颞下颌关节骨关节病髁突软骨细胞线粒体DNA突变的实验研究

目的:探讨颞下颌关节骨关节病髁突软骨细胞线粒体DNA突变及其意义.方法:去除左侧部分关节盘建立大鼠颞下颌关节骨关节病模型,培养骨关节病(术后3月)和正常髁突软骨细胞.采用32对引物,使用PCR技术部分重叠扩增全长线粒体DNA,并将PCR产物进行时间温度梯度电泳,对电泳条带与正常有差异的PCR产物进行测序.结果:在35个具有异质性突变特点的PCR产物中,发现42个异质性突变,tRNA和D-loop具有高突变率.结论:颞下颌关节骨关节病髁突软骨细胞线粒体DNA存在突变.     

永生化软骨细胞体内软骨形成的实验研究

目的　探讨以永生化软骨细胞作为种子细胞构建和形成软骨的可能性。方法　把人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)导入兔髁状突软骨细胞 ,G418筛选 ,挑选阳性克隆扩增培养 ;实验组将扩增培养的转染细胞与细胞支架材料 β 磷酸三钙 ( β TCP)复合 ,对照组将正常软骨细胞与 β TCP复合或单纯 β TCP在体外培育后种植于裸鼠皮下 ,3和 6个月取材进行组织学和免疫化学检测 ,并与对照 1组和对照 2组进行比较。结果　实验组和对照 1组可见复合体包裹软骨样组织 ,对照 2组有少量纤维样组织形成。免疫组化染色显示 ,实验组番红“O”、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原染色呈强阳性 ,有明显软骨组织形成 ,与对照组有显著性差异 (P <0 0 1) ,对照 1组染色呈弱阳性 ,对照 2组则为阴性。结论　永生化软骨细胞可以作为软骨组织工程的种子细胞 ,具有较好的软骨形成能力     

Bcl-2和p53基因对永生化软骨细胞端粒酶活性影响的实验研究

目的：探讨原癌基因bcl-2 和肿瘤抑制基因p53调节永生化细胞端活性的机理。方法：兔髁突软骨细胞通过真核表达载体转梁人端粒酶催化亚基hTERT，经G418筛选，挑选阳性克隆培养，使用原位杂交和荧光TRAP检测转染细胞bcl-2和p53 Mrn水平和端粒酶活性。结果：未转染的细胞无端粒酶活性；100代转染后的软骨细胞端粒粒酶活性明显高于未转染细胞；同时 bcl-2 mRNA和p53 mRNA水平有所降低， bcl-2 mRNA水平明显低于未转染hTERT和端粒阴酶软骨细胞。结论 bcl-2和p53参与了细胞永生化过程中端粒酶活性的调节。     

软骨细胞在微载体中的培养和快速扩增

目的：探索在短期内获得大量成活率高、分化良好的兔关节软骨细胞的方法,方法：应用胰蛋白酶、胶酶消化的方法从新生新西兰兔关节软骨处分离、培养软骨细胞,并将获得的软骨细胞在旋转生物反应应（RCCS）内应用Cytodex-3微载体进行培养。应用倒置显微镜和扫描电镜对微载体表面的软骨细胞进行动态观察,并对收获的软骨细胞进行Ⅰ、Ⅱ型胶原的细胞免疫化学染色分析。结果：并节软骨细胞可快速贴附于Cytodex-3微载体表面,细胞伸展后生长加速,到培养后期,细胞密度可达最初接种的20倍。在微载体上收获的软骨细胞Ⅰ型胶原的免疫细胞化学染色呈阴性,Ⅱ型胶原染色则呈强阳性。结论：微载体细胞培养技术是一种简便、快速的体外细胞扩增方法,可为构体建组织工程化人工软骨提供大量软骨软件。     

切断面神经干后大鼠面神经元bcl-2、bax基因表达变化及意义

目的 观察面神经干切断后面神经元ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因表达与面神经元调亡的关系。方法 采用大鼠面神经干切断模型,应用免疫组织化学方法观察面神经干切断后面神经元内ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因表达变化和对面神经元凋亡的影响。结果 面神经干切断后可以导ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因表达的明显变化及面神经元的凋亡。结论 ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因参与了面神经干切断诱导的面神经元凋亡过程的调控。     

永生化软骨细胞体外快速扩增的实验研究

目的　探讨获取大量软骨组织工程种子细胞的方法和技术。方法　通过真核表达载体 ,把人端粒酶逆转录酶基因 (hTERT)转入兔髁状突软骨细胞 ,筛选、挑选阳性克隆在微载体 RCCS内快速扩增永生化软骨细胞。观测RCCS中微载体培养永生化软骨细胞的生长情况和检测细胞代谢率 ,进行Ⅱ型胶原免疫组化染色 ,并与常规培养方法进行比较。结果　永生化软骨细胞在微载体 RCCS中生长迅速、细胞代谢率高、倍增时间缩短 (P <0 0 1)。在培养第 8天 ,细胞数量可达最初接种的 95倍 (P <0 0 1)。结论　联合应用微载体和RCCS培养技术 ,能够在体外快速、大量扩增永生化软骨细胞     

舌癌组织中p53和c-myc的表达及端粒酶活性的实验研究

目的　探讨端粒酶和原癌基因c-myc和p53在舌癌组织中的表达以及相互作用,分析它们与舌癌组织临床病理特征之间的可能关系。方法　采用原位杂交技术和端粒末端重复放大技术(TRAP)分别检测c-myc和 p53在舌癌组织中的表达以及舌癌组织中端粒酶的活性。结果　在低分化的舌癌组织中端粒酶活性明显升高 (P<0·05),c-myc在低分化1级舌癌组织中阳性表达显著升高(P<0·05);p53在舌癌伴淋巴结转移患者中阳性表达明显降低(P<0·05)。结论　端粒酶在舌癌的发生发展过程中可能起重要作用,c-myc和p53在舌癌发生过程中对端粒酶的激活发挥重要影响。     

骨髓间质干细胞复合生物陶瓷构建组织工程化人工软骨

目的 探索以多孔β-磷酸三钙(β-TCP)生物陶瓷材料为支架，经体外诱导的骨髓间质干细胞(MSCs)为种子细胞，构建组织工程化软骨修复羊关节软骨缺损的可行性。方法将28只中国美利奴绵羊分为三组。实验组(n＝12)：分离培养羊自体第7代MSCs，经转化生长因子-β诱导后接种到顶制的β-TCP多孔生物陶瓷材料上，细胞—材料复合体经体外孵育后，无菌条件下植入预制的羊单例肋骨近端关节面缺损处；单纯材料组(n＝12)：采用单纯β-TCP材料修复羊关节软骨缺损；空白对照组(n＝4)：制备的羊关节软骨缺损区未做任何修复。术后12周和24周分别取材，进行组织学、组织化学和免疫组织化学分折。结果 实验组术后12周羊关节软骨缺损处肉眼可见透明软骨祥组织形成，组织学检查发现，材料降解明显，未降解吸收的材料孔洞内广泛分布着新生软骨组织，软骨细胞外基质丰富，Ⅱ型胶原染色阳性；术后24周，支架材料几乎完全降解，缺损区被新生软骨组织所取代。单纯材料组术后12周，缺损区边缘有新生软骨组织向支架材料内长入，支架材料吸收明显；术后24周，见从缺损区边缘长入到支架材料内的新生软骨组织逐渐增多，但材料的中心部位未发现新生软骨形成。空白对照组至术后24周，仅见少量软骨组织从缺损区边缘向缺损区内长入，缺损中央大部分区域仍未得到修复。结论 以β-TCP多孔生物陶瓷作为支架材料，以自体MSCs作为种子细胞构建组织工程化软骨修复关节软骨缺损是可行的。     

面神经断裂后大鼠面神经核区神经元凋亡和星形胶质细胞变化的实验研究

目的：研究面神经断裂后面神经核区神经元凋亡基因bcl-2,bax和星形胶质细胞变化及其意义。方法：大鼠面神经离断后，采用免疫组化的方法，通过图像分析和对面神经核区神经元bcl-2,bax的表达和星形胶质细胞变化进行定量分析。结果：面神经断裂后15d面神经核内神经元出现凋亡高峰，bcl-2/bax在面神经断裂后15d达最低，与正常对照组相差显著（P＜0．01），GFAP阳性细胞达最多，细胞着色最明显，与正常对照组相差显著（P＜0．01），结论：bcl-2和bax可能在面神经元凋亡过程中发挥重要作用；星形胶质细胞反应与面神经元的损伤和修复关系密切。     

bcl-2、Bax基因在面神经损伤后面神经元的表达及对神经元凋亡的调节

目的:探讨切断面神经干后面神经元bcl-2、Bax基因表达变化与面神经元细胞凋亡的关系。方法:将60只成年Wistar大白鼠左侧面神经干切断作为实验组,右侧面神经干未切断作为对照组。应用ABC免疫组化染色方法和原位末端标记法(TUNEL)观察术后3、7、15、21、30、60 d实验组与对照组面神经元内bcl-2、Bax基因的表达及面神经元凋亡的情况。结果:切断面神经干后3 d,bcl-2、Bax基因表达开始增多,21 d达高峰(P<0101),bcl-2/Bax比值达最低(P<0101);切断面神经干后3 d,实验组面神经元凋亡较对照组增多,21 d达凋亡高峰(P<0101)。结论:bcl-2、 Bax基因参与了面神经干切断诱导的面神经元凋亡过程的调控。