快速测定HPA-1a表型

背景 HPA系统携带β3整合素,HPA—1a(Zw(a),P1(A1))是HPA1b纯合子(HPA-1b1b)的免疫个体的免疫原。调查的365名妊娠妇女中,有1例形成抗-HPA-1a,该抗体引起严重的新生儿血小板减少的发病率为1/1000。需要建立可靠的、低成本的自动化检测方法,检测女性产生HPA-1a抗体的风险和筛查供者以获得HPA-1a阴性血小板。研究设计与方法针对第一个抗HPA-1a片段的基因密码,建立具有HPA-1a×D和IgG1抗HPA-1a双特异性的试验,采用这些试剂,检测两种互补的HPA-1a表型。结果运用简单的凝集反应技术检测EDTA抗凝血浆中可溶性糖蛋白Ⅱb/Ⅲa水平上的HPA-1a     

早期后除极与再灌注心律失常机理的实验研究

再灌注心律失常已引起日益广泛的重视,但其发生机理尚未完全阐明。笔者应用心内膜接触电极导管,记录犬缺血及再灌注时在体心脏左室心内膜单相动作电位(MAPs)。10只犬,建立缺血(20分钟)—再灌注模型18次,66％(12/18)于再灌注时记录到早期后除极(EADs),其平均振幅为3.9±1.2mV,占MAPs振幅的22％。其中75％(9/12)发生与EADs有关的心律失常,EADs的耦联间期与室性早搏的耦联间期高度相关(r=0.71,P<0.01)。3只犬EADs振幅呈高低变化时,伴有左心腔电图T波电压交替变化。研究结果表明,EADs诱发的触发活动可能为再灌注心律失常的主要发生机理。MAPs技术是研究在体心脏触发活动的可靠方法。在某些特殊病例,EADs振幅的交替变化,可能是体表心电图T波电交替的发生机理。     

维拉帕米抑制犬在体心脏早期后除极及室性心动过速的研究

用心外膜接触电极记录犬左室外膜单相动作电位（MAP），观察维拉帕米（异搏定）对氯化铯（CsCl）诱发的早期后除极（EADs）、QT间期延长及室性心动过速（VT）的影响。11只大，CsCl按0．5mg·kg-1次（首剂加倍），每15分钟一次静脉注射，直至诱发出VT。然后在给下一剂CsCl前，先给予维拉帕米0．1～0．2mg／kg静脉注射，后再给予此剂CsCl，以后仍每15分钟静脉注射CsCl一次直至VT再被诱发。结果维拉帕米给药前及给药后的15～60分钟CsCl诱发的EAD振幅占相应MAP振幅的29．2±7．0％和24．8±8．1％、QTc间期分别从对照组386±33ms延长至443±66ms（P＜0．01）和从441±107ms延长至516±93ms（P＜0．01），但给予维拉帕米后即刻，CsCl诱发的EADs仅为16．7±7．6％（与前述二值比较P均＜0．01）、QTc间期仅从对照的418±56ms延长至425±49ms（P＞0．05）。给维拉帕米前CsCl分别在7只和4只诱发出持续性和非持续性室速，给予维拉帕米后即刻仅在4只诱发出非持续性室速。结果示维拉帕米可以抑制CsCl诱发的EADS、QT间期延长及VT。     

SIRT1表达与结肠癌细胞多药耐药性的关系

目的建立结肠癌耐药细胞系,初步研究SIRT1表达与结肠癌细胞多耐药性的关系。方法建立耐药细胞系HCT-8/VCR。MTT法测其交叉耐药性。RT-PCR法和免疫细胞化学法分别检测SIRT1基因的mRNA水平和蛋白水平的表达,初步探讨其与肿瘤细胞多药耐药的关系。结果建立对长春新碱高度耐药的结肠癌细胞系,RT-PCR法和免疫细胞化学法表明SIRT1在HCT-8/VCR的表达增强。结论 SIRT1基因的表达与HCT-8/VCR的耐药性有一定的关系,耐药细胞SIRT1的表达明显比亲本细胞中的高。     

sHLA-G1重链分子、β_2m的体外表达及纯化研究

目的获得sHLA-G1重链分子及轻链β2微球蛋白(β2m)基因体外表达并纯化的相关蛋白质。方法RT-PCR扩增可溶性HLA-G1重链分子及人β2m轻链的cDNA序列,构建表达载体pET28a(+)/sHLA-G1及pET28a(+)/β2m,导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导sHLA-G1及β2m蛋白表达,并以Ni-NTA亲和层析和CM-FF弱阳离子柱分别纯化,透析后浓缩保存。SDS-PAGE,Western-Blot鉴定目的蛋白的表达和纯化。结果成功克隆了sHLA-G1及2βm基因并构建了pET28a(+)-sHLA-G1、pET28a(+)-β2m原核高效表达载体;表达产物以可溶性形式存在,表达量>30%,纯化后产物纯度达到95%。结论成功表达并纯化出的sHLA-G1重链分子及轻链β2m有助于阐明可溶性HLA-G1的功能。     

可溶性HLA-I检测技术和贮存血中可溶性HLA-I的浓度变化观察

本研究建立可溶性人类白细胞抗原 I类 (sHLA I)检测方法 ,并探讨贮存血中sHLA I浓度变化的意义。采用ELISA双抗夹心法定量检测 6 0例正常广东人血清中sHLA I水平和 2 0例献血员成分血中sHLA I含量。结果表明 :采用本技术时 ,可溶性HLA I最低检测限为 2 .84ng ml,批内变异系数为 5 .80 % ,批间变异系数为 9.0 0 % ,回收率≥ 98 5 7% ,广东人sHLA I平均值为 (6 99.5 4± 36 0 .10 )ng ml。贮存 2 8天的RBC和随机供者血小板的sHLA I的浓度明显高于其它成分血 ,并且与成分血中残存的白细胞数和贮存时间有关。结论 :用ELISA法检测可溶性HLA I灵敏、特异、稳定 ,在临床输血过程中可考虑选择性输注含有不同浓度可溶性HLA I的成分血。     

胸腺肽注射液引起过敏性休克1例的抢救及护理体会

胸腺肽（thymosin）又名胸腺素、胸腺多肽,可使由骨髓产生的干细胞转变成T细胞,因而有增强细胞免疫功能的作用。它在增强机体对病毒和肿瘤的防御、防止自身抗体的产生以及抗衰老等方面起着重要的作用。因而临床上多用于肿瘤、结核和肝炎等疾病的辅助治疗。随着胸腺肽注射液静脉滴注日益增加,其不良反应报道也日益增多。现将我院1例患者使用胸腺肽注射液后发生过敏性休克的抢救及护理体会报道如下。     

腹腔镜下PK与双极电系统治疗输卵管伞端粘连闭锁伴不孕的临床效果比较

目的比较PK刀和双极电刀在腹腔镜手术中治疗输卵管伞端粘连闭锁伴不孕的疗效。方法2004年5月至2006年10月在我院因输卵管伞端粘连闭锁伴不孕的Ⅱ、Ⅲ期患者64例,其中PK刀组32例,双极电刀组32例,在腹腔镜下行输卵管粘连松解、输卵管造口术,比较术中、术后情况和妊娠率。结果两组手术时间、术中出血量、术后肛门恢复排气时间、术后住院天数等差异均无显著性意义（P〉0．05）,但PK刀组术后妊娠率为56．67％,双极组术后妊娠率为27．59％,两组比较差异有显著性（X2=5．107,P〈0．05）。结论腹腔镜手术在治疗Ⅱ、Ⅲ期输卵管伞端粘连闭锁伴不孕中,PK刀组妊娠率高于双极组．与PK刀在输卵管成形术中对输卵管损伤较小,有利于恢复输卵管伞与卵巢的解剖关系和拾卵功能有关。     

单克隆抗体法和PCR-SSP法行脐血HLA-DR、DQ抗原分型的比较

我们采用序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲＳＳＰ）技术对脐血ＨＬＡＤＲ、ＤＱ抗原进行分型，并与单克隆抗体（单抗）法进行比较，报告如下。材料和方法１　样本　脐血５０份，其中来源于足月产妇３０份（其中２０份为随机抽样脐血；１０例为地中海贫血家族同胞脐血），妊娠４～６个月者２０份，水囊引产终止妊娠收集脐血。采集脐血量在８０～１６０ｇ之间，偶有２２０ｇ者，检测样本量２ｍｌ、１０ｍｌ，分别用于不同方法作对比研究。２　淋巴细胞的获得　用免疫磁珠分离Ｂ淋巴细胞，获得的Ｂ淋巴细胞纯度为９０％以上。特异性免疫…