脂肪干细胞分化成血管内皮细胞前后miRNA的差异表达

目的：探讨人脂肪间充质干细胞向血管内皮细胞诱导分化前后microRNA （miRNA ）的差异表达,预测其靶基因。方法对人脂肪间充质干细胞诱导成的血管内皮细胞进行鉴定后,提取人脂肪间充质干细胞向血管内皮细胞诱导分化前后的 miRNA ,微阵列芯片检测表达谱的变化,对有显著差异的miRNA进行实时荧光定量PCR验证,通过TargetScan、Miranda、PITA 、RNAhybrid和microTar五个数据库预测靶基因。结果筛选、验证出四个显著差异表达的miRNA。其中,miR‐29b‐3p和miR‐5096为显著上调,miR‐143‐3p和 miR‐145‐5p为显著下调。预测到 OCT4、SOX2、KLF4、TGFB2、IGF1、TAF11、TMEM169、UHRF1和OSBPL6等相关靶基因。结论人脂肪间充质干细胞向血管内皮细胞诱导分化前后存在显著差异性表达的miRNA ,提示这些miRNA在其分化中有重要的调控作用。     

小儿先天性肾积水的临床病例分析

目的 探讨小儿先天性肾积水的诊疗方案.方法 对513例肾积水患儿的临床病例资料进行回顾性总结.结果 513例小儿肾积水病例中103例收治住院,其中83例(16.2%)手术治疗,其余430例(83.8%)均予以定期随访,保守治疗.结论 动态观察肾积水进展情况,结合多项影像学指标和临床表现,综合分析以决定是否手术治疗.肾动态显像及GFR测定不能绝对反映肾功能.肾切除术的指征仍存在争议,需谨慎对待.     

重症中暑致白细胞减少1例

患者男性,51岁,2006年7月7日在田间劳动约4 h后被家人发现意识不清,伴四肢抽搐、呕吐胃内容物,约0.5 h后送至当地医院急诊。当时患者体温42.0℃,呈浅昏迷状态,多痰、频繁抽搐。头颅磁共振检查示脑萎缩;腰穿脑脊液检查未发现异常;外周血白细胞3.2×109/L。拟诊“重症中暑”。予输液、镇静、降温及激素治疗。患者体温降至37.8~38.2℃,仍持续昏迷不醒。9日发现患者皮肤出现黄染,体温升至40.0℃,呼吸急促,因病情加重,于2006年7月10日0:20转入我院。入院时查体:体温38.2℃,脉搏124次/m in,呼吸39次/m in,血压91/38 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),浅…     

先天性肾积水患儿尿水通道蛋白-1、内皮素-1表达水平及临床意义

目的 分析先天性肾积水患儿尿水通道蛋白（AQP-1）及内皮素-1（ET-1）的表达水平,并探索其临床意义。方法 选取40例先天性肾积水患儿作为实验组,并根据肾积水严重程度分为轻、中、重度积水。另选无泌尿系疾患儿童40例作为对照组。收集实验组术前晨尿、术中肾盂尿和术后第7天晨尿,以及对照组晨尿。测定实验组及对照组尿液AQP-1及ET-1表达水平,并进行尿AQP-1、ET-1水平的组间比较,及实验组术前、术中、术后尿AQP-1水平的组内比较。结果 轻度肾积水患儿尿AQP-1水平与对照组比较,差异无统计学意义（P?>0.05）;中度、重度肾积水患儿尿AQP-1水平则低于对照组（P?<0.05）;实验组患儿术中尿AQP-1水平低于术前水平（P?<0.05）;术后尿AQP-1水平高于术前水平（P?<0.05）;先天性肾积水患儿尿ET-1阳性率高于对照组（P?<0.05）。结论 尿AQP-1及ET-1水平可作为先天性肾积水患儿的辅助诊断指标。尿AQP-1水平还可作为肾积水患儿术后恢复的监测指标。     

HIV-1 Rev基因编码蛋白在PEL细胞系中的表达及其表达蛋白抑制HHV-8溶解性周期复制

目的:构建含人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression, Rev)编码基因的重组真核表达质粒并初步探索Rev基因编码蛋白对人类疱疹病毒8型(HHV-8)溶解性周期复制的影响.方法:构建pRev-Flag重组质粒并进行酶切鉴定和序列测定;将pRev-Flag重组质粒瞬时转染原发性渗出性淋巴瘤细胞系(PEL)BCBL-1细胞和小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3,采用RT-PCR、Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Rev基因的表达情况;提取瞬时转染pRev-Flag重组质粒的BCBL-1细胞总RNA,进行RT-PCR检测HHV-8次要衣壳蛋白编码基因ORF26 mRNA转录水平.结果:核酸序列分析结果表明,克隆的Rev基因序列与GenBank中已登记的Rev序列100%同源.RT-PCR和Western blot都在Rev预期位置检测到特异性条带.RT-PCR检测显示,Rev基因对编码蛋白能够降低HHV-8 ORF26 mRNA转录水平.结论:成功构建含Rev基因序列的重组质粒并在真核细胞中获得正确表达;初步探索表明Rev蛋白能够抑制HHV-8溶解性周期复制.     

PBL联合CBL教学模式在儿外科住院医师规范化培训中的应用与探讨

住院医师规范化培训是医学毕业生从学生成长为合格医生的重要阶段。当前我国面临儿科医师短缺的困境,儿科住院医师规培是培养儿科医学专业人才的重要措施,任重而道远。规培医院需要合理安排选择不同的教学形式,争取做到优势互补,促进教学培训效果的进一步优化,培养更多优秀的小儿外科医师。以问题为基础的PBL教学法和以案例为基础CBL教学法是两种注重学生参与的教学模式。文章探讨PBL联合CBL教学模式在儿外科住院医师规范化培训中的应用,并且对两种教学模式在案例及问题设计、教师、学生、评价体系和配套资源等方面出现的问题进行分析并提出改进意见。     

脂肪源干细胞向血管内皮细胞的分化

背景：脂肪来源干细胞在体内储备丰富,体外增殖快速,具有多向分化潜能,是目前组织工程种子细胞的研究热点。近年来越来越多的研究表明脂肪干细胞在一定条件下可被诱导分化为内皮细胞,促进血管生成。t目的：观察兔脂肪干细胞体外分离培养及诱导分化为血管内皮细胞的生物学特性。方法：取兔附睾处脂肪,采用胶原酶消化分离获得脂肪干细胞,体外培养至第3代后加入血管内皮细胞生长因子与碱性成纤维细胞生长因子联合诱导分化,对诱导前后细胞进行形态学观察、生长曲线测定、免疫组织化学染色及流式细胞仪表型检测。结果与结论：兔脂肪干细胞生长旺盛,第3代兔脂肪干细胞呈成纤维细胞样,生长曲线呈“S”型,15代以内细胞形态未见明显变化。免疫荧光法检测Vimentin阳性,流式细胞仪检测CD44表达阳性,CD31表达阴性;诱导后细胞CD31表达阳性,CD44表达阴性。第3代兔脂肪干细胞向血管内皮细胞诱导分化21d显微镜下呈铺路石样形态,血管内皮细胞第Ⅷ因子相关抗原染色细胞阳性,透射电镜下可见W-P小体。提示脂肪干细胞在体外可诱导分化为血管内皮细胞,可为组织工程血管提供理想的种子细胞。     

尿道下裂相关miRNA差异表达分析的初步探讨

目的通过筛选尿道下裂、术前经HCG治疗的尿道下裂以及正常包皮组织中miRNA差异表达,探究其与尿道下裂的发生以及术前HCG治疗影响预后的可能途径,为探究尿道下裂病因提供新思路。方法选取9例尿道下裂(其中3例术前进行HCG治疗)以及3例包茎患儿(对照组)为研究对象,分别取包皮组织抽提总RNA,利用芯片技术筛选各组差异性表达的miRNAs,并用RT-PCR技术对筛选结果进行验证。结果芯片筛选结果:与对照组比较,尿道下裂患儿的包皮组织里差异性表达的miRNAs中上调的19个,下调的15个。与术前行HCG治疗组的患儿相比,术前未行HCG治疗的尿道下裂患儿包皮组织里差异性表达的miRNA中上调的19个,下调的25个; RT-PCR验证结果:在差异性表达的miRNA中选择10个miRNA进行验证,其中5个miRNA与芯片结果相符,分别是let-7b-3p、miR-145-5p、miR-376a-3p、miR-377-3p和miR-1-3p。其中let-7b-3p、miR-145-5p、miR-376a-3p、miR-377-3p在尿道下裂组中低表达,在对照组和术前HCG治疗的尿道下裂组中高表达; miR-1-3p在术前HCG治疗的尿道下裂患儿中较未用药组中高表达。结论首次建立尿道下裂患儿miRNAs的基因表达谱,并筛选出在术前行HCG治疗尿道下裂、术前未行HCG治疗尿道下裂与包茎之间存在差异表达的miRNAs。根据筛选出的差异性表达的miRNAs,推测其与尿道下裂的关系,为今后疾病的预防以及提高治疗效果提供新的线索。