基于网络药理学探析核心中药治疗颈椎病的作用机制

目的:预测中药抗颈椎病主要活性成分及其作用靶点,探讨其成分-靶点的作用机制。方法:检索近10年内服治疗颈椎病的有效中药复方,应用Access 2003数据库录入复方,应用Apriori算法进行关联分析,运用软件Cytoscape建立中药配伍网络,选择网络相对中心度较高的前5味药作为核心中药,通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform, TCMSP)数据库查询中药的化学成分,运用Uniprot数据库查询靶蛋白对应的Gene Name,应用Cytoscape3.6进行成分-靶标-通路的网络分析和GO分析,通过KOBAS网络富集分析。结果:共纳入复方332首,当归、葛根、黄芪、川芎和甘草构成核心中药;共得到419个疾病靶标以及包括丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinase, MAPK)1、MAPK14、CCND1、EGFR、FOS、SRC等10个核心靶标在内的312个药物靶标。根据靶标对应的化学成分,从五味核心中药中筛选出包括槲皮素、大豆苷元、山柰酚、葛根素等146个成分。结论:五味核心中药很可能主要作用于MAPK14、FOS、CXCL8、CCL2、MAPK1、SRC等核心靶标及IL-17通路、MAPK通路,P13k-AKT信号通路、TNF信号通路等关键通路,通过调控细胞凋亡,延缓椎间盘老化,降低炎症介质的表达,减轻疼痛,通过减少缺血性伤害治疗眩晕以及促进钙离子释放,减缓肌肉痉挛来达到治疗颈椎病的目的。     

Mallory染色法在椎间盘退变组织染色中的应用

背景:椎间盘退变的同时伴随有组织结构和成分的改变.采用多种染色剂连续复染形成多元色的组织学图形,可观察到各组织成分的不同颜色以及椎间盘退变时的颜色变化,在分辨力的显现上,比单纯形态学的改变更明显且易于分辨.目的:从组织形态和颜色变化两方面观察Mallory三色染色对椎间盘的染色效果.方法:取1,1.5,2,2.5和3月龄Hartley豚鼠l-4-5椎体,制备中央冠状面椎间盘组织切片.用Mallory染液染色,光学显微镜下观察髓核、软骨终板和纤维环各区域形态和颜色的变化.SPOT-Ⅱ数码成像系统拍摄图像.结果与结论:Hartley豚鼠椎间盘退变程度随鼠龄增长自然加重.1月龄豚鼠的髓核形态正常,无色透明.在1.5～3月龄豚鼠中,髓核逐渐退变,由局部发展至全部基质呈现浅蓝着色,表明有胶原沉积,其形态上可见脊索细胞呈现软骨样细胞变性,髓核面积逐渐缩小并逐渐被纤维软骨样组织替代,直至在3月龄时呈现"蛇纹石"样外观.其终板上紫红色软骨细胞带随鼠龄增长呈现出不规则形态直至消失,其形态上可见软骨细胞逐渐减少.外纤维环红色和橘黄色的面积随着鼠龄增长而增加,表明有纤维素样变性,其形态上可见明显的板层状结构.内纤维环蓝色的面积随着鼠龄增长逐渐缩小.结果显示Mallory三色法用于Hartley豚鼠椎间盘染色时,在髓核、软骨终板和纤维环上,可从色彩、形态两方面显示出对基质和细胞具有良好的组织分辨力,能从形态和成分变化的角度反映自然增龄过程中椎间盘组织的退变情况.     

Mallory染色法在椎间盘退变组织染色中的应用*☆

背景：椎间盘退变的同时伴随有组织结构和成分的改变。采用多种染色剂连续复染形成多元色的组织学图形,可观察到各组织成分的不同颜色以及椎间盘退变时的颜色变化,在分辨力的显现上,比单纯形态学的改变更明显且易于分辨。 目的：从组织形态和颜色变化两方面观察Mallory三色染色对椎间盘的染色效果。 方法：取1,1.5,2,2.5和3月龄Hartley豚鼠L4~5椎体,制备中央冠状面椎间盘组织切片。用Mallory染液染色,光学显微镜下观察髓核、软骨终板和纤维环各区域形态和颜色的变化。SPOT-Ⅱ数码成像系统拍摄图像。 结果与结论：Hartley豚鼠椎间盘退变程度随鼠龄增长自然加重。1月龄豚鼠的髓核形态正常,无色透明。在1.5～3月龄豚鼠中,髓核逐渐退变,由局部发展至全部基质呈现浅蓝着色,表明有胶原沉积,其形态上可见脊索细胞呈现软骨样细胞变性,髓核面积逐渐缩小并逐渐被纤维软骨样组织替代,直至在3月龄时呈现“蛇纹石”样外观。其终板上紫红色软骨细胞带随鼠龄增长呈现出不规则形态直至消失,其形态上可见软骨细胞逐渐减少。外纤维环红色和橘黄色的面积随着鼠龄增长而增加,表明有纤维素样变性,其形态上可见明显的板层状结构。内纤维环蓝色的面积随着鼠龄增长逐渐缩小。结果显示Mallory三色法用于Hartley豚鼠椎间盘染色时,在髓核、软骨终板和纤维环上,可从色彩、形态两方面显示出对基质和细胞具有良好的组织分辨力,能从形态和成分变化的角度反映自然增龄过程中椎间盘组织的退变情况。 关键词：椎间盘退变;Mallory三色染色;Hartley豚鼠;组织化学;染色     

Hartley豚鼠增龄过程中腰椎间盘退变髓核组织形态变化及其生化研究

目的 研究Hartley豚鼠腰椎间盘自然老化及退变过程中脊索性髓核向纤维软骨髓核转化的规律及其血液生化指标与腰椎间盘退变的关系.方法 Hartley雌性豚鼠40只,分别为1、1、5、2、2、5、3月龄,每组各8只.通过HE观察豚鼠椎间盘髓核退变情况,测定其血清中蛋白多糖水平.结果 2月组椎问盘形态即有退变.血清蛋白多糖含最随年龄的增长而下降,各组间差异显著.结论 随着年龄的增长,椎间盘退变的同时,出现血清蛋白多糖含量的降低.随着椎间盘的不断老化,终板的软骨细胞向髓核迁移,脊索性髓核向心性皱缩并最终完全被纤维软骨性髓核取代.在Hartley雌性豚鼠椎间盘退变的过程中,这一转化完成得更快、更早.     

补肾活血方对沙鼠增龄过程中腰椎软骨终板钙化干预作用的初步研究

目的:探讨补肾活血方对腰椎软骨终板钙化的干预作用。方法:选取30只2月龄和7月龄健康雄性长爪沙鼠,分别喂养至2月龄(50~60 g)和12月龄(60~80 g)建立老龄沙鼠模型,采用随机数字表方法分为5组:正常组(n=6),模型组(n=6,给予生理盐水4 ml/kg,灌胃30 d),补肾活血方低剂量组(n=6,给予补肾活血方1.9×10-3 ml/g灌胃30 d),补肾活血方中剂量组(n=6,给予补肾活血方3.8×10-3 ml/g灌胃30 d),补肾活血方高剂量组(n=6,给予补肾活血方7.6×10-3ml/g灌胃30 d),干预组从7月龄开始连续给药1.36 g,30 d。正常组2月龄及其他组12个月龄时处死动物,取腰椎间盘组织,HE染色体视法分析腰椎体软骨终板组织形态学、血管芽面积、非钙化/钙化层比值,兔单克隆抗体免疫组化染色方法测定软骨终板X型胶原、BMPs的表达。结果:软骨终板血管芽相对面积测量显示,与模型组相比,补肾活血方中剂量组,正常组增高(P0.05),大、小剂量组虽各有不同程度的增加,但差异均无统计学意义(P0.05);软骨终板非钙化层/钙化层厚度比值测量显示,与模型组相比,补肾活血方中剂量、正常组增加,差异具有统计学意义(P0.05),而补肾活血方大、小剂量组虽各有不同程度的增加,但差异均无统计学意义(P0.05)。免疫组化染色软骨终板X型胶原的表达与模型组相比,正常组、补肾活血方低、中、高剂量组均降低,差异具有统计学意义(P0.01);BMPs的表达,与模型组相比,正常组、补肾活血方中剂量组升高,差异具有统计学意义(P0.01),大、小剂量组虽各有不同程度的升高,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论:补肾活血方中剂量可延缓增龄过程中椎间盘软骨终板钙化,提示可作为早期椎间盘退变的预防用药。     

糖皮质激素抑制Leptin、VEGF蛋白表达诱导骨质疏松作用机制研究

目的 通过比较糖皮质激素诱导骨质疏松模型大鼠（GIOP）在成模前后骨密度、病理组织以及瘦素（leptin）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）蛋白差异表达变化阐释糖皮质激素性骨质疏松的作用机制。方法 采取大腿内侧交替肌肉注射地塞米松注射液（DEX）建立骨质疏松症大鼠实验模型，连续注射8周，造模8周后处死各组大鼠，对右侧股骨胫骨进行骨密度检测、HE 染色，确定最佳造模剂量，继而通过免疫组织化学、蛋白免疫印迹的方法检测正常SHAM与DEX大鼠Leptin、VEGF蛋白的表达。结果 结合骨密度和HE染色的结果，确定DEX 2.5 mg/kg为地塞米松注射液诱导继发性骨质疏松的最佳造模剂量，免疫组织化学和蛋白免疫印迹检测发现，与SHAM组相比，DEX 2.5 mg/kg组大鼠Leptin、VEGF蛋白的表达均降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 糖皮质激素诱导的骨质疏松是通过抑制Leptin、VEGF蛋白表达，抑制血管生成进而抑制成骨发挥作用的，据此推测Leptin、VEGF可能是糖皮质激素性骨质疏松发病的潜在作用靶点。     

基于药性组合模式的3种腰痛方剂聚类分析

目的研究腰痛方剂在“性、味结合归经”层面上的配伍关系,揭示其内在规律。方法筛选古籍文献中治疗肾虚、寒湿和瘀血腰痛的方剂,信息标准化后建立Access数据库,量化处理每个方剂的性味归经,并以此为变量对每种证型的方剂分别聚类分析。结果每种腰痛方剂聚为5个主类时以性微温或温,味辛甘苦,归肾肝脾为主。药性组合特征：肾虚型：甘-微温-肾肝（63％）;辛甘苦-微温-肝脾肾（23％）;辛苦-温-肾脾（4％）;辛甘-热-肾脾心（4％）;苦甘-微寒-肾肝（3％）。寒湿型：苦辛-微温-肾肝（31％）;辛甘-温。肾肝（26％）;辛苦-温-脾胃（14％）;甘-微温-肝肾（12％）;甘-温-脾胃（11％）。瘀血型：辛苦-微温-肝（27％）;甘苦-微温-肾肝（23％）;辛甘-温-肝肾（21％）;辛苦-微温-脾。肾肝（13％）;辛-温-肝脾（7％）。结论方剂的组合药性聚类能够反映治则治法的科学内涵,可为配伍规律的研究提供新思路。     

钻孔法制造大鼠胫骨缺损性骨折动物模型初探

目的:比较两种缺损性骨折动物模型损伤量、愈合时间和愈合方式的差异,为探索建立新型缺损性骨折动物模型提供研究依据。方法:SPF级雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、锯开组和钻孔组3组,每组20只。正常组不做任何处理,其他两组动物经麻醉后,钻孔组用低速骨钻在胫骨平台下外侧钻约1mm的圆孔缺损,缺损应能达到骨髓腔,但不可钻通对侧皮质(此方法为钻孔法);锯开组用骨锯在胫骨平台下外侧锯约3mm左右的缺损,缺损应能达到骨髓腔(此方法为钻开法)。术后2周和4周两个时间点每组取10只动物,检测大鼠胫骨的骨密度、骨灰重、拍摄胫骨X线片并进行胫骨病理切片观察,检测术后2周时骨Ca、P含量。结果:造模后2周,钻孔组和锯开组的骨密度,骨灰重,骨Ca、P含量均明显低于正常组(P<0.05或P<0.01)。钻孔组和锯开组胫骨X线片可见骨折线模糊,病变端密度增高,骨痂形成。钻孔组和锯开组病理切片中均可见新生骨小梁形成。造模后4周时,钻孔组、锯开组与正常组相比骨密度、骨灰重无统计学差异(P>0.05),锯开组胫骨X线片中骨痂较钻孔组明显。钻孔组和锯开组动物胫骨病理切片示骨小梁粗大,并逐步融合成板状骨,锯开组动物骨痂处较钻孔组有较多炎性细胞浸润。结论:钻孔法和锯开法均可建立大鼠胫骨缺损性骨折模型,并且在损伤量接近的情况下,两种模型的愈合时间和方式相近。钻孔法操作相对简单规范,损伤量较易控制,并且较少出现炎性细胞浸润和骨不愈合。     

基于数据挖掘的风寒湿痹方剂用药规律研究

目的探讨风痹、寒痹和湿痹方剂用药的配伍规律。方法筛选古籍中治疗风痹、寒痹和湿痹方剂,建立数据库,运用频次分析、假设检验与关联规则分析前30味高频药物,量化方剂性味归经并以此为变量对每类方剂进行聚类分析。结果共收集338首方剂,其中风痹122首、寒痹110首、湿痹106首。3类方剂中前30味高频药物中共有21味相同药物;均以补虚药使用频次最高,其次是风痹发散风寒药、寒痹温里药、湿痹渗湿化湿药。寒痹中肉桂、附子、当归、牛膝、羌活、芍药、黄芪和湿痹中茯苓、白术使用比例明显高于其他两类药物。3类方剂均以微温为主,其次是温、平。每类方剂按药性聚为5个主类时治则分类清晰。结论风、寒、湿痹3类方剂用药相互兼顾又各具特色,多种数据挖掘方法结合能够全面分析痹证治则治法的科学内涵。     

基于网络药理学预测中药复方治疗骨关节炎的分子机制

目的:探索骨关节炎(OA)治疗中药的核心配伍及其可能作用机制。方法:检索中国生物医学文献数据库中治疗OA的中药复方,采用Access 2003建立药物数据库,运用复杂网络方法建立药物配伍网络,以网络相对中心度较高的前5味药作为治疗OA的核心配伍。查找中药主要有效成分的人类活性靶蛋白和OA相关基因,采用通路分析软件(IPA)分析平台对中药及OA分子网络进行整合分析。结果:共纳入复方208首,牛膝、当归、甘草、杜仲和白芍构成核心配伍;去重后的靶蛋白共97个,OA相关基因365个。相关度评分较高的OA和中药分子网络功能均涉及结缔组织、骨骼和肌肉疾病、炎症和代谢性疾病。网络整合分析显示:TP53、PTPN1、RELA、DNMT1、NFκB1和VDR是OA和中药分子网络共同直接作用的分子;OA基因相关经典通路中,与中药靶蛋白相关度较高的通路有28条细胞免疫通路、17条凋亡通路、11条细胞生长与增殖通路。结论:中药核心配伍从机体免疫、凋亡、细胞增殖、代谢等多个方面综合发挥对OA的治疗作用。