FGF2对BMP-Smads信号转导通路的负调节机制初步研究

目的 :利用小鼠前成骨细胞系MC3T3 E1初探FGF2对BMPS Smads信号转导通路的调节机制。方法 :构建含 5个串联的来源于Smad6启动子的R Smads结合序列 (GC2 )的荧光素酶报告基因质粒 ( 5GC2 Lux)。以该质粒探讨FGF2对BMP组成活化型受体I(caALK 2 )激活的Smad5转录调控能力的影响。外源转染去除Smad5分子中MEK ERK通路磷酸化位点的突变体 ,探讨FGF2伙化的MEK ERK对BMPS Smads通路的调节作用。结果 :所构建报告基因质粒能够特异反映Smads的转录激活能力的变化。FGF2能够显著下调BMP组成活化型受体(caALK2 )激活的Smad5转录调控能力。外源转染Smad5突变分子仅能部分逆转FGF2对Smads通路的负调节效应。结论 :FGF2参与调节BMPs活化的信号通路可能不仅限于通过活化MEK ERK信号转导通路来下调Smads转录调控活性     

营养支持对慢性阻塞性肺疾病的干预效果

目的：探讨营养支持对于治疗慢性阻塞性肺疾病的干预效果。方法选择80例COPD患者为研究对象，将其平均分为观察组和对照组，每组40例。研究对象均接受常规护理，观察组患者除接受常规护理外，还接受营养支持治疗，干预2周后比较2组患者的营养状况、肺功能、体重指数(BMI)、平均住院时间。结果对照组患者的血红蛋白为（3.0±0.4）g/L，转铁蛋白为（0.09±0.21）g/L，淋巴细胞数为（0.81±0.02）×109，血浆总蛋白为（8.2±3.1）g/L，观察组的血红蛋白、转铁蛋白、淋巴细胞数、血浆总蛋白分别为（4.1±0.3）g/L、（0.22±0.02）g/L、（1.12±0.05）×109、（10.2±2.8）g/L。对照组患者的动脉血氧分压和动脉二氧化碳分压的数值分别为（64.3±2.7）mmHg、（57.2±4.8）mmHg，观察组患者为（70.2±1.9）mmHg、（51.9±3.2） mmHg。对照组患者的体重指数和平均住院时间分别为（17.6±7.9）kg/m2、（14.7±2.6）d，观察组患者为（18.9±7.7）kg/m2、（10.4±0.9）d。观察组的营养状况指标、肺功能优于对照组，观察组的体重指数高于对照组，平均住院时间短于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论营养支持治疗可以改善COPD患者的营养状况和改善患者的肺功能、缩短住院时间，对治疗要积极的促进作用。     

胆宁片治疗便秘78例临床分析

目的:分析胆宁片对便秘的临床疗效。方法:78例以便秘为主要症状的患者,其中男性45例、女性33例,平均年龄(47±13.5)岁,胆宁片口服5片,3次/d,服用3月。统计患者服药前后大便频率及大便性状的改变,及患者出现的伴随症状及副反应。同时检查患者治疗前后血、尿、大便常规、肝功能、肾功能电解质、血脂等有无明显变化。结果:78例患者完成了观察研究。胆宁片治疗前后大便频率有显著差异(P0.05),大便性状的改变也有显著差异(P0.05)。结论:胆宁片对便秘治疗效果显著,副反应小,临床可广泛推广使用。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA阻断MAPK信号通路并诱导HL-60细胞凋亡

本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂-SAHA（suberoylanilide hydroxamicacid）诱导人急性髓性白血病细胞株HL-60凋亡的分子机制。采用MTT法,瑞氏-姬姆萨染色和Hoechst33342/PI荧光染色方法,检测SAHA对HL-60细胞生长的抑制作用及细胞的形态变化;通过流式细胞术、Western-blot方法测定HL-60细胞的周期变化以及多种信号蛋白的表达。结果表明：SAHA可以呈剂量时间依赖性抑制HL-60细胞的生长;经2μmol/L SAHA处理12-48小时,HL-60细胞显示细胞周期被阻滞于G0/G1期;经Hoechst33342荧光染色后细胞核出现明显的凋亡小体结构;Western blot检测证实,SAHA作用HL-60细胞后caspase3被激活,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶[po-ly（ADP-ribose）polymerase,PARP]发生剪切,细胞发生凋亡;对细胞凋亡相关信号转导通路P44/42 MAPK及PI3K/Akt检测结果表明,涉及MAPK信号通路的Raf及ERK激酶磷酸化受到明显抑制,而Akt及其下游mTOR激酶的活性没有明显改变。结论：SAHA对HL-60细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现,与细胞增殖相关的P44/42 MAPK信号通路被阻断是细胞凋亡发生的机制之一。     

结、直肠癌组织中Survivin和CD105的表达及意义

应用免疫组织化学方法检测Survivin及CD105标记的微血管密度在结、直肠癌及正常组织中的表达.发现Survivin及CD105的表达与结、直肠癌浸润深度、Dukes分期及有无淋巴结转移密切相关.Survivin可能参与结、直肠癌的血管生成,Surivivin及CD105的表达与结、直肠癌患者的预后有一定关系.     

RNAi抑制△ANp63表达对头颈鳞癌细胞增殖的影响

目的 研究 △△Np63促进头颈鳞癌细胞增殖及存活的作用及相关分子机制.方法 筛选高表达△Np63 的头颈鳞癌细胞系,采用RNAi方法分别抑制△Np63及P63表达.RT-PCR、Western印迹、MTT法、流式细胞术等检测细胞增殖和细胞周期等生物学行为改变;并检测相关周期调控蛋白的表达.结果 △Np63在FaDu细胞中高表达,定位于细胞核.抑制△Np63及P63表达后,FaDu细胞增殖能力明显下降(t=3.66,P＜0.01),发生G1期细胞周期阻滞;CDK抑制物P21及P27蛋白表达上调,P53表达上调.结论 △Np63对FaDu细胞增殖及存活发挥主导作用,△Np63通过抑制p21、p27的表达,促进肿瘤细胞的生长和增殖.

Abstract：

Objective To investigate the functional role of △Np63, the main isoform of P63, in promoting cell proliferation and survival in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). Methods △Np63 overexpressing cell line was selected from several HNSCC cell lines. Specific △Np63 siRNAs and p63 siRNAs were individually transfected into FaDu cells for 48h and 72h which overexpressing △Np63. The expression levels of △Np63 mRNA and protein were analyzed by RT-PCR,Western blot and immunohistochemistry respectively.The cell proliferation was determined by MTT assay.The distribution of cell cycle was assessed by flow cytometry.The protein expression level of P21, P27 and P53 were detected by Western blot. Results △Np63 is highly expressed in FaDu cell line, especially located in the nucleus.The growth rate of FaDu cells transfected with △Np63-siRNA and p63-siRNA was significantly decreased(t=3.66,P＜0.01),and cell cycle mainly arrested in G1 phase. Further studies show that the down-requlation of △Np63 results in the overexpression of P53 and upregulation of CKIs , including P21 and P27 at protein levels. Conclusion △Np63 inhibit the expression of p21 and p27 to promote the proliferation of HNSCC cells , playing a role in maintenance of cell proliferation and survival.     

热休克蛋白90抑制剂17-AAG诱导K562细胞凋亡作用的研究

目的研究热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂17-AAG诱导人白血病细胞系K562细胞凋亡及其分子机制。方法用17-AAG处理K562细胞,用四氮唑盐还原法(MTT法)检测17-AAG对K562细胞增殖抑制的剂量-时间-效应关系,瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态学变化,Hoechst 33342荧光染色观察凋亡细胞核的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,Western blot检测相关蛋白分子的变化。结果17-AAG呈时间和剂量依赖性抑制K562细胞,5μmol／L 17-AAG作用24 h,K562细胞增殖抑制率接近50％,阻断细胞周期于G0／G1期。5μmol／L 17-AAG作用12 h G0／G1期细胞占47．22％;24 h占71．62％,并出现明显的凋亡峰。17-AAG可有效清除Hsp90底物蛋白,阻断Raf／Mek- Erk及PI3K／Akt信号通路。结论17-AAG通过抑制K562细胞中Hsp90的分子伴侣功能,清除其底物蛋白Bcr-Abl、Raf-1、Akt、Cdk4、XIAP、survivin等,导致细胞内与增殖和抗凋亡相关的Raf/Mek-Erk、PI3K／Akt信号通路被阻断,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

心肌肌钙蛋白I磷酸化及降解与肥厚型心肌病

目的：观察心肌肌钙蛋白I在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用。 方法：实验于2005-03／2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行。取4周龄BALB／c雌鼠12只，随机分为模型组6只，正常对照组6只，适应性饲养1周后模型组小鼠转染带有EGFP报告基因的CTnIArg146Trp突变基因。饲养至20周龄时二维超声心动图检测证实模型组小鼠室间隔肥厚，断颈处死两组小鼠后，称取小鼠心脏质量（湿），心尖部心肌组织光镜病理学检查，小鼠心肌组织进行Western Blotting检测重组蛋白、肌钙蛋白I的磷酸化及降解表达，GAPDH作为内参半定量。结果：12只小鼠进入结果分析。①模型组小鼠心脏明显增大，心脏质量（湿）／体质量比显著高于正常对照组（P〈0．01）；模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、间质血管增生、少量炎性细胞浸润；两组血清肌钙蛋白I水平均正常（P〉0．05）。②模型组小鼠心肌组织用抗EGFP单克隆抗体在帆55000，24000检测到突变CTnI—EGFP及其降解片断表达。③模型组在M55000，30000，28000分别检测到磷酸化突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达，正常对照组在Mr30000见磷酸化肌钙蛋白I表达，模型组内源性磷酸化肌钙蛋白I表达明显高于对照组（1．18&;#177;0．15，0．97&;#177;0．15,P〈0．05）。④去磷酸化抗肌钙蛋白I单克隆抗体在肛55000，28000，检测到去磷酸化突变肌钙蛋白I-EGFP、内源性肌钙蛋白I降解片断表达，正常对照组未见去磷酸化肌钙蛋白I表达；用针对不同位点的抗肌钙蛋白I单克隆抗体3E3，2I-14，8I-7，MF4分别在M55000，30000，28000检测到突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白I及其降解片断表达，正常对照组在帆30000，见肌钙蛋白I表达，未见降解片断。 结论：Adc CTnI Arg146Trp—EGFP突变基因在小鼠体内成功转染心肌组织并有明显表达及降解片断出现，小鼠心脏呈现明显室间隔肥厚；小鼠内源性肌钙蛋白-I磷酸化表达增强、降解与心肌肥厚的发生、发展及心肌功能的改变可能有关，但两者之间因果关系及确切机制还有待于进一步研究。     

心肌肌钙蛋白Ⅰ磷酸化及降解与肥厚型心肌病

目的观察心肌肌钙蛋白Ⅰ在肥厚型心肌病小鼠心肌组织中的磷酸化与降解作用.方法实验于2005-03/2006-01在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所及南京医科大学动物中心SPF级动物房进行.取4周龄BALB/c雌鼠12只,随机分为模型组6只,正常对照组6只,适应性饲养1周后模型组小鼠转染带有EGFP报告基因的CTnIArg146Trp突变基因.饲养至20周龄时二维超声心动图检测证实模型组小鼠室间隔肥厚,断颈处死两组小鼠后,称取小鼠心脏质量(湿),心尖部心肌组织光镜病理学检查,小鼠心肌组织进行Western Blotting检测重组蛋白、肌钙蛋白Ⅰ的磷酸化及降解表达,GAPDH作为内参半定量.结果12只小鼠进入结果分析.①模型组小鼠心脏明显增大,心脏质量(湿)/体质量比显著高于正常对照组(P＜0.01);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、间质血管增生、少量炎性细胞浸润;两组血清肌钙蛋白Ⅰ水平均正常(P＞0.05).②模型组小鼠心肌组织用抗EGFP单克隆抗体在Mr 55 000,24 000检测到突变CTnI-EGFP及其降解片断表达.③模型组在Mr55 000,30 000,28 000分别检测到磷酸化突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白Ⅰ及其降解片断表达,正常对照组在Mr30 000见磷酸化肌钙蛋白Ⅰ表达,模型组内源性磷酸化肌钙蛋白Ⅰ表达明显高于对照组(1.18±0.15,0.97±0.15,P＜0.05).④去磷酸化抗肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体在Mr55 000,28 000,检测到去磷酸化突变肌钙蛋白Ⅰ-EGFP、内源性肌钙蛋白Ⅰ降解片断表达,正常对照组未见去磷酸化肌钙蛋白Ⅰ表达;用针对不同位点的抗肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体3E3,2I-14,8I-7,MF4分别在Mr55 000,30 000,28 000检测到突变CTnI-EGFP、内源性肌钙蛋白Ⅰ及其降解片断表达,正常对照组在Mr 30 000,见肌钙蛋白Ⅰ表达,未见降解片断.结论Adc CTnI Arg146Trp-EGFP突变基因在小鼠体内成功转染心肌组织并有明显表达及降解片断出现,小鼠心脏呈现明显室间隔肥厚;小鼠内源性肌钙蛋白Ⅰ磷酸化表达增强、降解与心肌肥厚的发生、发展及心肌功能的改变可能有关,但两者之间因果关系及确切机制还有待于进一步研究.     

老龄cTnIR146W转基因小鼠心脏结构与功能的超声特征

目的 探讨老龄cTnIR146W转基因小鼠心脏结构与功能.方法 应用GE Vivid 7超声诊断仪,榆测老龄cTnIR146W小鼠心脏结构与功能,包括室间隔脬度(IVS)、射血分数(EF)、短轴缩短率(FS),并用绀织多普勒测量二尖瓣环收缩期峰值速度(S)等指标.结果 老龄cTnIR146W基因型阳性(A)组小鼠IVS为(1.010±0.011)mm ,显著高于基因型阳性(B)组小鼠的(0.911±0.007)mm(P＜0.01);A组小鼠EF和FS分别为(71.534±2.488)%和(35.289±1.918)%,均显并低于B组小鼠的(77.737+1.990)%和(40.501±1.697)%(P＜0.01);A组小鼠二尖瓣前叶、后叶瓣环收缩期峰值速度分别为(0.032±0.006)m/s和(0.031±0.010)m/s,均显著低于B纰小鼠的(0.037±0.005)m/s和(0.039±0.006)m/s(P＜0.05).结论 老龄cTnIR146W 基因型阳性小鼠室间隔心肌增厚,左室收缩功能减退.超声心动图及组织多普勒可以评价转基因小鼠心脏结构与左事收缩功能.