间充质干细胞成骨和成脂分化调控机制研究

间充质干细胞（MSCs）是人体内参与免疫平衡、维持组织器官的稳态和功能以及组织损伤修复的一类重要成体干细胞。MSCs具有自我更新能力和多向分化潜能,国际干细胞协会将MSCs向脂肪、成骨等细胞分化的能力作为其重要的检测标准。作为骨细胞和脂肪细胞的共同来源,MSCs在成骨和成脂分化之间相互协调和相互竞争,并在多种调控因素作用下保持着微妙的平衡。对MSCs成骨、成脂分化的信号通路、调控因素进行分析,并对其分化诱导方法以及鉴定方法进行总结,以期为MSCs基础研究及临床应用提供参考依据。     

地塞米松提高TRAIL基因修饰的脐带间充质干细胞对急性B淋巴细胞白血病细胞的杀伤作用及机制研究

目的 构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因修饰的脐带间充质干细胞（TRAIL-MSCs）,并检测其联合地塞米松（DEX）对急性B淋巴细胞白血病（Nalm-6）细胞的影响。方法 通过慢病毒载体将SPD-TRAIL基因转染UC-MSCs构建TRAIL-MSCs,使其能够表达十二聚体TRAIL蛋白（dTRAIL）。通过CCK-8法、流式细胞术、显微镜光镜下观察细胞形态及密度检测UC-MSCs、TRAIL-MSCs、DEX（25 μmol/L）、DEX（25 μmol/L）＋UC-MSCs组和DEX（25 μmol/L）＋TRAIL-MSCs对Nalm-6细胞增殖、凋亡的影响;通过实时荧光定量PCR及Western blotting法检测各组Nalm-6细胞表面DR4、DR5 mRNA和蛋白表达。结果 成功构建了能够稳定表达dTRAIL蛋白的TRAIL-MSCs工作库细胞。与对照组比较,UC-MSCs、TRAIL-MSCs显著抑制Nalm-6细胞增殖（P<0.01）,但抑制率均在30%以下,DEX抑制率约为43%,而DEX联合TRAIL-MSCs抑制率达85%,与TRAIL-MSCs和DEX组比较差异显著（P<0.01）。显微镜下观察结果显示,不同处理方式对肿瘤细胞Nalm-6均有一定的杀伤作用,其中以DEX与TRAIL-MSCs联合用药组的杀伤作用最明显。TRAIL-MSCs可以促进Nalm-6细胞凋亡,凋亡率达10%,DEX组凋亡率达到15%,与对照组比较有显著差异（P<0.05、0.01）;而DEX＋TRAIL-MSCs组凋亡率达36%,与DEX和TRAIL-MSCs组比较有显著差异（P<0.01）。与对照组比较,TRAIL-MSCs组DR4、DR5 mRNA表达量显著降低（P<0.01）;DEX可以促进DR4、DR5 mRNA表达,与对照组比较差异显著（P<0.01）;DEX＋TRAIL-MSCs组较DEX组DR4、DR5 mRNA表达均显著降低（P<0.01）;各组蛋白检测结果与mRNA结果基本一致。结论 DEX可以显著提高TRAIL-MSCs对Nalm-6细胞的杀伤作用,或将成为一种颇具潜力的血液肿瘤治疗新手段;其机制与DEX显著提高DR4、DR5表达,增强Nalm-6细胞对TRAIL蛋白的敏感性相关。     

基因修饰间充质干细胞治疗肿瘤研究进展

间充质干细胞（MSCs）是来源于中胚层的成体干细胞,体内分布广泛,可从骨髓、脂肪、牙髓、脐带/胎盘等组织中分离获取,具有高度的可增殖和分化潜能,较低的免疫原性,同时具有向炎症损伤部位微环境的趋向性,在疾病治疗方面可作为基因药物的载体实现精准治疗。癌症被认为是永远无法愈合的伤口,其组织微环境在损伤与修复中呈无休止的动态变化,MSCs在其中扮演了重要角色。利用MSCs具有的向肿瘤组织中归巢及定位的特点,对其进行抗肿瘤药物的基因工程改造可能在癌症的治疗上是一种新的策略。概述MSCs在癌症发生发展中的作用以及基因修饰MSCs治疗癌症的研究进展,旨在为临床使用基因修饰MSCs治疗癌症提供策略和见解。     

“心脏记忆”现象与临床

“心脏记忆”现象是指在一段时间的激动顺序改变后恢复窦性节律时所出现的持续性T被改变。有些学者称之为7”波记忆EI］历史回顾：自30年代以来人们在心室起搏、定性心动过速、间断左束支传导阻滞,室性早持及党性期前刺激。WPW中均发现“心脏记忆”现象,在早期人们认为心肌缺血,局部组织损伤及心旺神经结构和功能的改变是此现象发生的原理。近年来随着电生理学的发展,这种原理已被否定,Engdetal［’］在检查间断性左束立传导阻滞的患者时发现了T波的改变,而这些患者冠状动脉造影均为正常,也没有发现其他冠状动脉疾患的证据,因而…     

缝隙连接蛋白α7促进骨髓间充质干细胞转化为心脏起搏样细胞的实验研究

目的 探讨缝隙连接蛋白α7(GJA7)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs),经与乳鼠心肌细胞(neonatal rat ventricular myocytes,NRVMs)共培养,诱导心脏起搏样细胞相关基因表达的变化.方法 构建携带GJA7基因的慢病毒载体,转染rMSCs,经嘌呤霉素加压筛选纯化后,与NRVMs共培养.分为RFP(red fluorescent protein,红色荧光蛋白)-rMSCs组(A组)、GJA7-RFP-rMSCs组(B组)、RFP-rMSCs+ NRVMs组(C组)、GJA7-RFP-rMSCs+NRVMs组(D组)4组.荧光定量PCR法检测心脏起搏细胞相关基因(HCN4、GJA7、Tbx3、Tbxl8)及工作心肌细胞相关基因(Cx43、Nkx2.5)的表达.全细胞膜片钳检测各组细胞起搏电流(If).结果 携带GJA7基因的慢病毒载体成功转染rMSCs,经嘌呤霉素加压筛选,转染效率高达95％以上.RT-qPCR结果显示,D组HCN4、GJA7、Tbx3、Tbxl8表达较其他各组明显增高(P＜0.05);C组Nkx2.5、Cx43则较其他组表达明显升高(P＜0.05).全细胞膜片钳检测结果显示,仅D组记录到超极化激活的内向电流,该电流具有明显时间电压依赖性,且可被Cscl(4 mmol/L)阻断,符合If电流特性.结论 经GJA7基因修饰并通过与心肌细胞共培养,使rMSCs在体外诱导出具有If电流的心脏起搏样细胞.     

“心脏记忆”现象1例报告

患者,男,39岁,主因阵发性心慌伴胸骨后疼痛2月余,复发半小时不缓解,于1995年9月26日急诊收入院。患者于2个月前无明显诱因突感心慌、头晕、黑朦、并伴有胸骨后剧痛向左肩放射,在外院做心电图示“室性心动过速”并给予心律平90mg静脉注射后“室性心动过速”终止,患者出现意识模糊,血压下降(具体不详),     

医学生网络成瘾及相关因素分析

目的了解医学生的网络使用情况;分析与网络成瘾相关的因素,为大学生网络成瘾的现实干预提供依据。方法以某高校医学院的本科学生为调查对象,用参照Young网络成瘾量表自行制定的问卷进行现况调查。结果12.3%的学生表现出过度的网络使用,男生(15.8%)明显高于女生(8.6%);来自农村的学生(16.4%)明显高于城镇的学生(9.7%)。不当的网络使用已经对学生的学习和生活产生了一定的不良影响,如影响学习、睡眠、与周围人的正常交流等。过度的网络使用与一些负向的情绪、态度以及行为有关,如有抑郁情绪,浏览色情网站,沉迷于网络游戏,对生活不自信,每天长时间上网等。结论医学生中也存在较高比例的网络使用过度,不当的网络使用对学生的学习和生活造成了不良的影响,而且影响是多方面的。因此,针对相关因素积极采取有效的预防和控制措施迫在眉睫。     

地塞米松提高TRAIL基因修饰脐带间充质干细胞对急性T淋巴细胞白血病细胞杀伤作用及机制研究

目的 构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因修饰的脐带间充质干细胞（TRAIL-MSCs），并检测其联合地塞米松（DEX）对急性T淋巴细胞白血病细胞系（Jurkat）的影响。方法 通过慢病毒载体将SPD-TRAIL基因转染脐带间充质干细胞（UC-MSCs）构建TRAIL-MSCs，使其能够表达十二聚体TRAIL蛋白（dTRAIL）。通过CCK-8法、流式细胞术检测UC-MSCs、TRAIL-MSCs、DEX （200 μmol/L）、DEX （200 μmol/L） ＋UC-MSCs和DEX （200 μmol/L） ＋TRAIL-MSCs对Jurkat细胞增殖、凋亡的影响；显微镜光镜下观察细胞形态及密度；通过实时荧光定量PCR及Westernblotting法检测各组Jurkat细胞表面死亡受体DR4、DR5 mRNA和蛋白表达水平。结果 CCK-8结果显示，各处理组均可以抑制Jurkat细胞的增殖，与对照组比较有显著性差异（P<0.01）；同时，DEX可以提高TRAIL-MSCs （抑制率约20%）对Jurkat细胞的增殖抑制作用，抑制率提高至60%，与TRAIL-MSCs组比较差异显著（P<0.01）。显微镜观察结果发现，DEX与TRAILMSCs联合组对肿瘤细胞Jurkat的杀伤作用最明显；流式细胞术结果显示，TRAIL-MSCs对Jurkat细胞有促进凋亡的作用，凋亡率达10%，单独使用DEX后，凋亡率约20%，与对照组比较差异显著（P<0.01）； DEX联合TRAIL-MSCs作用于Jurkat细胞48 h后，细胞凋亡率为38%，较TRAIL-MSCs组显著提高（P<0.01）。TRAIL-MSCs组DR4、DR5的mRNA、蛋白水平较对照组显著降低（P<0.01），DEX组DR4、DR5的mRNA、蛋白水平较对照组显著升高（P<0.01），DEX与TRAIL-MSCs联合作用后，DR4、DR5的mRNA、蛋白水平较DEX组显著降低（P<0.01）。结论 DEX可以提高肿瘤细胞Jurkat对TRAILMSCs的敏感性，增强TRAIL-MSCs对肿瘤细胞的杀伤作用，可能与提高DR4、DR5表达有关。     

高盐对小鼠白色脂肪棕色化的影响及其中枢调控机制研究

目的 研究高盐摄入对小鼠白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT)棕色化的影响,探讨其可能的中枢调控机制.方法 采用随机数字表法将20只8周龄的C57BL/6J小鼠分为4组(n=5):短期高盐组与短期对照组(饲养24 h后处死,免疫组化法检测小鼠大脑c-Fos表达情况),长期高盐组与长期对照组(连续饲养8周,每周对体质量、体温、饮水、进食进行监测).对照组正常饮水,高盐组给予含2％氯化钠的盐水.长期组实验结束后收集血清检测血脂水平.收集性腺脂肪和脑标本,用荧光定量PCR法检测性腺脂肪组织中解耦联蛋白-1(uncoupling protein-1,UCP-1)等棕色化相关调控基因的改变以及下丘脑室旁核脑源性生长因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的mRNA表达.结果 短期高盐刺激后,小鼠下丘脑室旁核c-Fos表达高盐组(112.67±11.24)较对照组(30.67±5.51)明显增加(P＜0.01).给予小鼠8周的高盐刺激后,小鼠血中甘油三酯[(0.75 ±0.19) mmol/L vs(1.07±0.08)mmol/L,P＜0.05]和游离脂肪酸含量下降[(0.64 ±0.14) mmol/L vs(0.92 ±0.15)mmol/L,P＜0.05],单侧性腺脂肪质量明显减轻[(0.11 ±0.01) gvs(0.15±0.01)g,P＜0.0l].荧光定量PCR法检测发现高盐组WAT棕色化标志基因UCP-1含量(4.62±0.94)较对照组(1.00 ±0.16)明显增加(P＜0.01);下丘脑室旁核BDNF高盐组mRNA表达(3.14±0.31)较对照组(1.00 ±0.12)明显增加(P＜0.01).结论 长期高盐可诱导小鼠WAT棕色化,而下丘脑室旁核BDNF参与了其中的中枢调控过程.