Tat-LK15运载siRNA沉默RGC-5神经细胞nNOS基因的实验研究

目的探讨离体条件下细胞穿透肽Tat-LK15运载小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默RGC-5视神经节细胞(retinal ganglion cell line,RGC-5)神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,n NOS)基因的可行性,为在体条件下研究Tat-LK15运载siRNA沉默n NOS表达治疗神经病理性疼痛提供理论依据。方法 1通过凝胶阻滞分析测定Tat-LK15与siRNA的最佳交联比。流式细胞术检测Tat-LK15/FAM-siRNA以最佳交联比转染RGC-5细胞的转染效率;不同剂量Tat-LK15(1、2.5、5、10和20μg)孵育RGC-5细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率。2制备n NOS高表达的RGC-5细胞模型。3将RGC-5细胞随机分为5组:对照组、模型组、Tat-S组(Tat-LK15运载n NOS/siRNA转染模型细胞)、Lipo-S组(LipofectamineTMRNAi MAX运载n NOS/siRNA转染模型细胞)及Tat-N组(Tat-LK15运载NCsiRNA转染模型细胞),通过Q-PCR及Western blot检测各组nN OS表达水平。结果 Tat-LK15与siRNA质量比为2∶1时可完全包裹siRNA,达到最佳交联,此时其转染效率为(84.4±3.9)%。当Tat-LK15剂量为20μg(6.1μmol·L-1)时才出现一定细胞毒性,细胞凋亡率高于对照组[(10.3±1.1)%vs(7.4±0.9)%,P<0.05]。造模后RGC-5细胞nN OS表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,Tat-S组nN OS mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),Tat-S组与Lipo-S组相比无差异(P>0.05)。结论Tat-LK15能高效转染siRNA,细胞毒性低,离体条件下可有效运载siRNA沉默nN OS的基因表达。     

超声技术在临床麻醉气道管理中的应用

由于高分辨率便携式超声仪器和探头技术的改进，使超声技术从单纯的临床诊断走进了手术室，其具有便携性、无创性、实时性、安全性及可重复性等优势。本综述就上呼吸道超声解剖结构特点及近年超声技术在气管插管术、喉罩置入位置判定、经皮扩张气管造口术及评估胃饱患者中的应用等作一介绍。     

老年非心脏手术患者体力活动指数与心血管危险因素的关系

体能是有氧代谢允许的活动能力，被国外许多学者用于衡量老年患者对手术和麻醉承受能力。大量研究已经证实低体能伴随着较高的围手术期心脏事件（CRE）发生率。本研究选用拟行择期非心脏手术的老年患者，探讨随着危险因素增加，患者的体力活动指数（duke activity status index，DASI）的变化。     

水溶性脂聚体介导NR2B siRNA治疗神经病理性痛的实验研究

目的 探讨水溶性脂聚体(WSLP)介导含2B亚基的N-甲基-D-天冬氨酸受体小干扰RNA(NR2B siRNA)治疗大鼠神经病理性痛的可行性.方法 健康雄性SD大鼠100只,周龄6周,体重180～200 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=20):对照组(C组)、假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、WSLP-NR2B siRNA组(W组)、WSLP-阴性对照NR2B siRNA(WN组).采用坐骨神经分支部分结扎法制备大鼠神经病理性痛模型.C组不予任何处理;S组仅暴露坐骨神经,不牵拉和损伤神经;NP组于制备模型后即刻鞘内注射生理盐水20μl;W组和WN组于制备模型后即刻分别鞘内注射相应的siRNA 20μl.于模型制备前1 d及制备后3、7、14和21 d时测定机械缩足反应阈值(MWT)及热缩足反应持续时间(TWD),模型制备后3 d,痛阈测定结束后,每组取10只大鼠,取L4-6节段背根神经节,测定NR2B mRNA及其蛋白的表达水平.结果 与S组比较,NP组、W组和WN组MWT降低,TWD延长,NR2B mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05或0.01),C组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与NP组比较,W组MWT升高,TWD缩短,NR2B mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.01),WN组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 WSLP不仅成功介导NR2B siRNA,抑制NR2B的表达,还可减轻大鼠神经病理性痛.

Abstract：

Objective To investigate the feasibility of NR2B small interference RNA(NR2B siRNA)carried by water-soluble lipopolymer(WSLP)for treatment of neuropathic pain in rats.Methods One hundred healthy male SD rats weighing 180-200 g were randomly divided into 5 groups(n=20 each):normal control group (group C),sham operation group(group S),neuropathic pain group(group NP),group WSLP-NR2B siRNA (group W)and group WSLP-negative NR2B siRNA(group WN).Neuropathic pain was induced by partial ligation of sciatic nenre.WSLP-NR2B siRNA complex was formed by binding WSLP and NR2B siRNA.Normal saline.WSLP-NR2B siRNA complex and WSLP-negative NR2B siRNA 20μl were injected intrathecally after operation in NP,W and WN groups respectively.Mechanical withdrawal threshold(MWT)and thermal withdrawal duration (TWD)were measured before(baseline)and at 3,7,14 and 21 days after operation.Ten animals in each group were sacrificed on the 3rd day after operation and the lumbar segment(L4-6)of the dorsal root ganglia was removed for determination of the expression of NR2B mRNA and protein using RT-PCR and Western blot analysis.Results Sciatic nerve ligation significantly decreased MWT and prolonged TWD and increased NR2B mRNA and protein expression in group NP as compared with group C.WSLP-NR2B siRNA complex significantly reduced sciatic nerve ligation-induced hyperalgesia and decreased NR2B mRNA and protein expression in group W as compared with group NP.Conclusion WSLP not only mediates NR2B siRNA successfully and inhibits the expression of NR2B,but also reduces neuropathic pain in rats.     

鞘内注射水溶性脂聚体运载NR2B siRNA减轻坐骨神经缩窄性损伤大鼠神经病理性疼痛

脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）的过度表达在神经病理性疼痛的产生和维持方面起关键作用,利用siRNA抑制NR2B的表达有望成为神经病理性疼痛甚至神经损伤治疗的新途径,然而,目前仍然缺乏NR2B siRNA安全且高效的载体。本实验探讨了低分子量聚乙烯亚胺和胆固醇组成的水溶性脂聚体（WSLP）运载NR2B siRNA治疗大鼠神经病理性疼痛的可行性,以寻找神经病理性疼痛基因治疗的安全且高效的载体。结果发现：WSLP与NR2B siRNA复合物（WSLP/siRNA）鞘内注射后3d,坐骨神经缩窄性损伤导致的神经病理性疼痛大鼠脊髓背角NR2B的基因表达显著下降,转录水平及蛋白水平的表达分别下降59%及54%（P < 0.01）,WSLP/乱序siRNA(scRNA) 及低分子量聚乙烯亚胺/siRNA鞘内注射后NR2B的基因表达无明显变化。WSLP/siRNA鞘内注射后3,7,14及21d神经病理性痛大鼠患足的疼痛程度明显减轻,而注射低分子量聚乙烯亚胺/ siRNA及WSLP/scRNA却无此作用。由此表明,WSLP可有效运载siRNA抑制神经病理痛大鼠NR2B基因的过度表达,从而对神经病理性疼痛大鼠具有治疗作用。     

氟比洛芬酯预处理明显减轻冷水束缚应激大鼠氧自由基介导性急性胃黏膜损害

目的 探讨氟比洛芬酯预处理对冷水束缚应激大鼠急性胃黏膜损害及胃黏膜组织丙二醛(malondialdeyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superexide dismuklse,SOD)及髓过氧化物酶(myelopemxidese,MPO)的影响.方法 30只成年雄性wistar大鼠随机分成3组,正常(A组,n=10),应激组(B组,n=10),氟比洛芬酯预处理组(c组,n=10).B、C组用浸水(水温20℃±1℃)束缚应激法复制急性胃黏膜病变模型.6 h后处死取胃组织标本,10×解剖显微镜下观察各组胃黏膜损伤指数(gastic mucosal lesion index,GI).光学显微镜下观察各组标本组织学改变,并用比色法测定各组胃组织中MDA、SOD与MPO的含量变化.结果 ①B组胃黏膜旱暗红色.有大量点状出血、线状出血或斑片状糜烂.黏膜下血管和皮区血管充血,光镜下上皮细胞黏液层变薄、缺失.细胞间隙变大.有不同程度的坏死;C组胃腔液体呈淡黄色,黏膜出血或糜烂程度较B组明显好转,光镜下可见上皮细胞黏液层有少许缺损,但基本完整.②与B组比较.C组急性胃黏膜损伤指数(gastic mucosal iesion index,GI)显著降低(P<0.05),MDA、MPO值显著降低.SOD值升高(P<0.05).结论 氟比洛芬酯预处理可明显减轻冷水束缚应激大鼠氧自由基介导性急性胃黏膜损害,其机制可能与减少脂质氧化及增加清除氧自由基的能力有关.     

纤维支气管镜接Bain回路经气管切口窦道取出小儿支气管异物一例

患儿男性，11岁，体重18kg。4岁时因咽部异物感、喘憋，曾去其他医院就诊，颈部X线检查显示喉部新生物，予以气管切开、留置气管套管，并转我院行喉部乳头状瘤切除术，并继续留置气管套管，术后恢复良好。患儿3年前曾来我院换气管套管1次，此后，除了刺激性咳嗽较频外，无呼吸困难、气喘等症状，一直未来医院复查。此次入院前半个月的一天早晨患儿剧烈咳嗽时，气管套管脱落，发现气管套管完全断裂，近端咳出的有2／5，其余部分未见咳出，     

左旋布比卡因伤口局部持续输注用于脊柱手术后的镇痛效果

目的观察伤口局部持续输注左旋布比卡因用于脊柱手术后的镇痛效果。方法择期行后路胸腰椎手术患者54例,随机分为两组:研究组采用局部镇痛泵经伤口持续输注0.25%左旋布比卡因,对照组使用静脉镇痛泵输注氟比洛芬酯、帕洛诺司琼、喷他佐辛,均在术后开启镇痛泵。采用疼痛VAS评分和Ramsay镇静评分评价术后2、4、6、12、24、36、48h疼痛及镇静程度,通过患者对镇痛系统是否满意、有无局部炎症、有无局部伤口渗液进行综合评价,并记录不良反应情况。结果术后48h内两组患者VAS评分和Ramsay镇静评分差异无统计学意义。研究组恶心呕吐、头晕发生率明显低于对照组(P0.05)。结论伤口局部镇痛系统应用于脊柱手术后镇痛效果与静脉镇痛系统相似,但能降低不良反应的发生率。     

围术期中老年心肌缺血患者HRV的监测及临床意义

目的 :探讨围术期中老年心肌缺血患者心率变异性 (HRV )的变化规律。方法 :选择 15 0例中老年择期手术患者 ,以动态心电图 (DCG)监测围术期心率变异性 (HRV)及心肌缺血的变化。于术前一日内监测至少 12h ,术后监测 48h。根据围术期是否发生心肌缺血分为缺血组 (A组 )和非缺血组 (B组 )。结果 :共有 3 7人发生心肌缺血 (A组 ) ,其中术前有 7例发生 ,术后有 3 4例发生 ;另 113人未发生心肌缺血 (B组 )。A组术前HF(高频功率 )、LF(低频功率 )、LF/HF(低频与高频比值 )低于B组 (P <0 0 5 ) ;两组术后HRV均显著降低 (P <0 0 5或 0 0 1) ,A组TP(总功率 )、HF、LF、VLF(极低频功率 )、LF/HF在术后 2d内均显著低于B组 (P <0 0 5或 0 0 1)。结论 :心肌缺血主要发生于术后 ;术前HF、LF、LF/HF异常降低对心肌缺血尤其是术后心肌缺血可能具有比较重要的预测价值 ;术后自主神经功能严重降低、交感 /迷走张力严重失衡且恢复较慢 ,可能是术后心肌缺血的重要原因