α-synuclein C端截短体的胞内分布

目的研究α-synuclein的4种C端截短体胞内的表达分布情况。方法PCR法获得α-synuclein的4个C端截短体基因片段,分别克隆入pEGFP-N1载体,并转染MN9D细胞、PC12细胞及SH-SY5Y细胞,于Confocal荧光显微镜下观察α-synuclein 4个C端截短体胞内的表达分布情况。结果α-synuclein的不同C端截短体胞内分布明显不一致,表现为随着C端部分的增长,α-synuclein截短体向核分布的趋势增强。结论α-synuclein的胞内定位与其C端密切相关,并且整个C端序列都可能在其核分布中发挥重要作用。     

过表达α-synuclein的细胞毒性及对损伤性刺激的影响

目的 构建过表达α-synuclein的细胞模型,研究过表达α-synuclein的细胞毒性作用及其分子机制,为揭示帕金森病(PD)可能的发病机制和寻找治疗药物潜在靶点提供依据.方法 脂质体法转染及过表达α-synuclein稳定株的构建,MTT法、PI染色、荧光显微镜观察用于检测过表达α-synuclein对细胞活性和分化、撤血清及MPP~+损伤的影响,荧光素酶报告基因检测和Western印迹检测用于研究过表达α-synuclein对NF-κB信号通路及相关蛋白的影响.结果 过表达α-synuclein对细胞的分化表型无明显影响,但能明显降低DA能细胞存活率,并显著增加撤血清损伤及MPP~+毒性对细胞的损伤程度.过表达α-synuclein能够明显加重MPP~+对NF-κB转录激活活性的抑制作用,其机制可能与抑制IκB-α的磷酸化有关.结论 基于遗传背景与环境因素相结合的PD研究模型能够更好地拟合其病理过程,更加科学合理.NF-κB信号通路活性的抑制可能是PD发病的又一新机制,针对该通路上相关蛋白的深入研究可能成为PD治疗药物开发的新型研究方向.     

α-synuclein过表达下调Nurr1转录活性的机制研究

目的研究α-synuclein过表达对多巴胺能神经元核受体相关因子-1(Nurr1)转录活性的影响及作用机制。方法 PC12细胞转染α-synuclein质粒后,采用双荧光素酶检测方法和Western blot方法分别检测Nurr1转录活性及蛋白水平变化情况。同时检测调控Nurr1转录活性的GSK3β/β-catenin通路中相关信号蛋白水平变化。结果与对照组相比,α-synuclein过表达可明显降低Nurr1转录活性,但对Nurr1蛋白水平无明显影响。通过检测GSK3β/β-catenin中相关信号蛋白发现,α-synuclein过表达可明显降低GSK3β(Ser9)磷酸化水平和β-catenin蛋白水平。结论α-synucle-in可能通过调控GSK3β/β-catenin通路下调Nurr1转录活性。     

α-Synuclein与MPP^＋细胞毒性协同作用的研究

目的模拟与帕金森病发病密切相关的遗传因素与环境因素,研究α-synuclein与MPP^＋对细胞的毒性作用。方法RT—PCR方法扩增α-synuclein基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染;Western blot,MTT方法,双报告基因检测法和显微镜观察,研究过表达α-synuclein和MPP^＋对细胞存活率及NFκB信号通路的影响。结果MPP^＋和α-synuclein均能够显著抑制细胞存活率,二者共同作用时抑制作用更加明显;而且研究发现α-synuclein能够抑制由转录因子NFKB介导的基因表达,MPP^＋能够进一步增强其抑制作用。结论在遗传背景发生改变时,细胞对外界环境中的毒素更加敏感,提示帕金森病的发病存在某种遗传易患性.     

柴胡提取组分抗抑郁作用的研究

目的 观察柴胡提取组分( CHB)的抗抑郁作用.方法 采用小鼠强迫游泳、悬尾两种“行为绝望”抑郁动物模型和利血平拮抗模型,观察CHB对小鼠游泳不动时间、悬尾不动时间以及利血平诱导的体温降低、眼睑下垂、运动不能的影响.结果 CHB 100,200 mg/kg均能不同程度地缩短小鼠强迫游泳和悬尾不动时间,能拮抗高剂量利血平致小鼠体温下降,改善利血平诱导的小鼠眼睑下垂,并呈现一定的量效关系.结论 CHB具有一定的抗抑郁作用.     

糖原合成酶激酶3β转基因细胞模型的建立

目的建立GSK3β(糖原合成酶激酶3β)转基因细胞模型。方法RT-PCR方法扩增GSK3β基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染PC12细胞;Western blot验证稳定株;染色质染色法和流式细胞术检测细胞凋亡;MTT法确定细胞接种条件。结果成功获得GSK3β融合载体;并建立GSK3β转基因细胞株;转基因组中GSK3β蛋白表达量明显高于对照组,染色质明显浓染甚至出现凋亡小体,去血清后该变化更加明显;GSK3β转基因组早期凋亡的细胞含量比对照组明显增多;确立了转基因细胞筛选化合物的接种条件。结论成功建立GSK3β转基因细胞模型。     

帕金森病模型大鼠中脑α-突触核蛋白增加

目的观察鱼藤酮对大鼠中脑α-突触核蛋白(α-SYN)的影响。方法SD大鼠长期低剂量皮下注射1.0mg·kg-1·d-1的鱼藤酮,建立帕金森病(PD)动物模型。采用旷场实验评价动物行为学改变,观察大鼠5min的活动情况。免疫荧光化学方法检测中脑部位TH阳性神经元数目的变化。免疫组织化学和Western blot方法检测中脑部位α-SYN的蛋白水平的改变。结果同对照组相比,鱼藤酮实验组动物5min的正中格停留时间明显延长(P<0.05),方格穿行次数明显减少(P<0.05),竖起时间和次数明显减少(P<0.01);中脑部位TH阳性神经元数目明显减少(P<0.05),α-SYN蛋白水平明显增加(P<0.05)。结论给予鱼藤酮能够使SD大鼠出现运动障碍,中脑部位TH阳性神经元数目减少,该现象可能与大鼠中脑部位α-SYN蛋白水平增加有关。     

远志皂苷单体PTM-16的促智作用及机制的初步研究

目的：研究从远志三萜式皂苷中分离得到的单体PTM-16对小鼠学习记忆能力的影响，并对其作用机制进行初步探讨。方法：应用通道式水迷宫，测试小鼠空间学习记忆能力。细胞外记录低频刺激（1／30Hz）引起的海马齿状回群峰电位（population spike，PS）。应用Western Blotting的方法检测PC12细胞内ERK，CREB及SynapsinⅠ等蛋白的磷酸化水平。     

α-Synuclein与MPP+细胞毒性协同作用的研究

目的 模拟与帕金森病发病密切相关的遗传因素与环境因素,研究α-synuclein与MPP+对细胞的毒性作用.方法 RT-PCR方法扩增α-synuclein基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染;Western blot,MTT方法,双报告基因检测法和显微镜观察,研究过表达α-synuclein和MPP+对细胞存活率及NFκB信号通路的影响.结果 MPP+和α-synuclein均能够显著抑制细胞存活率,二者共同作用时抑制作用更加明显;而且研究发现α-synuclein能够抑制由转录因子NFκB介导的基因表达,MPP+能够进一步增强其抑制作用.结论 在遗传背景发生改变时,细胞对外界环境中的毒素更加敏感,提示帕金森病的发病存在某种遗传易患性.     

Gap junction dysfunction in the prefrontal cortex induces depressive-like behaviors in rats

Growing evidence has implicated glial anomalies in the pathophysiology of major depression disorder(MDD).Gap junctional communication is a main determinant of astrocytic function.However,it is unclear whether gap junction dysfunction is involved in MDD development.This study investigates changes in the function of astrocyte gap junction occurring in the rat prefrontal cortex(PFC) after chronic unpredictable stress(CUS),a rodent model of depression.Animals exposed to CUS and showing behavioral deficits in sucrose preference test(SPT) and novelty suppressed feeding test(NSFT) exhibited significant decreases in diffusion of gap junction channel-permeable dye and expression of connexin 43(Cx43),a major component of astrocyte gap junction,and abnormal gap junctional ultrastructure in the PFC.Furthermore,we analyzed the effects of typical antidepressants fluoxetine and duloxetine and glucocorticoid receptor(GR) antagonist mifepristone on CUS-induced gap junctional dysfunction and depressive-like behaviors.The cellular and behavioral alterations induced by CUS were reversed and/or blocked by treatment with typical antidepressants or mifepristone,indicating the mechanism of their antidepressant action may involve the amelioration of gap junction dysfunction and the the cellular changes may be related to GR activation.We then investigated the effects of pharmacological gap junction blockade in the PFC on depressive-like behaviors.The results demonstrate that carbenoxolone(CBX) infusions induced anhedonia in SPT,and anxiety in NSFT,and Cx43 mimetic peptides Gap27 and Gap26 also induced anhedonia,a core symptom of depression.Together,this study supports the hypothesis that gap junction dysfunction contributes to the pathophysiology of depression.