补阳还五汤对全脑缺血模型大鼠恢复脑血流灌注后的皮层神经元钙信号的影响

【目的】观察补阳还五汤预干预对全脑缺血大鼠皮层神经元L型Ca^2＋通道的影响，探讨Ca^2＋信号异常参与缺血性神经元损伤的机制及补阳还五汤抗脑缺血的分子机制。【方法】72只SD大鼠随机分为12组，即假手术组（2组）、模型组和补阳还五汤组（此2组各分为缺血再灌注后2、12、2，4、48、72h5个时间点组）；补阳还五汤各组按0．64g／kg剂量灌胃，每天2次，连续5d。除假手术组外，各组均参照改良的Pulsinelli4血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型，缺血后的大鼠分别在存活2、12、2，4、48、72h后进行皮层神经细胞急性分离，单通道电流经EPC-9膜片钳放大器放大，采用Pulse＆Pulsefit采集入计算机，检测各组大鼠血流再灌注后不同时间点的L型Ca^2＋通道的平均开放时间和开放概率。【结果】模型大鼠皮层神经元L型Ca^2＋通道因缺血激活而开放，其开放时间在再灌后各时间点均比假手术组延长，开放概率分别在再灌注2h和2，4h时出现高峰；而补阳还五汤组的皮层神经元L型Ca^2＋通道的开放时间在再灌72h时比模型组降低（P〈O．01），其开放概率在模型组出现第1个高峰时（再灌2h）被显著性地降低至与假手术组相仿水平（与模型组比较P〈0.01，与假手术组比较P〉0．05）。【结论】补阳还五汤在缺血再灌早期（再灌2h），主要通过降低L型Ca^2＋通道开放概率，即影响L型Ca^2＋通道的可利用性以减少Ca^2＋内流。而在缺血再灌后期（再灌72h），主要通过降低L型Ca^2＋’通道开放时间，即影响L型Ca^2＋通道开放特性以减少Ca^2＋内流。     

补阳还五汤对全脑缺血模型大鼠再灌注不同时点皮质神经细胞钙超载的影响

目的:采用膜片钳技术和离子图像分析技术,同步观察补阳还五汤预干预对全脑缺血大鼠皮质神经细胞L型Ca2 通道及细胞内Ca2 浓度的影响,探讨Ca2 信号异常参与缺血性神经细胞损伤的机制及补阳还五汤抗脑缺血的分子机制,为临床应用本方防治缺血性脑病提供理论基础,并为中药复方研究探索新的思路和方法.方法:参照改良的Pulsinelli四血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型,缺血后大鼠分别在存活2,2,4,8及72 h后进行皮质神经细胞急性分离,负载荧光指示剂Fura-2/AM,用钙离子成像系统检测单个神经细胞内Ca2 浓度.单通道电流经EPC-9膜片钳放大器放大,用Pulsefit Pulse采集至计算机.用分析软件TAC进行测量.结果:补阳还五汤预干预除再灌注12 h外,可显著降低其他各时点大脑皮质神经细胞内Ca2 浓度,对缺血再灌后两次Ca2 堆积均表现明显的抑制作用.补阳还五汤再灌注72 h,皮质神经细胞L型Ca2 通道平均开放时间显著降低,再灌注2 h,皮质神经细胞L型Ca2 通道开放概率显著降低.结论:降低缺血再灌注不同时点皮质神经细胞内Ca2 浓度及在缺血再灌注不同时点分别降低L型Ca2 通道开放概率和开放时间是补阳还五汤抗脑缺血的重要机制.补阳还五汤预干预对缺血性神经细胞损伤的预防和治疗有非常积极的意义.