联合抗过敏疗法抗豚鼠血清过敏症的实验研究

本文应用联合抗过敏疗法及赛庚啶进行抗豚鼠血清过敏症治疗,观察两种疗法的保护作用。结果表明,联合抗过敏组豚鼠死亡率为12.5%,对照组为87.5%。二者相比P<0.01,联合抗过敏疗法能明显地降低血清总IgE及肥大细胞脱颗粒数。赛庚啶对豚鼠血清过敏症亦有一定的保护作用。     

2型糖尿病患者C-反应蛋白与纤维蛋白原、体重指数的关系

目的 探讨2型糖尿病（DM）患者C-反应蛋白（CRP）与纤维蛋白原（FIB）、体重指数（BMI）间的关系。方法 对92例2型DM患者和63名健康者同时检测CRP、FIB并测量他们的身高、体重。结果2型DM患者的CRP、FIB、BMI均明显升高，与正常对照组差异有显著性（P〈0.01）。CRP同BMI（r=0．412，P〈0．001）、FiB（r=0．735，P〈0．001）呈正相关，同时对CRP与FIB的实验数据进行回归分析（F=105．96，P〈0．001），结果 与国外报道的2型DM患者的CRP是FIB的独立预测因子的结论相一致。结论 CRP为2型DM的病因、治疗效果及其大血管并发症的早期诊断、预防、治疗及预后评价手段提供了理论依据，定期监测2型DM患者血清中的CRP浓度有重要的临床价值。     

2种药敏试验方法检测酵母菌对氟康唑敏感性的比较

目的研究纸片扩散法和真菌耐药性分析试剂盒(CANDIFAST)检测酵母菌对氟康唑敏感性结果的差异.方法同时应用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)认可的酵母菌纸片扩散法和CANDIFAST检测113株临床分离酵母菌对氟康唑的敏感性,并与临床资料进行比较.结果纸片扩散法和CANDIFAST所测酵母菌对氟康唑的总敏感率分别是93.8%(106/113)和54.0%(61/113).2种方法检测的结果差异有显著性(P<0.01),与临床治疗结果相比较,纸片扩散法的符合率平均高达99.5%,明显高于CANDIFAST(符合率平均63.8%).结论 NCCLS认可的酵母菌纸片扩散法的测定准确性优于CANDIFAST.     

微小RNA与肿瘤诊断

微小RNA (miRNA)能在转录后水平调节mRNA表达。miRNA与胃肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌和肝癌等多种肿瘤的发生、发展密切相关,而且很多miRNA在肿瘤中表达水平明显异常。miRNA可作为一种标志物用于多种肿瘤的诊断。     

微小RNA与肿瘤诊断

微小RNA（miRNA）能在转录后水平调节mRNA表达。miRNA与胃肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌和肝癌等多种肿瘤的发生、发展密切相关,而且很多miRNA在肿瘤中表达水平明显异常。miRNA可作为一种标志物用于多种肿瘤的诊断。     

VEGFR-2/KDR三区的载体构建、表达及胃癌患者抗-KDR抗体的检测

目的扩增人血管内皮细胞生长因子受体-2／激酶插入受体（VEGFR-2／KDR）三区基因，构建表达载体，在大肠埃希菌中表达，获得纯化蛋白。检测胃癌术前患者外周血中抗-KDR抗体水平，为进一步研究KDR与抗-KDR抗体在胃癌中的作用奠定基础。方法从人血管内皮细胞株ECV304提取总RNA，逆转录后，聚合酶链反应（PCR）扩增KDR胞外段三区基因，连接到pMD18-T载体测序；酶切后将目的基因插入原核表达载体pET28α（＋）构建重组质粒，将重组质粒转化到大肠埃希菌DH5et内并提取质粒，经双酶切鉴定后，再转化入表达菌株BL21（DE3），异丙基-B-D硫化半乳糖苷（IPTG）诱导表达，用Ni^2＋-NTA树脂纯化、复性；用获得的蛋白包被酶联免疫吸附试验（ELISA）板，用ELISA检测32例胃癌患者和35名健康对照者外周血抗．KDR抗体水平。结果构建了表达载体pET28α（＋）-KDR3，并获得高效表达，表达的蛋白质相对分子质量为16000，重组蛋白以包涵体形式存在。胃癌患者外周血中抗-KDR抗体水平显著高于健康对照组（P〈0．01）。结论VEGFR-2／KDR三区基因成功克隆到表达质粒内并表达。为进一步研究KDR与抗-KDR抗体在胃癌中的作用奠定了基础，及可能为胃癌的血清学诊断提供新的方法。     

P －gp 在人胃癌干细胞中表达的初步研究

目的：通过无血清法富集人胃癌 BGC －823干细胞,并对所获得的 BGC －823干细胞生物学特性进行研究。方法：采用无血清悬浮培养方法富集人胃癌 BGC －823干细胞球。后续实验分为 BGC －823干细胞组和 BGC －823细胞组：采用蛋白印迹（Western Blot）法和 Hoechst33342染色法对所富集细胞的干性进行鉴定;利用平板克隆实验检测细胞单克隆形成能力;采用 CCK －8法检测细胞对紫杉醇的敏感性;RT －PCR 法检测 P －gp mRNA 的表达;细胞免疫荧光双染观察干细胞球 CD44、P －gp 的表达情况。结果：采用无血清悬浮培养法成功获得干细胞球。CCK －8结果显示,BGC －823干细胞对紫杉醇敏感性较 BGC －823细胞降低（P ＜0．05）。干细胞球单克隆形成能力较人胃癌 BGC －823细胞增强（P ＜0．05）。Western Blot 和 Ho-echst33342染色法结果显示无血清富集的细胞为胃癌干细胞。RT －PCR、细胞免疫组化检测显示 BGC －823干细胞 CD44、P －gp 的表达较 BGC －823细胞升高,统计学差异明显（P ＜0．05）。结论：利用无血清富集法收集的人胃癌 BGC －823干细胞球为研究干细胞的理想模型,胃癌干细胞的形成是耐药出现的潜在机制。     

阻抑素基因在诱导胃癌BGC823细胞凋亡过程中的作用研究

目的:研究阻抑素(prohibitin,PHB)基因在诱导胃癌BGC823细胞凋亡过程中的作用.方法:使用RNA干扰技术和基因转染技术,分别获得PHB基因低表达和高表达的胃癌BGC823细胞.然后采用MTT法和FCM法分别检测PHB基因低表达和高表达的胃癌细胞的增殖率、细胞周期和凋亡情况,Western印迹法检测Bax、Bcl-2和细胞质内细胞色素c的表达水平,并且检测 caspase-3和caspase-9的激活情况.结果:PHB基因转染胃癌BGC823细胞后,细胞生长速度减缓,G1期细胞所占比例明显下降,G2期细胞比例略有上升,S期细胞比例和细胞凋亡率明显上升,Bax表达上调,Bcl-2表达下调,细胞质内细胞色素c水平显著上升,caspase-3和caspase-9的激活程度增加.PHB基因特异性RNA干扰胃癌细胞BGC823后,细胞生长加速,G1期和G2期细胞所占比例变化不大,S期细胞比例略有上升,细胞凋亡率小幅下降,Bax表达下调,Bcl-2表达上调,caspase-3和caspase-9的激活程度减弱.结论:PHB是抑制胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的重要因子之一,推测该作用可能是通过线粒体途径实现的.     

革兰阴性杆菌16S rRNA甲基化酶基因检测及作用研究

目的分析上海中医药大学附属普陀医院临床分离的革兰阴性杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的流行情况及革兰阴性杆菌的氨基糖苷类耐药机制。方法收集临床分离的对阿米卡星和/或庆大霉素耐药的革兰阴性杆菌53株。采用聚合酶链反应（PCR）法检测16S rRNA甲基化酶基因：armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA;PCR阳性产物测序分析。构建PET32-armA和PET32-rmtB的重组质粒并转化入宿主菌BL21中。纸片扩散法（K-B）检测临床分离16S rRNA甲基化酶基因阳性菌株和重组菌对5种氨基糖苷类药物的敏感性。结果 53株耐药菌中5株鲍曼不动杆菌、2株肺炎克雷伯和1株阴沟肠杆菌检出armA基因,2株大肠埃希菌检出rmtB基因。获得PET32-armA和PET32-rmtB的重组BL21菌株。PET32-armA和PET32-rmtB的重组菌均获得氨基糖苷类抗菌药物耐药性。结论本院临床样本检测到16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB阳性菌株,armA基因存在于鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中;rmtB基因位于大肠埃希菌中。将armA和rmtB基因转入非耐药的宿主菌中可以诱导其对氨基糖苷类抗菌药物的耐药。     

噬菌体展示技术构建寻常型天疱疮患者桥粒芯糖蛋白3抗体文库

目的：用噬菌体展示技术构建寻常型天疱疮患者桥粒芯糖蛋白3抗体文库。方法：收集寻常型天疱疮患者外周血,分离淋巴细胞抽提RNA,采和RT－PCR反应以人的抗体特异性HuVHBACK、HuJHFOR和HuVkBACK、HuJkFOR引物扩增抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因片段,并将其与接头拼接成ScFv片段克隆于大肠杆菌。结果：抗体基因ScFv片段与噬菌体基因III的产物以融合蛋白的形式在噬菌体表面表达,构建了天疱疮患者的重组噬菌体抗体库,ELISA检测证明ScFv基因产物具有抗体活性。结论：天疱疮噬菌体抗体库的构建为天疱疮发病机理、诊断和治疗研究打下了基础。