刚地弓形虫MIC8 CTD作用蛋白的筛选及鉴定

目的从刚地弓形虫速殖子裂解液中筛选并鉴定微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8CTD)的作用蛋白。方法分别以GST-MIC8CTD蛋白和GST蛋白(对照)作为探针蛋白,采用GST pull-down技术从弓形虫裂解液中筛选目标蛋白并进行SDS-PAGE分析;将目标蛋白转印至PVDF膜,测序,通过BLAST2在线对比搜索相似蛋白序列,初步确定目标蛋白;以目标蛋白抗体为一抗进行Western blot,分析GST pull-down产物与目标蛋白抗体的相互作用;分别用GSTMIC8CTD多克隆抗体和兔免疫前血清结合的sepharose与弓形虫裂解液进行免疫共沉淀试验,沉淀物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 PAGE显示GST-MIC8CTD蛋白的pull-down产物中有一蛋白条带(分子质量单位约35~45ku),GST蛋白的pull-down产物中无此蛋白;BLAST2比对目标蛋白的氨基酸序列与弓形虫醛缩酶序列一致;ECM检测GST-MIC8CTD多克隆抗体的免疫共沉淀产物中有蛋白组分可被相应的抗体识别,免疫前血清的免疫共沉淀产物中无可被识别的蛋白。结论经GST pull-down技术和免疫共沉淀试验筛选、鉴定,弓形虫MIC8CTD的作用蛋白为醛缩酶。     

三七皂苷Rg1对脑缺血后大脑皮质和海马BDNF蛋白的影响

目的探讨三七皂苷Rg1对脑缺血后皮质和海马脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白的影响。方法取60只成年雄性SD大鼠建立大脑中动脉缺血模型，2h后进行缺血再灌注并随机分为1、2、3、4、5组各12只，分别给予生理盐水5mg／kg、尼莫地平15mg／kg及三七皂苷Rg150、100、200mg／kg腹腔注射，于第1、3天用4％多聚甲醛饱和苦味酸进行心脏灌注并处死动物，制作脑组织冰冻切片，采用兔抗BDNF（1：500）抗体进行免疫组化ABC法染色，观察各组不同时间大脑皮质和海马BDNF蛋白灰度值及阳性神经元数量。结果大鼠大脑皮质和海马均可见BDNF蛋白阳性表达；3～5组BDNF蛋白的灰度值低于1、2组（P〈0．05、〈0．01），阳性神经元数量显著高于1、2组（P〈0．05、〈0．01）；3、4组大脑皮质BDNF灰度值和阳性神经元数目均低于海马（P〈0．05、〈0．01）。结论三七皂苷Rg1能增加大脑皮质和海马BDNF阳性神经元的数量和蛋白含量，两部位的观察指标有显著性差异。其机制可能是BDNF不仅存在于阳性神经元中，亦可能是不同部位脑组织对药物和脑缺血的反应性不同。     

垂体腺苷环化酶激活肽对缺血再灌注脑神经元凋亡的作用

目的:观察垂体腺苷环化酶激活肽(pituitaryadenylatecyclase-activatingpolypeptide,PACAP)对缺血再灌注脑神经元凋亡的防治作用。方法:利用四血管结扎法,建立老龄大鼠脑缺血再灌注模型,侧脑室注射PACAP,观察脑组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧物酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,计数海马CA1区存活和凋亡神经元数目,电镜观察神经元的超微结构变化。结果:PACAP治疗后脑组织MDA含量为(1.35±0.39)nmol/mg,SOD和GSH-Px活性分别为(115±20)NU/mg、(10.3±2.0)U/mg,与缺血再灌注组有明显差异(P<0.05),海马CA1区存活和凋亡神经元数目为48.8±4.3,14.3±2.9,能促进神经元存活和减轻凋亡损伤(P<0.01),保护超微结构。结论:PACAP的保护作用可能与其降低脑组织氧自由基水平,提高抗氧化酶活性,防止神经元凋亡有关。     

脑组织切片免疫组化技术中漂片法与贴片法效果比较

目的探讨脑组织切片免疫组化技术中漂片法与贴片法的效果。方法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,脑组织冰冻切片,采用兔抗BDNF(1∶500)抗体,同时运用漂片法和贴片法进行免疫组化ABC法染色。结果漂片法阳性神经元数目和灰度值与贴片法比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论脑组织切片免疫组化技术采用漂片法效果更为可靠。     

刚地弓形虫MIC2与醛缩酶作用位点的鉴定

目的 确定刚地弓形虫微线体蛋白2(MIC2)与醛缩酶的作用位点。方法 利用定点突变技术,将MIC2羧基端(MIC2C)的767位色氨酸(W⁷⁶⁷)突变为丙氨酸(A)。PCR扩增MIC2C W/A突变体基因片段;构建MIC2C W/A/pGEX-4T-1重组原核表达系统,IPTG诱导表达GST-MIC2C W/A突变体蛋白。分别以该蛋白和GST-MIC2C蛋白(对照蛋白)作为探针蛋白与弓形虫速殖子裂解液进行GST pull-down实验,SDS-PAGE及Western blot分析。结果 获得了MIC2C W/A突变体基因片段,制备了GST-MIC2C W/A突变体蛋白; GST-MIC2C蛋白的pull-down产物中有一蛋白条带,而且可以被醛缩酶抗体识别,而GST-MIC2C W/A蛋白的pull-down产物中未见蛋白条带。结论 将MIC2的W⁷⁶⁷突变为A后,MIC2失去与醛缩酶的作用,即MIC2与醛缩酶的作用位点为色氨酸(W)。     

高效液相色谱法测定不同产地白芷中欧前胡素和异欧前胡素含量

目的采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定不同产地白芷中欧前胡素和异欧前胡素的含量,为更好的评价不同产地白芷的质量提供依据。方法色谱柱:L ichrospher-C18(250×4.6 mm,5μm),柱温:30℃,流动相:甲醇-水,梯度洗脱,流速为1.0 mL.m in-1。结果欧前胡素、异欧前胡素进样量分别在0.54~5.40μg、0.244~2.44μg范围内,呈现良好的线性关系。欧前胡素平均回收率99.020%,相对标准偏差(RSD)3.318%;异欧前胡素平均回收率97.528%,RSD 2.904%。欧前胡素平均含量为1.465 mg.g-1;异欧前胡素平均含量为0.575 mg.g-1。结论该测定方法简单,快速,重现性好,可作为该药材质量的控制方法。     

帕利哌酮缓释片联合米氮平治疗精神分裂症阴性症状患者及其社会功能的研究

目的探讨帕利哌酮缓释片联合米氮平治疗精神分裂症阴性症状患者临床疗效、社会功能改善程度及不良反应。方法将150例阴性症状为主的精神分裂症患者分为3组,帕利哌酮缓释片组50例,帕利哌酮缓释片＋米氮平组50例,帕利哌酮缓释片＋安慰剂组50例。帕利哌酮缓释片组患者给予帕利哌酮缓释片治疗,起始剂量均为6mg·d-1,根据病情,1周后调整为6～12mg·d-1。在帕利哌酮缓释片组患者治疗的基础上,帕利哌酮缓释片＋米氮平组联用米氮平15—45mg·d。治疗,帕利哌酮缓释片＋安慰剂组给予安慰剂15—45mg-d“治疗,疗程12周。分别采用阳性和阴性症状量表（PANSS）、社会功能缺陷量表（SDSS）和不良反应症状量表（TESS）评定疗效、社会功能及安全性。结果治疗后3组患者PANSS总分均较治疗前显著降低（P〈005）。治疗后第12周末,帕利哌酮缓释片＋米氮平组患者的SDSS总分及PANSS阴性因子分均显著低于帕利哌酮缓释片组和帕利哌酮缓释片＋安慰剂组,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。3组不良反应均为轻度。结论帕利哌酮缓释片联合米氮平治疗精神分裂症阴性症状患者具有疗效好、患者社会功能恢复好及不良反应少的特点。     

D-二聚体在肝硬化和肝细胞癌患者血浆中的含量分析

目的探讨肝硬化(LC)和肝细胞癌(HCC)患者血浆D-二聚体(D-dimer)含量与临床分期的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测40例LC和57例HCC的血浆D-dimer。结果与正常对照组相比,LC组和HCC组的血浆D-dimer含量均显著升高(P<0.05,P<0.01),特别是HCC组中同时伴有LC的患者。在LC组中,代偿期患者的D-dimer血浆含量明显低于失代偿期(P<0.01);在HCC组中,血浆D-dimer含量随肿瘤分期(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)的逐步进展而升高(P<0.05,P<0.01)。结论LC和HCC患者血浆D-dimer含量的异常与临床分期密切相关,提示其可作为评价患者病情和鉴别诊断的参考指标。     

α-硫辛酸对果蝇寿命的影响

目的　建立果蝇的半乳糖衰老模型 ,观察α -硫辛酸对果蝇寿命影响。方法　将未交配的果蝇按性别随机分为四组 :对照组、半乳糖组、α -硫辛酸低剂量组、α -硫辛酸高剂量组 ,观测果蝇平均寿命 (AverageLifeSpan ,ALS)、果蝇最高寿命 (MaximumLifeSpan ,MLS)和果蝇半数死亡时间(LD50 )。结果　D -半乳糖组果蝇的生存曲线比对照组左移 ,具有显著性意义 (P <0 .0 1) ,LD50 缩小 ;α-硫辛酸低剂量组、高剂量组生存曲线比对照组右移 ,具有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论　D -半乳糖可以诱导果蝇的衰老 ,α-硫辛酸能预防D -半乳糖诱导的果蝇衰老作用