先天性缺指（趾）-外胚层发育不良-唇/腭裂综合征的临床研究

目的探讨先天缺指（趾）-外胚层发育不良-唇/腭裂综合征的临床表现,诊断标准,遗传学特点及治疗措施。方法 2008年3月至2009年9月收集先天缺指（趾）-外胚层发育不良-唇/腭裂综合征女性患者一例,针对上唇缺损行手术修补,对其进行家系问卷和DNA检查,观察患者的临床表型和发病特点,分析可能的遗传方式。结果术后患者伤口愈合良好,无并发症发生,此例患者随访半年,术后明显改善了患者的外观,研究收集的这个典型病例未追溯到明显家族遗传史。结论收集的一个患者属典型的散发病例,通过对该患者的诊疗,证明治疗应是多学科的,主要是针对外观进行整形外科手术,临床的早期检查和正确诊断对后期治疗具有重要意义。产前诊断意义尤为重大。     

先天性小耳畸形全基因组甲基化谱的研究

目的 筛查先天性小耳畸形患者整个基因组存在甲基化水平异常的CpG岛和CpG位点及其相关差异基因,进而探讨基因甲基化水平的异常与先天性小耳畸形发病之间的关系.方法 收集2009年7月至2010年12月先天性小耳畸形患者术中废弃的残耳软骨组织为研究对象共50例(实验组),非耳畸形(耳外伤)患者的正常耳软骨组织34例作为对照.应用Nimblegen CpG启动子芯片,对实验组3例及对照组3例样本的基因组DNA进行全基因组28 226个CpG岛扫描,筛选存在CpG岛甲基化水平差异的基因;应用SpectroCHIP芯片对实验组47例,对照组31例的差异基因的CpG岛进行各个CpG位点的检测,筛选出存在甲基化水平差异的CpG位点.结果 实验组与对照组在全基因组范围内存在36个具有甲基化水平差异的CpG岛,其中有29个与已命名的29个基因相关.经t检验分析,在COL18A1、MYH14、RBMY1A1、ZIC3这4个差异基因的6个CpG位点,2组甲基化水平差异具有统计学意义(P＜0.05),实验组和对照组甲基化水平分别为:COL18A1_2_CpG_17 0.978 3±0.023 5、0.952 6±0.058 9;MYH14_CpG_17 0.960 0±0.041 4、0.928 4±0.0655;RBMY1A1_1_CpG_3.4 0.996 6±0.005 5、0.991 4±0.006 9;RBMY1A1_1_CpG_13 0.964 8±0.011 8、0.975 7±0.012 7;ZIC3_3_CpG_15 0.086 7±0.021 2、0.054 3±0.039 9; ZIC3_2_CpG_270.377 5±0.181 6、0.472 3±0.043 9.结论 初步建立了先天性小耳畸形甲基化谱,COL18A1、MYH14、RBMY1A1、ZIC3基因甲基化水平差异可能与小耳畸形的发病相关.     

药用植物多糖离子色谱分析的在线酶水解方法研究

目的建立药用植物多糖离子色谱分析的在线酶水解方法。方法以苦瓜多糖为例,将苦瓜粗多糖通过特异性酶水解成小分子单糖,小分子单糖透过渗析膜到达渗析液中,大分子化合物截留在膜外,达到消除基质的目的。然后用蠕动泵连接色谱六通阀在线抽取样品进入离子色谱分析。结果苦瓜多糖在线水解1 h左右时已水解完全,各组分峰分离效果良好。结论建立了一种用于植物多糖在线评价的模式及研究技术方法,为植物多糖的分析方法和推广应用提供实验基础。     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法分析苦瓜多糖组分的含量

目的用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测器联用技术建立苦瓜多糖组分的分析方法。方法以苦瓜为原料,用水提醇沉法提取苦瓜粗多糖,并对其工艺进行探讨。苦瓜粗多糖经超声波酸水解处理后,以12 mmol/L NaOH溶液为淋洗液,流动相流速为1.0mL/min,CarboPaC PA10(250mm×4mm i.d.)为分析柱,进样量为25μL进行分析测定。结果苦瓜多糖中主要含有阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖,各种单糖组分在一定浓度范围内线性关系良好,能很好地分离及准确测定。结论该方法操作简便,灵敏度高,重现性好。     

先天性小耳畸形microRNA及mRNA表达谱的变化及关键靶基因的筛选

目的 筛查先天性小耳畸形患者整个基因组存在表达水平异常的microRNAs （miRNAs）和mRNAs,从中找出关键靶基因,进而探讨关键靶基因表达水平的异常及其调控网络与先天性小耳畸形发病之间的关系。方法 收集先天性小耳畸形患者的残耳软骨组织为研究对象,以同一患者的健侧正常耳软骨组织作为自身对照。选用Exiqon miRCURY LNA^TM microRNA Array芯片及Arraystar Human mRNA/LncRNA Microarray芯片,对实验组3例及对照组3例样本的基因组miRNAs和mRNAs表达水平进行扫描,利用差异表达的倍数变化筛选存在表达水平差异的差异miRNAs和mRNAs。通过miRanda、miRDB、miRWalk、RNA22、Targetscan这5个数据库进行检索,预测差异miRNAs调节的靶基因。将预测靶基因与差异mRNAs对应的基因进行交叉对比,寻找同时存在miRNA和mRNA表达水平差异的关键靶基因及其对应的关键miRNAs。结果 本研究筛选出24个具有表达水平差异的miRNAs,同时筛选出515个表达水平差异的mRNAs;将预测到的miRNAs调节的靶基因与mRNA表达谱中的差异基因进行交叉对比,得到对应的miRNA和mRNA表达水平均存在显著性差异的关键靶基因6个（CAST、MLL、MMP13、OTUD4、PDE5A、TGOLN2）。结论 初步建立了先天性小耳畸形的miRNA表达谱和mRNA表达谱,找到了先天性小耳畸形表达异常的关键靶基因;初步建立了1个与miRNA以及mRNA表达水平相关的调控网络,有利于进一步探讨关键靶基因及其调控网络与先天性小耳畸形发病的关系。     

残耳软骨细胞与脂肪干细胞共培养体内构建软骨的实验研究

目的验证残耳软骨细胞与脂肪来源的间充质干细胞(Adipose derived stem cells,ADSCs)共培养,体内构建软骨的可行性。方法分离培养同一先天性小耳畸形患者来源的残耳细胞及脂肪干细胞。24只裸鼠随机分为4组:①实验组,接种残耳软骨细胞及脂肪干细胞,两种细胞以1∶1比例混合,细胞浓度为5.0×107 cells/mL;②对照组1,接种单纯残耳软骨细胞,细胞浓度为5.0×107 cells/mL;③对照组2,接种单纯ADSCs,细胞浓度为5.0×107 cells/mL;④对照组3,接种单纯残耳软骨细胞,细胞浓度为2.5×107 cells/mL。每组接种6只裸鼠,每只接种0.2 mL。体内培养10周后取材。通过对新生组织的大体观察、测量湿重、糖胺多糖含量测定、组织学及免疫组化染色等方法对各组新生软骨进行比较。结果实验组、对照组1与对照组3产生不同组织量的软骨样组织,对照组2形成纤维样组织;实验组平均湿重及糖胺多糖含量达到对照组1的88%以上,对照组3平均湿重低于对照组1的40%;HE染色示实验组、对照组1与对照组3的标本均有软骨陷窝形成,对照组2未见软骨陷窝形成;Ⅱ型胶原免疫组化染色示实验组、对照组1与对照组3均可见Ⅱ型胶原表达;对照组2未见Ⅱ型胶原表达。结论体内共培养条件下,残耳软骨微环境可有效促进脂肪干细胞向软骨方向分化,残耳软骨细胞与脂肪干细胞共培养体内构建软骨具备可行性。     

MYH14基因在先天性小耳畸形疾病中的表达研究

目的检测MYH14基因在先天性小耳畸形中的表达情况,进而探讨基因表达的异常与先天性小耳畸形发病之间的关系。方法收集先天性小耳畸形患者的残耳软骨组织及细胞为研究对象,非耳畸形患者的正常耳软骨组织及细胞作为对照。分别提取RNA,利用实时荧光定量PCR技术对各组的基因表达情况进行检测。结果软骨组织实验组与对照组在MYH14基因的表达存在差异,且具有统计学意义。结论 MYH14基因的表达异常可能与小耳畸形的发病相关。