以CDNB为探针测定大鼠肝微粒体中GST活性并优化反应体系

目的以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为探针,优化大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶(GST)催化反应的条件,为准确测定GST活性提供依据。方法采用Welch Materials Ultimate TM XB C18反相柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(7∶3),流速0.8 mL.min-1,检测波长238 nm。首先于0.05 mg.mL-1蛋白浓度下,孵育10 min,检测CDNB能否被GST催化发生反应,然后分别在CDNB及CDNB+GSH两种反应条件下,比较不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度的反应差异,选出合理反应条件。结果 CDNB在选定色谱条件下实现了快速分离,且无内源性干扰。CDNB在GST催化下发生了反应;在不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度下,两种反应条件下CDNB反应存在明显差异(P<0.05):CDNB及GSH作为起始条件时反应较少,此外,CDNB反应量与蛋白浓度、孵育时间分别呈线性关系,是优化反应条件的重要依据。结论采用CDNB测定GST活性时,选择合适的CDNB及GSH反应条件能准确地测定GST活性,可用于GST活性测定及相关动力学分析。     

没食子酸在大鼠体内对1,2-二氯-4-硝基苯代谢的影响

目的 考察没食子酸在大鼠体内对1,2-二氯-4-硝基苯(DCNB)代谢的影响.方法 将大鼠随机分为空白组(生理盐水)和没食子酸组(20 mg·kg-1),连续给药14 d,再给予DCNB,不同时间点于眼眶静脉取血,用GC法检测血浆中DCNB的浓度,绘制药时曲线,用DAS3.2.1计算药动学参数.结果 DCNB的线性范围为0.025 ～ 10.0μmol·L-1,最低检测限为25nmol·L-1,日内、日间RSD均＜10％;5 d内于室温下放置较稳定,提取回收率为85％～90％;没食子酸组的AUC0-∞明显低于空白组的,而Cl/F明显高于空白组的,表明没食子酸在大鼠体内能诱导谷胱甘肽硫转移酶(GST)的活性.结论 没食子酸在大鼠体内能明显诱导GST活性,增强DCNB的代谢清除,从代谢角度解释了没食子酸的解毒机制.     

某三甲医院2万张儿科门诊处方分析

目的了解儿科门诊处方用药情况,促进儿科合理用药。方法利用逸曜系统提取某院门诊儿科2012—10—01—2012—12—31的所有处方,从处方金额、抗菌药物使用和注射剂使用的处方数等进行统计分析,对不规范处方和不合理用药情况进行点评。结果某院2012年第4季度儿科门诊处方共计22116张,平均每张处方金额为83．58元,抗菌药物使用率为51．66％,注射剂使用率为13．68％。结论儿科门诊用药存在不合理现象,主要表现为抗菌药物使用率偏高,重复用药等。应加强儿科合理用药的规范管理,促进儿科合理用药。     

HPLC-UV法测定大鼠脑组织中5-羟色胺含量

目的建立大鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)含量的HPLC-UV测定方法。方法采用SHIMADZU VP-ODS C18反相柱(250×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.01mol/L的醋酸钾缓冲液(10:90,V/V,用0.2mol/L柠檬酸调pH至4.00);流速:1.0ml/min;柱温:25℃;检测波长:275nm。结果 5-羟色胺在0.1～20μg/ml范围内,回归方程为A=46008.89C+1886.58,相关系数r=0.9999,最低检测限为40ng/ml,最低定量限为100ng/ml。加样回收率为89.62%～101.60%,日内、日间精密度均小于3%。结论该方法准确可靠,简单易行,可重复性强,适用于多样本5-HT的快速测定。     

HPLC-ECD法测定小鼠脑组织内去甲肾上腺素的含量

目的:建立小鼠脑内去甲肾上腺素含量的高效液相色谱-电化学（HPLC-ECD）测定方法。方法:小鼠脑组织采用70%高氯酸沉淀蛋白后,以HPLC-ECD法进行分析。使用汉邦lichrospher C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为醋酸钾缓冲液-甲醇（95:5,pH 4.5）,流速为1.0 ml·min^-1,温度为25℃;电化学检测器电压为0.6 V,电流为100 nA,频率为0.05 Hz。结果:去甲肾上腺素在0.1～25μmol·L^-1范围内线性关系良好,日内、日间RSD分别小于7.81%和3.61%,回收率为75.05%,测得小鼠脑内去甲肾上腺素含量为（8.94±0.71）μg·g^-1。结论:该方法快速、准确,适用于小鼠脑内去甲肾上腺素的测定     

HPLC-RF测定小鼠肝微粒体中CYP2A5的酶活性

目的 以香豆素为探针底物建立测定小鼠肝微粒体中CYP2A5酶活性的方法.方法 用Waters Symmetry C18柱;流动相为0.1％醋酸-乙腈=70∶ 30;流速为1.0 mL·min-1,柱温30℃,Ex=340 nm,Em =458 nm.香豆素与小鼠肝微粒体在37℃孵育20 min,加入含内标的冰乙腈终止,4℃、12000 r·min-1离心15 min,取上清液,用HPLC测定其代谢产物7-羟基香豆素的含量,以GraphPad Prism 5.0作图计算酶动力学参数.结果 7-羟基香豆素与内标两者分离良好.7-羟基香豆素的检测限为2nmol · L-1(S/N≥3),线性范围为8～ 800 nmol·L-.日内日间精密度RSD小于5％,回收率为91.3％～101.4％.香豆素羟化反应的Km为2.15 μmol·L-1;Vmax为9.74 pmol·(min·mg protein)-1.结论 该方法稳定可靠,灵敏度高,适于体外CYP2A5酶活性的测定.     

青海产小叶黑柴胡中皂苷类成分的含量分析

目的测定青海产小叶黑柴胡中总皂苷、柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量,为其质量评价和开发利用提供参考。方法采用分光光度法测定小叶黑柴胡中总皂苷的含量;采用高效液相色谱法测定小叶黑柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量。结果小叶黑柴胡中总皂苷含量>2.77%,柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量分别高于0.54%和0.14%,其中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量远高于中国药典中柴胡含量项下的标准。结论本方法简便快速,结果准确、稳定,适用于小叶黑柴胡中皂苷类成分的含量测定。青海产小叶黑柴胡具有较高的药用价值。     

基于设计空间法优化北刘寄奴-骨碎补的提取工艺研究

目的 采用网络药理学和设计空间法优化北刘寄奴-骨碎补的提取工艺,确定其提取工艺参数范围,提高原药材利用率,减少能源损耗,以达到减少碳排放量和保护环境的目的。方法 利用网络药理学方法筛选出活性成分,同时结合《中国药典》2020年版一部相关北刘寄奴、骨碎补项下确定柚皮苷、木犀草素为指标性成分,采用Minitab 17软件进行Plackett-Burman实验设计,初步确定提取次数、提取时间以及加溶媒倍数为关键工艺参数(critical process parameters,CPP),通过软件Design-Expert 10进行Box-Behnken 3因素3水平实验设计,建立关键质量属性(critical quality attribute,CQA)和CPP间的数学模型,最后通过Monte Carlo法计算获得基于概率的设计空间,并对点内、点外进行验证。结果 确定最佳提取工艺为乙醇体积分数45%,提取次数3次,每次提取时间2～3 h,加溶媒倍数为11～15倍。结论 运用设计空间法优化北刘寄奴-骨碎补提取工艺所得到的理论值与预测值结果接近,表明该法稳定可靠,可避免常规设计方法潜在的过度提取弊...     

HPLC测定大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶活性及体外动力学研究

 目的 建立一种测定1-氯-2,4-二硝基苯（CDNB）高效液相色谱分析方法,并以1-氯-2,4-二硝基苯为探针测定大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶（GST）活性并进行体外动力学分析。方法 色谱条件：Welch Materials Ultimate^TM XB C₁₈反相柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相：乙腈-水（7∶3),流速0.8 mL·min^-1,柱温30 ℃,检测波长238 nm。实验方法：1-氯-2,4-二硝基苯与大鼠肝微粒体在37 ℃温孵7 min后,冰乙腈终止反应。反应液离心取上清液过滤后进行HPLC分析,通过Sigma Plot 软件作图求算V_max、K_m及代谢清除率（CL_int）值。结果 1-氯-2,4-二硝基苯的R_t=6.0 min,峰形良好,且无内源性干扰。最低检测限为1.0 μmol·L^-1,线性范围：2.5～100.0 μmol·L^-1。日内、日间精密度均小于10%。5 d内于室温及-20 ℃下较稳定。方法回收率为99.38%～108%。动力学分析表明,不同浓度1-氯-2,4-二硝基苯在0.02 mg·mL^-1蛋白浓度下孵育7 min,测得动力学参数：V_max为85.45 nmol·min^-1·（mg protein）^-1;K_m为15.09 μmol·L^-1; CL_lint为5.66 mL·min^-1·（mg protein）^-1。结论 该方法稳定可靠,灵敏度高,能准确快速测定谷胱甘肽硫转移酶活性,可用于其体外动力学研究。