不同剂量静脉铁剂对透析患者氧化应激反应的影响

氧化和抗氧化的平衡是维持人体内环境稳定的必要因素。尿毒症时机体抗氧化消耗、有酶和无酶抗氧化能力均减弱,处于氧化应激状态。终末期肾病（ESRD）患者特别是维持性血液透析（MHD））患者铁的丢失多、摄入不足,促红细胞生成素的应用又使机体对铁的需求增加,上述原因共同导致了患者体内铁缺乏。静脉补铁能比口服补铁更加有效的改善MHD患者体内的铁储备,     

荧光蛋白标记的促红细胞生长素融合蛋白的设计和预测

目的：探讨pTRE顺式作用元件调控，EGFP标记hEPO(hEPO-EGFP)融合蛋白设计的合理性。方法：应用Gene Construction Kit2．5、www．expasy．com网站提供的分析方案，分析重组体的开放读框以及融合蛋白的柔性．并作蛋白质二级结构模拟。结果：重组体的转录受pTRE顺式作用元件调控，Linker所在部位柔性高，融合蛋白表达后，二级结构预测Linker不改变蛋白结构，完全符合作者设计EGFP标记hEPO融合蛋白的初衷。结论：重组蛋白设计合理，融合蛋白有很大可能保留了hEPO和EGFP的理化特性，为进一步的实践操作提供了可靠的理论基础。     

重组促红细胞生成素基因转导细胞治疗肾性贫血的调控研究

将促红细胞生成素 (EPO)的cDNA通过各种手段导入动物细胞 ,使EPO基因在体内得到长期、稳定的表达 ,持续生成内源性EPO ,从根本上解决EPO的来源 ,是治疗肾性贫血及其他贫血最佳的方法。EPO在体内含量甚微 ,必须保持一定的生理范围才能满足机体需要 ,如果产生过量 ,则对身体有害。因此 ,研究EPO表达水平的开、关调控 ,在EPO持续高效表达的同时 ,实现EPO表达的有效开关控制 ,是EPO治疗贫血的重要问题。     

用于基因治疗的大鼠骨骼肌原代细胞培养法及相关指标测定

目的　建立用于基因治疗的体外SD大鼠骨骼肌细胞快速培养方法和抗生素筛选浓度。方法　 10只小鼠分 3次采用组织块法和消化法培养骨骼肌细胞 ,进行Actin免疫组化鉴定。用含不同浓度G4 18和潮霉素B的培养液培养观察。结果　组织块法培养速度明显高于消化法 ,传代接种的细胞在 3～ 7d增殖达高峰。G4 18和潮霉素B的最小致死浓度分别为 80 0 μg/ml和 2 0 0 μg/ml。 结论　组织块培养法是骨骼肌细胞简易快捷的培养方法 ,可以在很短的时间里提供充足的细胞。     

四环素调控促红细胞生成素基因转导骨骼肌细胞治疗肾性贫血的研究

目的:克隆、构建、鉴定重组人促红细胞生成素(rhEPO)基因四环素调控真核表达载体;探讨四环素系统对rhEPO基因表达的调控.方法:以含rhEPO全长cDNA的CHO细胞为模板,通过RT-PCR方法扩增出rhEPO基因,将其克隆到真核表达载体pTRE2hyg的多克隆位点,构建成pTRE2hyyg-EPO,进行酶切及测序鉴定.将pTRE2hyg-EPO及Tet-On质粒转导入SD大鼠骨骼肌细胞,用RT-PCR、Western印迹实验和半固体细胞培养实验检测rhEPO基因在大鼠骨骼肌内的表达和蛋白的活性,并观察四环素系统对EPO表达的调控作用.结果:(1)成功构建了四环素调控真核表达质粒pTRE2hyg-EPO,经测序鉴定与所需EPO基因序列一致.(2)rhEPO基因可以在大鼠骨骼肌原代细胞中表达,并受四环素调控系统的控制.生成的EPO具有生物活性,可明显刺激骨髓红系细胞的生长.结论:在细胞水平四环素系统可控制转导的EPO基因的表达,并且生成有生物活性的EPO,达到基因治疗的要求.     

慢性肾功能衰竭患者外周血单核细胞向树突状细胞分化能力的研究

目的了解慢性肾功能衰竭患者外周血单核细胞向树突状细胞(DC)分化的能力.方法采用流式细胞仪检测细胞表面标记表达,混合淋巴细胞反应评价细胞的抗原递呈能力.结果慢性肾功能衰竭患者外周血单核细胞能向DC分化,分化而成的DC表达CD11c,CD40,CD80,CD83的阳性率显著低于正常人(P＜0.05),刺激淋巴细胞增殖的能力显著弱于正常人(P＜0.01).结论慢性肾功能衰竭患者外周血单核细胞向DC分化的能力减弱,分化而成的DC具有较弱的抗原递呈能力.     

慢性肾功能不全患者树突状细胞表型和功能的变化

目的　观察慢性肾功能不全 (CRF)患者树突状细胞 (DC)形态和功能的变化。方法　从 31例CRF患者和 2 5例健康人外周血中分离和培养DC ,观察DC的形态 ,用流式细胞仪检测DC表面标记CD1a ,CD4 0 ,CD80和CD83的表达 ,用MTT摄入法测定DC诱导混合性淋巴细胞反应 (MLR)的能力。结果　正常DC较CRF患者在形态上更为典型 ,不规则 ;CD1a ,CD4 0 ,CD80和CD83分子的表达水平较高 (P <0 0 5 ) ,诱导MLR的能力较强 (P <0 0 5 )。结论　CRF患者外周血DC处于不完全成熟状态 ,其免疫刺激能力较低。     

在线血容量监测的临床应用

在线血容量监测具有实时性、无创性、方便性等.它所提供的相关数据对判断透析患者容量负荷水平,干体重的设定、预防透析不良反应的发生有很好的参考价值,可常规用于透析过程中.由于不同患者血容量变化的规律及影响因素的不同,临床上需要对患者多次进行血容量监测才能发现不同个体的特点,以确定个体在不同情况下相对血容量的变化,从而个体化地制定相对血容量的临界值,以评估干体重及预防低血压等不良反应的发生.目前在相对血容量监测及可调控超滤的基础上研制了血容量控制生物反馈系统.该系统不能按照不同个体血容量的变化曲线进行控制,只能按照系统软件设定的固定曲线控制.此系统尚不能满足临床不同患者的需要.     

重组促红细胞生成素基因转导细胞治疗肾性贫血的调控研究

将促红细胞生成素(EPO)的cDNA通过各种手段导人动物细胞，使EPO基因在体内得到长期、稳定的表达，持续生成内源性EPO，从根本上解决EPO的来源，是治疗肾性贫血及其他贫血最佳的方法。EPO在体内含量甚微，必须保持一定的生理范围才能满足机体需要，如果产生过量，则对身体有害。因此，研究EPO表达水平的开、关调控，在EPO持续高效表达的同时，实现EPO表达的有效开关控制，是EPO治疗贫血的重要问题。