siRNA对骨肉瘤U2OS细胞株MDM2-mRNA表达的抑制作用

目的 研究载体介导的siRNA（small interfere RNA）技术对骨肉瘤细胞株U20S中MDM2-mRNA表达的抑制作用.方法 依据设计siRNA的原则,以MDM2为靶基因设计并合成有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆到载体PGCsilencerTM中构建重组体（PGCsilencerTM-MDM2 siRNA）.实验分转染重组质粒组,转染阴性对照质粒组和只加脂质体的空白组;RT-PCR法观察U20S细胞中MDM2-mRNA表达改变.结果 成功构建发卡样MDM2 siRNA真核表达载体（PGCsilencer TM-MDM2 siRNA）;PGCsilencer TM-MDM2 siRNA转染到U20S细胞后,MDM2-mRNA表达较空白组显著下降（P＜0.05）,转染阴性对照质粒组与空白组无显著差异（P＞0.05）.结论 成功构建PGCsilencer TM-MDM2 siRNA重组体,并能有效抑制U20S细胞中MDM2-mRNA表达.     

小干扰RNA抑制MDM2对HepG2细胞的影响及机制

目的探讨小干扰RNA对HepG2细胞泛素蛋白链接酶(MDM2)基因表达的干扰效应和增殖影响的分子机制。方法建立装载靶向MDM2基因小干扰RNA(siRNA)的表达载体;用脂质体法将此表达载体转染HepG2细胞株,以转染阴性对照质粒组作对照;采用RT-PCR检测MDM2,p53,Bcl2和p21基因的表达;MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,划痕实验检测细胞迁移能力的改变。结果转染siRNA MDM2后的HepG2细胞MDM2和Bcl2基因表达明显减低,而p53和p21基因表达被明显增强,与空白组比差异具有显著性。siRNA MDM2明显抑制了HepG2的增殖并诱导其凋亡,同时使细胞迁移能力明显下降。但转染阴性对照质粒组未出现基因的表达变化和增殖抑制及凋亡。结论 siRNA MDM2可明显抑制HepG2增殖诱导其凋亡,并减弱肿瘤细胞迁移力。可能与抑制MDM2,增强p53表达,从而影响细胞周期和凋亡相关的基因表达变化有关。     

非酒精性脂肪肝病与代谢综合征相关性

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)世界平均患病率约20%[1].上海一项抽样调查成人代谢综合征(MS)(WHO标准)发病率17.14%[2].美国临床内分泌医师协会已经把NAFLD列为MS成分之一,但世界卫生组织(WHO)和美国国家胆固醇教育计划成人治疗组第三次报告(NCEP-ATPⅢ)关于MS的诊断标准并未含有NAFLD.     

siRNA对骨肉瘤U20S细胞株MDM2-mRNA表达的抑制作用

目的 研究载体介导的siRNA(small interfere RNA)技术对骨肉瘤细胞株U20S中MDM2-mRNA表达的抑制作用.方法 依据设计siRNA的原则,以MDM2为靶基因设计并合成有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆到载体PGCsilencerTM中构建重组体(PGCsilencerTM-MDM2 siRNA).实验分转染重组质粒组,转染阴性对照质粒组和只加脂质体的空白组;RT-PCR法观察U20S细胞中MDM2-mRNA表达改变.结果 成功构建发卡样MDM2 siRNA真核表达载体(PGCsilencer TM-MDM2 siRNA);PGCsilencer TM-MDM2 siRNA转染到U20S细胞后,MDM2-mRNA表达较空白组显著下降(P＜0.05),转染阴性对照质粒组与空白组无显著差异(P＞0.05).结论 成功构建PGCsilencer TM-MDM2 siRNA重组体,并能有效抑制U20S细胞中MDM2-mRNA表达.     

siRNA对骨肉瘤细胞MDM2的表达及细胞增殖的抑制作用

目的: 研究siRNA对人骨肉瘤U20S细胞MDM2基因表达及肿瘤细胞增殖的抑制作用。 方法: 构建可表达针对MDM2的siRNA质粒(PGCsilencer^TM-MDM2-siRNA)。转染siRNA MDM2(简称siMDM2),阴性对照质粒到U20S,并设只加转染试剂作空白对照组,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting法检测siMDM2对MDM2基因和蛋白表达的抑制作用,并用MTT法检测siMDM2对细胞增殖的抑制作用。 结果: RT-PCR结果显示,转染siMDM2-1和 -2组MDM2的mRNA表达量分别下调到空白对照组的32.61%和39.06%;Western blotting结果显示,转染siMDM2-1和 -2组蛋白表达量下调到空白对照组的35.76%和42.20%;转染阴性对照质粒的MDM2基因和蛋白与转染试剂组比较差异均无显著性(P>0.05)。MTT结果显示,转染siMDM2后细胞生长受到明显抑制,与转染试剂组比较差异具有显著性(P<0.05),阴性对照组抑制率与转染试剂组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：siRNA可以有效地抑制U20S细胞中MDM2的表达,并抑制细胞增殖。     

siRNA抑制人胶质瘤细胞MDM2的表达及细胞增殖

目的研究siRNA对人胶质瘤U251细胞MDM2基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外合成2对针对MDM2基因的siRNA,经脂质体转染导入U251细胞;用半定量RT-PCR检测siRNA MDM2对MDM2基因表达的抑制作用;并用MTT法检测siRNA MDM2对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染siRNA MDM2的细胞的MDM2基因表达分别下调到对照组的31.61%和40.18%;转染阴性对照质粒的MDM2基因没有明显改变。MTT结果表明转染siRNA MDM2后细胞生长受到抑制,与对照组比差异具有显著性（P〈0.5）;同时细胞发生凋亡和细胞周期阻滞,转染siRNA MDM2-1,2的凋亡率分别为49.9%和40.0%,转染阴性对照质粒和对照组未检测出明显的增殖抑制和凋亡改变。结论 siRNA MDM2可以有效抑制U251细胞株中MDM2的表达,并抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

大豆异黄酮的抗肿瘤研究

利用国家大豆深加工技术研究推广中心试验基地生产的高纯度大豆异黄酮[纯度≥90%、染料木素(G)含量≥80%,D:G≈1:8],进行抗肿瘤实验,取得了明显效果.高纯度大豆异黄酮对小鼠肝癌、乳腺癌有明显的抑瘤作用.体内抑瘤实验,抑瘤率分别为54.4%和61.3%,P＜0.01.高纯度异黄酮(＞90%)的功效已不仅局限于保健品领域,作为新药开发将有更为广阔的前景.观察体内抑瘤试验方法与结果,报道如下.     

siRNA抑制人肝癌细胞MDM2表达及细胞增殖的研究

目的探讨siRNA对人肝癌HepG2细胞MDM2基因表达的抑制作用及对增殖的影响。方法体外合成针对MDM2基因的siRNA质粒,转染HepG2细胞株;应用RT-PCR和western blot方法检测siRNA对MDM2和P53基因和蛋白表达的影响,并用MTT法检测siRNA对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期。结果和空白组比转染siMDM2-1,2的HepG2细胞的MDM2基因和蛋白表达减低,而P53基因和蛋白表达增加。阴性对照质粒组的基因表达未见明显改变。转染siRNA MDM2后细胞生长受到抑制,转染siMDM2-1,2和阴性对照质粒后的抑制率分别是46.3%、56.1%和3%。和对照组比较,转染siMDM2-1,2的hepG2细胞的细胞周期发生明显改变,而转染对照质粒的hepG细胞周期未发生明显变化。结论 siRNA MDM2可以有效抑制HepG2细胞株中MDM2的表达,促进P53的表达,同时可以使细胞周期发生变化,这可能是其抑制肿瘤细胞增殖的主要机制之一。     

人参二醇皂甙抑制人乳腺癌细胞增殖的实验研究

目的 观察人参二醇组皂苷(PDS)对人乳腺癌细胞MCF7的抑制作用.方法 观察PDS作用后MCF7细胞的形态学改变;利用MTT法检测PDS作用后MCF7细胞的生长抑制率.结果 PDS作用后的MCF7细胞生长状态变差,细胞变圆漂浮在培养液中;MTT结果显示:细胞生长明显受到抑制,72 h生长抑制率可达到80.6%;且生长抑制率呈时间依赖性和剂量依赖性.结论 PDS对人乳腺癌细胞MCF7有抑制作用.     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎发生病毒变异的临床研究

目的观察慢性乙型肝炎患者应用拉米夫定治疗前与治疗24个月期间的乙型肝炎病毒(HBV)变异情况。方法 101例接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者,在开始治疗前和治疗第3、6、12个月以及24个月时采集患者外周血,提取HBVDNA,进行HBVDNA测定和实时荧光PCR法分析检测基因序列变异。结果使用拉米夫定治疗前,发生YVDD变异1例,发生YIDD变异1例。应用拉米夫定治疗24个月期间发生变异共39例,变异率39.39%。其中,治疗第3个月,发生YVDD变异1例,YIDD变异1例;治疗第6月,发生YVDD变异3例,YIDD变异2例;治疗12个月时,发生YVDD变异6例,YIDD变异5例;在第24个月时发生YVDD变异11例,YIDD变异10例。随治疗时间的延长,YMDD变异率升高(P<0.05)。用药前HBVDNA定量>107copies/ml的慢性乙型肝炎患者的YMDD变异率明显高于HBVDNA定量<107copies/ml的慢性乙型肝炎患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 YMDD变异的发生随治疗时间的延长而增加。血清病毒载量可作为应用拉米夫定治疗产生YMDD变异的早期预测指标。