人巨细胞病毒IE1蛋白促进巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α及凋亡

为了研究HCMV IE1-GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞分泌活性及其凋亡的影响,将真核表达载体pEGFP/IE1转染至巨噬细胞(Mφ),转染48h后,用荧光显微镜观察GFP-IE1融合蛋白或GFP的表达与定位。ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β或TNF-α的含量以及用RT-PCR检测其mRNA的表达情况,并收集Mφ经PI染色后流式细胞术(FCM)检测其凋亡率。结果发现,GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时表达且定位于细胞核,GFP定位于整个细胞中。GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时高表达使Mφ分泌IL-1β和TNF-α量及其mRNA表达量均增加且Mφ凋亡率明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而GFP表达对Mφ分泌及其凋亡无影响(P>0.05)。HCMV IE1瞬时高表达可上调Mφ分泌细胞因子IL-1β和TNF-α并促进Mφ凋亡。     

HPV18型E2蛋白高表达对巨噬细胞凋亡及其分泌功能的影响

目的:研究HPV18 E2及其N端(TAD)、C端(DBD)与GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞(MΦ)凋亡及分泌活性的影响,为进一步研究E2蛋白在HPV18致癌机制中的作用奠定实验基础.方法:通过PCR从现有真核表达载体pEGFP-C1/E2上分别扩增出TAD、DBD基因片段,并构建真核表达载体pEGFP-C1/TAD、pEGFP-C1/DBD.将3种真核表达载体及pEGFP-C1分别转染MΦ,用倒置荧光显微镜观察它们的表达与定位,并以抗GFP抗体为一抗作Western blot检测它们的表达.通过3种融合蛋白在MФ内的瞬时高表达,在转染48 h后分别检测各组细胞培养基中TNF-α和IL-1β的含量,并收集MΦ经染色以及流式细胞术(FCM)观察检测其凋亡.结果:GFP-E2融合蛋白主要表达于细胞核,细胞质内也有表达,而GFP-DBD融合蛋白仅表达于细胞核内,GFP-TAD仅表达于细胞质.GFP-E2、GFP-TAD融合蛋白在MΦ内高表达后MΦ凋亡率上升,细胞因子TNF-α和IL-1β分泌量增加,且GFP-TAD作用强于GFP-E2.而EGFP-DBD无此作用.结论:HPV18 E2及其TAD与EGFP融合蛋白瞬时高表达可诱导MΦ凋亡并上调其分泌细胞因子TNF-α和IL-1β.     

不同浓度罗哌卡因复合舒芬太尼硬膜外阻滞在产程潜伏期阶梯式分娩镇痛中的临床价值

目的分析不同浓度罗哌卡因复合舒芬太尼硬膜外阻滞在产程潜伏期阶梯式分娩镇痛中的临床价值。方法选取我院2017年5月至2018年5月收治的120例产妇,随机分为3组,每组各40例,1组:2 mg罗哌卡因+4μg舒芬太尼;2组:3 mg罗哌卡因+4μg舒芬太尼;3组:4 mg罗哌卡因+4μg舒芬太尼。对比三组产妇的镇痛效果。结果相比镇痛后5、10、60 min的疼痛程度,2组和3组优于1组,差异存在统计学意义(P0.05)。结论在产程潜伏期阶梯式分娩镇痛中,可以对4μg舒芬太尼+2-3 mg罗哌卡因进行安全使用。4μg舒芬太尼+3 mg罗哌卡因具有较好的镇痛效果,在产妇产程潜伏期阶梯式分娩镇痛使用具有较好优势。     

人巨细胞病毒疫苗及其研究进展

人巨细胞病毒（HCMV）在人群中多为潜伏感染，对免疫功能低下者如新生儿、器官移植、造血干细胞移植和AIDS病人，可造成严重危害甚至死亡。抗HCMV感染免疫有体液免疫和细胞免疫，尤其是细胞免疫发挥关键作用。使用HCMV疫苗诱导体液免疫和细胞免疫预防HCMV感染是有效和理想的选择。     

应用阿托品过量严重中毒的教训

笔者曾收治 1例农药中毒患者 ,因诊断失误 ,用药不当造成严重阿托品中毒 ,现将教训进行分析、总结如下 ,以引起医护人员的高度重视。1　病例介绍患者 ,男 ,6 5岁 ,农民 ,因家庭纠纷自服农药草甘膦约 150 m L,1小时后被家人发现送至本院。入院时神志清 ,头痛、呕吐、轻度腹痛 ,面色苍白 ,双侧瞳孔约0 .2 5cm。立即给予洗胃 ,阿托品 5mg静脉注射每 10分钟 1次 ,冲击 3次后 ,持续予每 2 0分钟静注 5mg,2小时后患者意识不清 ,面色苍白 ,P 58次 /分 ,BP11.4 7/8k Pa,T36℃ ,双侧瞳孔散大至边缘 ,呼吸急促 ,此时家属要求请上级医师会诊。结果认…     

1200例白内障手术护理体会

笔者自 1994年至今对 12 0 0例白内障患者行白内障囊外摘除术加人工晶体植入术 ,手术成功率高 ,损伤少 ,无痛苦 ,笔者就其手术前后护理配合体会总结如下。1　术前护理1.1　心理护理 :白内障患者尤其是双侧失明者对手术顾虑重重 ,作为责任护士应主动与患者交谈 ,耐心倾听患者的诉说 ,介绍手术方法及过程、目的和可能发生的并发症 ,列举在本院行白内障摘除术后视力成功恢复情况 ,消除患者对手术的恐惧心理 ,增强信心 ,积极配合医护人员 ,增加对手术医生的信任感。1.2　眼部护理 :指导患者做好眼部卫生 ,剪去患眼的眼睫毛 ,术前患眼给予抗生素…     

人巨细胞病毒IE1真核表达载体的构建与表达

目的构建人巨细胞病毒（HCMV）IEl真核表达载体，观察其在真核细胞内的表达，为HC—MVIEl核酸疫苗的相关研究奠定基础。方法将质粒pNEBl93-IEl用Sal I、BamH I双酶切与载体pEGFP—C1连接构建重组载体pEGFP—C1-IEl；双酶切鉴定后，取重组载体pEGFP—C1-IEl用EcoR I 、Hind Ⅲ／双酶切与载体pcDNA3．1（-）连接构建重组质粒pcDNA3．I（-）-IEl，双酶切和测序鉴定；将重组质粒pcDNA3．1（-）-IEl转染HeLa细胞，RT—PCR检测IElmRNA的表达。结果重组载体pEGFP—C1-IEl和pcDNA3．1（-）-IEl双酶切后均可切出约1476bp目的片段；重组载体pcDNA3．1（-）-IEI测序结果登录C,enBank，作BLAST分析，含有1476bp目的基因片段，无碱基错配和移码突变，与读码框完全-致；转染重组载体pcDNA3．1（-）-IEl的细胞中可扩增出约1476bp的目的条带。结论成功地构建了真核表达载体pcDNA3．1（-）-IEl，且其能在真核细胞内袁达。     

Effect of HCMV IE1 Protein on Cytokines Secretion and Apoptosis of Macrophages

Objective： To investigate the effect of human cytomegalovirus （HCMV） IE1 protein on the secretory activity and apoptosis of macrophages. Methods： The eukaryotic expression vector pEGFP-C1/IE1 was used to transfect THP-1-macrophages. 48 h after transfection, the expression and localization of GFP or GFP-IE1 was observed under fluorescent microscope. The levels of IL-1β and TNF-α in the culture media were examined by ELISA, and the mRNA expression of them was analyzed by RT-PCR. Cell undergoing apoptosis were determined by flow cytometry using the propidium iodide （PI） staining method. The data were analyzed by SPSSI3.0. Results： As observed under fluorescent microscope, the expressions of GFP-IEI and GFP by plasmid pEGFP-C1/IE1 or pEGFP-C1 in THP-1-macrophages could be found in nuclei or whole cells. Conclusion： As demonstrated by RT-PCR and ELISA, mRNA and protein expressions of IL-1β and TNF-α and promotes apoptosis in THP-1-macrophages.     

人巨细胞病毒IE1-GFP融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建增强型绿色荧光蛋白(GFP)与人巨细胞病毒(HCMV)IE1融合蛋白真核细胞表达载体,为IE1基因的表达和功能研究提供基础.方法 将质粒pNEB193-IE1和载体pEGFP-C1分别进行双酶切获得目的基因IE1片段和空载体,回收纯化后用T4连接酶将两者连接并转化E.coli JM109,用salⅠ、BamHⅠ双酶切后琼脂糖电泳鉴定阳性克隆.结果 双酶切pEGFP-C1-IE1后,琼脂糖电泳可见到大小约1476 bp的片段,与IE1预期片段大小一致,即IE1亚克隆入pEGFP-C1.结论 成功地构建了HCMV IE1-GFP融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1-IE1.