加巴喷丁药理学及其在神经痛治疗方面的研究

加巴喷丁（1-氨甲基环己烷乙酸）是一种新的抗癫痫药物,它首先作为γ-氨基丁酸（GABA）类似物用于治疗痉挛,后证实具有强大的抗癫痫效应.加巴喷丁开始只用于不完全性癫痫的治疗,但不久证实其在慢性疼痛综合征尤其是神经病理疼痛方面具有广阔的应用前景.本文对加巴喷丁药理学特性及其在神经性疼痛治疗方面的应用做一综述.     

中度低温体外循环后大鼠海马bcl-2和bax的表达与神经元凋亡

背景海马损伤被广泛认为与神经认知功能障碍有关,大鼠体外循环模型的建立使关于体外循环相关的海马损伤的研究得以进行.目的旨在研究中度低温、血液稀释体外循环对大鼠海马bcl-2和bax基因表达及神经元凋亡的影响.设计以实验动物为研究对象,完全随机分组设计,探索性研究.单位一所大学医院麻醉科.材料实验选用30只雄性SD大鼠,随机将大鼠分为体外循环组和假体外循环组,每组各15只.方法体外循环组大鼠经历60 min中度低温非搏动性体外循环通过使用蠕动泵和膜式氧合器,体外循环预充用20 mL11晶胶液;另外15只假体外循环组大鼠除不进行体外循环外其他操作与体外循环组完全相同.每组中6只大鼠在手术后1 h断头取海马,匀浆,采用逆转录聚链酶反应方法测定bcl-2和bax mRNA表达,表达强度以bcl-2或bax聚合酶链反应产物密度与看家基因β-actin比值来表示.每组中6只在手术后6 h处死,采用免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达,脱氧核糖核酸末端转移酶介导缺口末端标记法染色法测定神经元凋亡,蛋白表达强度以阳性面积占整个测量面积百分比表示.每组中其余3只在手术后6 h采用电子显微镜观察海马神经元超微结构变化.主要观察指标①两组大鼠海马bcl-2和bax基因表达、蛋白Bcl-2和Bax表达.②两组大鼠海马脱氧核糖核酸末端转移酶介导缺口末端标记法法神经元凋亡以及神经元电镜超微结构改变.结果手术后1 h,体外循环组大鼠海马bcl-2和bax mRNA表达,bax与bcl-2 mRNA表达比值明显高于假体外循环组,差异有显著性意义(P＜0.05).手术后6 h,体外循环组大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax蛋白表达明显高于假体外循环组,差异有显著性意义(P＜0.05).TUNEL染色显示,术后6 h,体外循环组海马CA1区神经元凋亡(染色阳性面积占整个测量面积的百分比)明显高于假体外循环组,差异有显著性意义(P＜0.05).电子显微镜超微结构显示,体外循环后6 h,体外循环组海马神经元超微结构出现明显异常,如部分线粒体中度或重度肿胀、空泡变性、嵴减少或消失.一些神经元出现典型的凋亡早期形态学变化,如神经元固缩、核不规则有切迹、染色体浓缩及核仁边集等.结论中度低温、血液稀释体外循环可导致大鼠海马bax和bcl-2基因表达及神经元凋亡,这可能部分解释体外循环后神经认知功能障碍的机制.     

硬膜外腔植入髓核对大鼠脊髓背根神经节SP和CGRP表达的影响

目的:观察硬膜外腔植入异体髓核对大鼠L6-S1脊髓背根神经节细胞SP和CGRP表达的影响,以期为椎间盘源性疼痛发病机制提供细胞生物学基础.方法:雄性SD大鼠(体重260～280g)随机分为四组:脂肪+生理盐水组(FS组)、脂肪+胶原酶组(FE组)、髓核+生理盐水组(NS组)、髓核+胶原酶组(NE组),每组n=6.观察指标:(1)痛阈测定:在手术前、术后第7天及术后第15天分别测定鼠尾对伤害性机械刺激的反应.(2)SP和CGRP表达:术后第15天取L6-S1背根神经节,采用免疫组织化学染色方法观察髓核对背根神经节细胞肽类神经递质SP和CGRP表达的影响.结果:(1)痛阈变化:NS组在术后第7天和第15天对机械刺激表现为痛觉过敏(P＜0.05),而其他组大鼠术后痛阈与术前相比没有显著差异(P＞0.05);术后第7天和第15天NS组与其他组组间比较痛阈显著性降低(P＜0.05).(2)SP和CGRP表达:术后15天FE组大鼠与FS组相比,背根神经节细胞SP和CGRP表达没有显著性差异(P＞ 0.05); NS组与FS组相比背根神经节细胞SP和CGRP表达显著增加(P＜ 0.05);NE组与NS组相比背根神经节细胞SP和CGRP表达显著降低(P＜0.05),接近于FS组水平(P＞0.05).结论:硬膜外腔植入异体髓核可引起背根神经节细胞SP和CGRP表达增加,这可能是导致大鼠出现痛觉超敏原因之一.     

中度低温体外循环对大鼠海马c-fos,bcl-2及bax mRNA表达的影响

目的:观察中度低温体外循环(CPB)对大鼠海马即刻基因c-fos、凋亡相关基因bcl-2和baxmRNA表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为CPB组(n=6)及假手术对照组(Sham组,n=6)。所有动物在咪唑安定、芬太尼麻醉后经口插管控制呼吸,置入颈静脉流出管和尾动脉输入管,肝素抗凝(500U/kg)。CPB组采用中度低温CPB(26℃—28℃),经尾动脉灌注、颈静脉右心房-腔静脉引流,灌流量160mL·kg-1·min-1,总转流时间2h,Sham组除不经历CPB外,其余操作同CPB组相同。实验中进行动脉压、ECG及动脉血气监测。术后1h处死动物,立即断头取脑分离海马组织,放入-70℃液氮罐保存。基因mRNA检测采用逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)方法。结果:海马c-fos、bcl-2和baxmRNA表达CPB组显著高于Sham组;bax与bcl-2mRNA表达比值CPB组显著高于Sham组。结论:中度低温体外循环可引起海马即刻基因c-fos、凋亡相关基因bcl-2和baxmRNA的表达增加。     

硬膜外腔植入异体髓核组织对大鼠痛阈的影响

目的:观察硬膜外腔注入异体髓核组织对大鼠痛阈的影响,以期为椎间盘源性疼痛提供理论依据。方法:实验于2005-06/08在首都医科大学宣武医院动物实验中心完成。选择SD雄性大鼠27只,随机分为3组,假手术组、脂肪组和髓核组,每组6只。另外9只雄性SD大鼠用来提供异体脂肪和髓核。假手术组硬膜外腔无植入腹膜外脂肪,脂肪组植入异体大鼠腹膜外脂肪(约10mg),髓核组硬膜外腔植入尾椎髓核(约3.0～4.0mg)。在术前、术后3,7,15,30d分别测定鼠尾对经皮电刺激(观察引起大鼠甩尾时的电流大小,即电刺激甩尾阈值)、温度刺激(观察自浸入至出现甩尾的间期,即温度刺激甩尾潜伏期)及机械刺激(观察引起甩尾时的砝码重量总和,即机械刺激甩尾阈值)的反应。结果:纳入动物18只,均进入结果分析。术后假手术组和脂肪组大鼠对经皮电刺激、温度刺激及机械刺激的痛阈与术前比较差异无显著性(P>0.05);而髓核组在硬膜外腔植入异体髓核后对经皮电刺激[以术后15d为例,假手术组、脂肪组、髓核组电刺激甩尾阈值变化百分比分别为1.08%,4.74%,-53.42%,P<0.05]、机械刺激[以术后15d为例,假手术组、脂肪组、髓核组机械刺激甩尾阈值变化百分比分别为2.10%,-1.21%,-43.77%,P<0.05]和温度刺激[以术后15d为例,假手术组、脂肪组、髓核组温度刺激甩尾阈值变化百分比分别为-4.12%,1.07%,-16.43%,P<0.05]均表现为痛觉过敏。结论:大鼠硬膜外腔注入异体髓核组织可造成大鼠痛觉过敏,这可能是椎间盘突出引起根性神经痛的原因之一。     

尼莫地平和丹参对大鼠心肺转流术后海马c-fos和bcl-2及bax mRNA表达影响的比较

目的:探讨钙离子阻滞剂联合中药丹参对大鼠心肺转流术(CPB)脑损伤的保护效应及其机制.方法:雄性SD大鼠随机分为CPB对照组、尼莫地平组及丹参组,每组6只.动物麻醉后经口气管插管控制呼吸,尾动脉和颈静脉插管,肝素(500 U/kg)抗凝.采用中度低温CPB(26～28 ℃),经尾动脉灌注、颈静脉右心房-下腔静脉引流,灌流量160 ml·kg-1·min-1,总转流时间2 h.尼莫地平组和丹参组在体外循环开始后分别经储血器加入尼莫地平注射液2 mg/kg和丹参注射液1 g/kg.实验中监测平均动脉压、心电图(ECG)及动脉血气.术后1 h处死动物,立即断头取脑分离海马组织,放入-170 ℃液氮罐保存.海马c-fos、bcl-2和bax mRNA检测均采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR).结果:CPB后1 h尼莫地平组和丹参组海马c-fos、bcl-2和bax mRNA表达均显著低于CPB对照组;尼莫地平组和丹参组海马bax mRNA/bcl-2 mRNA值显著低于CPB对照组.结论:尼莫地平和丹参可显著抑制中度低温体外循环后海马c-fos、bcl-2和bax mRNA的表达,降低bax mRNA/bcl-2 mRNA比值,对体外循环脑损伤具有保护作用.     

曲马多对CCI大鼠DRG细胞SP、CGRP表达及胃液PH值和胃粘膜的影响

目的:观察曲马多对坐骨神经结扎(CCI)大鼠机械痛敏、背根神经节(DRG)SP和CGRP表达、胃液pH和胃窦粘膜的影响。方法:22只雄性SD大鼠,建立右侧CCI模型,分为生理盐水组(NS组,n=6)、曲马多1 mg/kg组(T1组,n=8)和曲马多4 mg/kg组(T2组,n=8)。自术后第8天分别给予生理盐水、曲马多1 mg/kg和4 mg/kg灌胃,每日两次共7天。观察大鼠后肢机械痛阈,L4~5 DRG SP和CGRP表达,胃液pH值和胃窦粘膜变化。结果:(1)灌胃第3天和第7天,T1组和T2组右后肢痛阈与NS组相比显著增加(P<0.05);(2)灌胃第7天,右侧DRG SP和CGRP表达与NS组相比显著降低(P<0.05);(3)灌胃后第3天和第7天,T1组和T2组胃液pH值显著升高(P<0.05),且胃窦粘膜未见异常。结论:曲马多降低CCI大鼠机械痛敏,减少DRG SP和CGRP表达,提高胃液pH值,对胃窦粘膜无影响。     

α-硫辛酸对紫杉醇诱发的大鼠外周神经病的治疗作用

目的:建立紫杉醇诱发大鼠周围神经疾病的模型,研究α-硫辛酸对紫杉醇诱发大鼠周围神经疾病的治疗作用。方法:40只SD大鼠随机平均分为紫杉醇组(P组)、对照组(C组)、预治疗组(AP组)和后治疗组(PA组)。四组分别隔日给予紫杉醇2mg/kg(P组、AP组和PA组)或等量生理盐水(C组)ip,共4次。AP组和PA组分别于D0-D6和D21-D27给予α-硫辛酸25 mg/kg(ip,qd)。D0、D7、D14、D21和D28分别测量大鼠的机械痛阈和热痛阈、脊髓背角NF-κB的表达及星型胶质细胞的数量、脊髓背角和背根神经节中NF-κB的含量。结果:P组D14和D21的热痛阈显著低于C组,4g和15 g von Frey纤维刺激缩足反应显著高于C组。AP组D14和D21的热痛阈显著高于P组,4 g和15 g von Frey纤维刺激缩足反应显著低于P组。P组脊髓背角中星型胶质细胞的数量显著低于C组。AP组脊髓背角中星型胶质细胞的数量显著高于P组。C组和AP组NF-κB主要在脊髓背角星型胶质细胞的细胞浆中表达。P组和PA组NF-κB在脊髓背角星型胶质细胞的细胞核和细胞浆内同时表达。四组NF-κB在脊髓和背根神经节内的表达差异无显著意义。结论:预防性给予α-硫辛酸对紫杉醇诱发大鼠周围神经疾病模型中的热痛阈下降、痛觉过敏、痛觉超敏的减少,脊髓背角星型胶质细胞数量增加和NF-κB异常激活的抑制。     

术后慢性疼痛的药物治疗

手术是治疗许多疾病最为有效的方法之一,但手术本身会造成组织和(或)神经的损伤,造成慢性术后疼痛综合征(chronic post-surgical pain syndrome,CPSPS),如腰椎手术失败综合征(failed back surgery syndrome,FBSS)、开胸手术后疼痛综合征(post-thoracotomy pain syndrome,PTPS),乳房切除术后疼痛综合征(post-mastectomy pain syndrome,PMPS)等。CPSPS目前常用的药物主要有非甾体消炎药、中枢镇痛药、抗癫痫药及抗抑郁药等。     

逆行灌注氧合浓缩红细胞对深低温停循环鼠脑的影响

目的观察逆行灌注浓缩红细胞对深低温停循环鼠脑的影响。方法将SD大鼠随机分成假手术组(Shamop组,n=12)、单纯深低温停循环组(DHCA组,n=12)和逆行灌注浓缩红细胞组(DHCArcp组,n=12),建立深低温停循环模型(18℃,90min)。模型成功后取脑作光镜和电镜分析并测量脑组织湿/干重比。结果光镜和电镜结果均证明DHCArcp组比单纯DHCA组脑组织损伤程度轻(P<0.05);两组脑组织的湿/干重比值没有明显差异(P>0.05)。结论逆行灌注氧合浓缩红细胞具有脑保护作用,并且不增加术后的脑水肿。