UHPLC-TOF-MS结合网络药理学与实验验证探讨左金丸治疗抑郁症作用机制

基于入血成分、网络药理学与实验验证研究策略,探讨左金丸治疗抑郁症的作用机制。采用UHPLC-TOF-MS对左金丸含药血清进行定性分析。采用PharmMapper、GeneCards等数据库获取入血成分及疾病相关靶点,取交集后构建蛋白互作(PPI)网络,筛选核心靶点并进行GO功能和KEGG通路富集分析。采用Cytoscape 3.7.2软件构建“化合物-靶点-通路”网络,预测左金丸抗抑郁的作用靶点与信号通路,并构建CUMS抑郁模型小鼠对关键靶点进行验证。结果显示,共鉴定左金丸入血成分21个,主要为生物碱类化合物。化合物-疾病共有靶点155个,PPI网络分析筛选出核心靶点67个。KEGG富集与PPI网络分析发现,左金丸可能通过AMPK/SIRT1、NLRP3、insulin等靶点与通路发挥抗抑郁作用。动物实验结果表明,左金丸可显著改善CUMS抑郁模型小鼠的抑郁样行为,显著降低海马区和血清中IL-1β、IL-6及TNF-α水平,激活AMPK/SIRT1信号,并降低NLRP3的蛋白表达水平。综上可得,左金丸可能主要通过激活小鼠海马区AMPK/SIRT1信号通路,抑制NLRP3激活及神经炎症,从...     

龙脑消痔露的制备工艺及体外抑菌实验研究

目的：制备龙脑消痔露及观察其体外抑菌作用。方法：按标准工艺制取龙脑消痔露。采用平板打洞法及试管法观察其体外抑菌作用。结果：龙脑消痔露制剂成功。其对标准菌株和临床分离菌株金黄色葡萄球菌与大肠杆菌均有一定的抑菌作用。结论：龙脑消痔露制备工艺简便易行；有一定的体外抑菌作用；该作用为该药治疗痔疮肿痛提供了药理依据。     

液相色谱-质谱测定鸦胆子油脂肪乳注射液在癌症患者体内的血药浓度

目的 建立液相色谱-质谱(LC-MS)法测定癌症患者单剂量滴注鸦胆 子油脂肪乳后体内油酸浓度。方法 用自身对照试验设计,7名癌症患者,第3 天不给药,抽取不同时间点空白血浆样品;第5天,单剂量滴注鸦胆子油脂肪乳 注射液100 mL,滴注开始后,抽取不同时间点血浆样品,60 min滴完,用LC- MS法测定血药浓度。结果 线性范围为2．44-156 mg·L-1;日内、日间变异 系数均<14％;7名癌症患者单剂量滴注鸦胆子油脂肪乳注射液100 mL后,主 要药代动力学参数:tmax=(1．08±0．19)h,Cmax(95．20±29．10)mg·L-1, AUC0-7h=(265．67±59．32)mg·h·L-1,t1／2=(12．14±6．42)h。结论 本法 适用临床测定血浆中油酸浓度。     

秦皮甲素大鼠体内药代动力学研究

目的:建立并确证LC/MS/MS法测定人血浆中秦皮的方法,并用以研究大鼠口服痛风利灵胶囊后秦皮甲素的药代动力学过程。方法:采用HPLC/MS/MS的方法进行血浆样品的测定,色谱柱为Aglient Zobax C18(2.1mm×150mm),流动相为甲醇-0.1%甲酸(含5mmol/L甲酸铵)=30∶70,流量为0.25mL/min;柱温为30℃。电喷雾ESI源,多反应监测(MRM):秦皮甲素,[M H] ,m/z 341.27→179.1;替硝唑,[M H] ,m/z 248.3→120.9。8只大鼠,雌雄各半,分别灌胃给予50mg/kg痛风利灵胶囊内容物(含秦皮甲素43mg/kg),于给药前及给药后多点抽取静脉血进行检测。结果:秦皮甲素的线性范围为12.5～1800ng/mL,日内、日间变异系数均小于10%。大鼠口服痛风利灵胶囊后,秦皮甲素药时曲线均分别符合一房室开放模型,T1/2为1.21h。结论:本实验建立的血药浓度测定方法简便、灵敏、特异,适用于大鼠血浆中秦皮甲素浓度的测定及药动学研究。     

基于细胞因子风暴和中医“湿毒犯肺”理论挖掘抗新型冠状病毒肺炎中药

越来越多的临床证据表明,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者后期由于病情加重,出现急性呼吸窘迫综合征和多器官衰竭等严重并发症而导致死亡,而加重病情的原因主要是细胞因子风暴。针对COVID-19重症患者的治疗目前尚无特效药,西药虽然可以改善部分症状但后遗症较大,而中药在此次疫情中发挥了重要的作用。本文就临床报道的与细胞因子风暴相关的指标,基于"湿毒犯肺"的中医理论通过中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)挖掘并筛选作用于这些细胞因子的中药。结果发现,主要包括白介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等19个细胞因子与COVID-19密切相关,麻黄、甘草和金银花等22种中药作用于这些细胞因子,为中医临床治疗中后期COVID-19患者合理的选择处方以及加减用药提供一定的参考。     

异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷与牛血清蛋白的结合及分子对接研究

目的： 研究异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷与牛血清蛋白的相互作用。 方法： 采用平衡透析法,高效液相色谱测定异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷与牛血清蛋白的结合率。采用同源建模和分子对接技术分析药物相互作用模式。 结果： 异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷与牛血清蛋白的最佳平衡透析时间为16 h,异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷低、中、高（2,4,8 mg·L^-1）3个质量浓度的牛血清蛋白结合率分别为（43.23±2.23）%,（45.16±3.12）%,（44.71±3.25）%。牛血清白蛋白同源建模和分子对接结果显示：异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷能够与牛血清白蛋白氨基酸残基形成6个氢键。 结论： 异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷与牛血清发生中等强度的结合。     

雷公藤活性成分对大鼠体内P450酶活性的影响

目的用Cocktail探针药物法,研究雷公藤片对大鼠肝CYP450的影响。方法分别以奥美拉唑和咪达唑仑作为CYP2C19和CYP3A4的探针药,将大鼠随机分为低剂量和高剂量两组,每日早晚灌胃雷公藤片,采用液质联用法测定连续使用雷公藤片前后大鼠血浆中相应的探针药物的浓度及其药代动力学参数。结果连续灌胃10 d后,与用药前比较,奥美拉唑、咪达唑仑的血药浓度及其药代动力学参数有明显改变;低剂量组和高剂量组中咪达唑仑的AUC明显增加,CL/F明显降低,T12增大,Vd/F和Tmax变化不明显,高剂量组中Cmax有所增大;低剂量组中奥美拉唑的T21和Vd/F有所增大,高剂量组中AUC增加(P<0.05)。结论连续灌胃雷公藤片10 d后,雷公藤片对大鼠体内CYP3A4酶具有抑制作用;对CYP2C19酶具有一定的抑制作用。     

复方五仁醇胶囊含药血清中木脂素类成分的UPLC-MS/MS分析

目的:分析复方五仁醇胶囊大鼠灌胃后消化吸收进入血液的木脂素类成分,以便与该制剂血清药理学研究相结合,阐明其药效物质基础。方法:采用UPLC-MS/MS方法,比较复方五仁醇胶囊含药血清、体外制剂、空白血清及对照品提取离子流色谱图(EIC),并通过质谱图相关离子峰分析,确认进入血液的木脂素类成分。结果:发现制剂中存在的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素5个木脂素类成分进入血液。结论:这5个木脂素类成分很可能是复方五仁醇胶囊体内直接作用物质的重要组成部分,结合血清药理学作进一步研究有助于阐明该制剂药效物质基础。     

酶解法与LC-MS-MS相结合研究灯盏乙素在健康人体内的药代动力学

目的建立β-葡萄糖醛酸苷酶解法与LC-MS-MS法相结合测定人体血浆中灯盏乙素的苷元,研究健康男性单剂量口服灯盏花素分散片的药代动力学。方法血浆样品经β-葡萄糖醛酸苷酶水解,甲醇蛋白沉淀,色谱柱为Agilent ZORBAX SB C18(2.1 mm×150 mm,5μm),运用乙腈-甲醇-水洗脱,多反应监测(MRM)灯盏乙素苷元([M-H]-,m/z285.0/136.8)和内标槲皮素([M-H]-,m/z 301.1/120.8)。12名健康男性单剂量口服灯盏花素分散片120 mg后,采用该方法测定血浆中灯盏乙素苷元,使用DAS 1.0软件处理数据,计算药代动力学参数。结果灯盏乙素苷元在4.01~513.38μg·L-1范围内线性良好,日内日间精密度小于7.22%,提取回收率大于84.23%。12名健康男性单剂量口服灯盏花素分散片120 mg后,以灯盏乙素苷元为检测对象的主要药动学参数为:Cmax(μg·L-1):159.97±58.14;AUC(0-19)(μg·L-1·h):1151.37±279.80;AUC(0-∞)(μg·L-1·h):1194.13±264.51;Tmax(h):6.33±1.67;T1/2(h):2.83±0.60。结论建立的酶解与LC-MS-MS相结合分析方法准确灵敏,适用于灯盏乙素人体内的药代动力学研究。     

Cocktail法评价白香丹胶囊对大鼠体内CYP450酶活性的影响

目的：建立同时测定大鼠血浆中6种CYP450探针药物的方法,并采用Cocktail法研究白香丹胶囊对大鼠CYP450酶活性的影响。方法：选用茶碱(CYP1A2)、氯唑沙宗(CYP2E1)、甲苯磺丁脲(CYP2C6)、右美沙芬(CYP2D2)、奥美拉唑(CYP2D1)、咪达唑仑(CYP3A2)作为探针药物。大鼠随机分为对照组和给药组,给药组每天灌胃白香丹胶囊0.675 g?kg-1,对照组灌胃等量生理盐水,连续给药14天。第15天均灌胃给予6个探针药物,于不同时间点眼眶取血,采用LC-MS/MS法测定各探针药物浓度,计算药动学参数并进行组间t检验。结果：与对照组相比,给药组茶碱(P < 0.01)、氯唑沙宗(P < 0.01)、甲苯磺丁脲(P < 0.05)代谢显著加快,右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑代谢无显著性差异。结论：白香丹胶囊对大鼠CYP1A2有中强诱导作用,对CYP2E1、CYP2C6有弱诱导作用。